表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。

1株多谱系毒株重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定和遗传变异分析

从发病猪肺脏组织中检出猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),将毒株命名为GXGG202007。对该毒株进行了病毒的分离以及全基因组测序、遗传演化分析和重组分析。结果显示GXGG202007毒株全基因组为15517个核苷酸(nt);基于ORF5、nsp2和全基因组构建的系统发育树均显示该毒株处于谱系3分支;同源性分析表明其与QYYZ毒株的相似性最高(91.4%),与欧洲株Lelystad-virus(LV)相似性最低(60.3%);通过多种生物信息学软件的重组分析显示,该毒株存在4个重组事件,是1株以谱系3代表毒株QYYZ为骨架,谱系8毒株和谱系5毒株提供重组片段的多谱系重组毒株,其中与HP-PRRSV-like毒株和RespPRRS MLV-like毒株可能分别在42~2008,6884~8549,13061~13853,8550~9523 nt处发生了重组,重组断点位于基因组的nsp2、nsp9和ORF3中。