广西壮族自治区23个非综合征型耳聋家系分子遗传病因分析

目的:分析广西地区23个非综合征型耳聋家系耳聋基因的突变特点,了解广西地区该疾病的分子流行病学特点。方法:研究对象为广西地区23个非综合征型耳聋家系中的患者及其血缘家属共66例(家系组),另取散发NSHL患者及血缘亲属共167例作为对照组,用遗传性耳聋基因芯片联合DNA测序方法检测及分析家系组先证者、耳聋者、正常听力者的常见耳聋基因突变情况,分析广西地区可能的多发位点及罕见位点。结果:家系组常见耳聋基因突变率(31.82%)高于对照组(11.38%),其中GJB2突变21.21%,SLC26A4突变9.09%均高于对照组(GJB2 5.99%、SLC26A4 3.59%)。耳聋家系的先证者、耳聋患者、听力正常的亲属耳聋基因检出率均高于对照组(均<0.05)。进行常见耳聋基因全序列分析的家系中检测到SLC26A4IVS11+47T﹥C、1548insC和GJB2 235delC/109A>G 3个罕见的突变位点。结论:GJB2和SLC26A4是广西地区非综合征型耳聋家系最常见的突变基因,家系分析有助于判断突变与疾病的关系。

舒芬太尼复合氟比洛芬酯PCIA对老年肺癌根治术患者细胞免疫功能的影响

目的探讨舒芬太尼复合氟比洛芬酯PCIA对老年肺癌根治术患者细胞免疫功能的影响。方法择期行肺癌根治术患者40例，年龄65-72岁，随机均分为两组：舒芬太尼复合氟比洛芬酯组（SF组）：舒芬太尼75μg＋氟比洛芬酯200mg；舒芬太尼组（S组）：舒芬太尼150μg。两组均用生理盐水稀释至200ml，镇痛泵参数设置：持续输注量4．0ml／h、PCA剂量0．5ml、锁定时间15min。记录术后6、12、24、48h的疼痛VAS评分、Ramsay镇静评分和嗜睡、恶心呕吐、皮肤瘙痒、呼吸抑制、血压下降、消化道出血等不良反应。分别于术前、术后1、7d测定外周静脉血CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋和自然杀伤（NK）细胞水平。结果两组患者术后不同时点VAS、Ramsay评分差异无统计学意义。与术前比较，两组术后1d的CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋和NK细胞水平明显降低，术后7d的NK细胞水平明显降低（P〈0．05）。与S组比较，SF组术后1d的CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋水平，术后1、7d的NK细胞水平明显升高（P〈0．05）。两组患者不良反应差异无统计学意义。结论舒芬太尼复合氟比洛芬酯PCIA可提高老年肺癌根治术患者术后CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋和NK细胞水平，其效果优于单纯使用舒芬太尼。

119例非小细胞肺癌中CCR9的表达及其预后分析

目的：探讨 CC 族趋化因子受体9（ C-C chemokine receptor 9, CCR9）在非小细胞肺癌（ non-small cell lung cancer, NSCLC）中的表达及其预后判断的价值。方法应用免疫组化PV-9000两步法检测119例NSCLC及相应癌旁正常肺组织中CCR9蛋白的表达,并分析CCR9表达与临床病理特征及患者总生存率的关系。结果 CCR9在NSCLC中的阳性率（54.6%）明显高于癌旁正常肺组织（10．1%）（ P 〈0．05）；CCR9表达与 NSCLC 病理组织类型、淋巴结转移、p-TNM 分期有关（ P 〈0．05）。 Kaplan-Meier生存分析显示肺癌中CCR9蛋白表达与患者术后总生存率呈负相关（Log-rank=9．917,P=0．002）。单因素生存分析显示,淋巴结转移、p-TNM分期、CCR9蛋白表达与NSCLC患者术后总生存率有关（ P〈0．05）。多因素生存分析显示,CCR9是NSCLC患者术后总生存率的独立预测因素（RR=0．447,95%CI：0．201～0．993,P〈0．05）。结论 CCR9阳性患者预后较差,其可作为NSCLC患者预后判断的新生物学标志物。

舒芬太尼硬膜外超前镇痛对妇科手术患者T细胞亚群CD4^+、CD8^+的影响

超前镇痛（preemptive analgesia）是在伤害性刺激作用于机体之前采取一定的措施．防止中枢或外周神经敏感化．减少或消除伤害引起的疼痛。本研究拟通过妇科手术患者应用舒芬太尼硬膜外超前镇痛，探讨其对T细胞亚群CD4＋、CD8＋的影响，观察术后镇痛和改善患者免疫功能的效果，评价舒芬太尼超前镇痛的临床应用价值。

EB病毒抗体筛查对体检人群早期鼻咽癌的诊断价值

目的探讨3种EB病毒抗体[R反式激活因子(Rta)-IgG、早期抗原(EA)-IgA和病毒衣壳抗原(VCA)-IgA]筛查对体检人群早期鼻咽癌的诊断价值。方法联用Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA对22651例体检人群进行筛查,有一项及以上指标阳性者判定为EB病毒血清学阳性。随访观察EB病毒血清学阳性者的临床表现,对有可疑病灶者进行病理活检及影像学检查以确诊早期鼻咽癌。分析不同性别、不同年龄体检者的Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA阳性检出率,以及EB病毒血清学阳性者Rta-IgG、VCA-IgA和EA-IgA三联检的阳性分布情况。根据EB病毒抗体情况对体检人群EB病毒血清学阳性者进行分层评估:Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA 3项检测指标均阳性为高危组,其中2项指标阳性为中危组,仅1项指标阳性为低危组。结果22651例体检者中共筛查出EB病毒阳性1631例,总阳性率为7.20%,其中女性阳性率(8.04%)高于男性(6.62%)(P<0.05)。不同年龄组体检者Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA的阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05),60岁以后以上3种血清学指标的阳性检出率均明显升高。在单项指标阳性中,VCA-IgA的阳性检出率较高(56.65%),且30~40岁、51~60岁和61~70岁年龄组女性的VCA-IgA阳性检出率高于男性(P<0.05);在不同组合指标阳性中,Rta-IgG+VCA-IgA的阳性检出率较高(7.91%)。鼻咽癌低、中、高危组分别有1399例、220例、12例,分别追踪到0例、15例、11例鼻咽癌,其中Rta-IgG+VCA-IgA双阳性筛检出12例,3种抗体均阳性筛检出11例。结论联合检测Rta-IgG、EA-IgA和VCA-IgA可从体检者中有效筛查出EB病毒阳性人群,其中具有双阳性或三阳性人群的患癌风险较高,重点随访该类人群,有助于提高鼻咽癌早诊早治效果。

急性脑梗死患者血清脂联素、过氧化物酶体增殖物活化受体γ、氧化型低密度脂蛋白及单核细胞CD36、CD54表达的关系

目的探讨急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者血清脂联素、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)、氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)及单核细胞CD36、CD54表达的特点,并分析其相关性。方法选择ACI患者(ACI组)31例、健康体检者(对照组)27例,检测血脂,ELISA方法测定血清脂联素、PPARγ、ox-LDL浓度,流式细胞技术检测外周静脉血单核细胞CD36、CD54表达。结果 ACI组血清脂联素、PPARγ、HDL-C低于对照组,ox-LDL、CD36、CD54、TG、LDL-C高于对照组(均P<0.01)。相关分析显示,血清脂联素水平与PPARγ、ox-LDL呈正相关(r=0.939、0.934,P<0.01),PPARγ与ox-LDL呈正相关(r=0.945,P<0.01),CD36与CD54呈正相关(r=0.760,P<0.01)。结论 ACI患者血清脂联素、PPARγ降低,ox-LDL、CD36、CD54升高,血脂异常,其相互网络调控是相互促进、相互制约的,在ACI发生发展中起重要作用。

一种可靠的大鼠肝星状细胞分离及培养方法

目的 探讨一种高效、经济、稳定的肝星状细胞的分离方法,为肝纤维化研究提供细胞模型.方法 应用链霉蛋白酶、胶原酶灌流,以Nycodenz为分离介质,采用密度梯度离心法分离大鼠的肝星状细胞.结果 肝星状细胞的获得率为（3.2±0.67）×107/只、存活率为90%以上.结论 该法是一种较理想的分离肝星状细胞的方法.

靶向Pokemon基因shRNA重组质粒的构建及其在CNE2细胞的筛选

目的:构建3个靶向Pokemon基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,在鼻咽癌细胞株CNE2中筛选出干扰效果最佳的载体。方法:依据shRNA设计原则,针对Pokemon mRNA序列设计并化学合成3对RNA干扰序列,经酶切、连接和转化,插入pRNAT-U6.1/Neo质粒,经DNA测序验证。脂质体介导shRNA重组质粒及空白质粒转染CNE2细胞,荧光定量PCR和Western blot检测Pokemon在mRNA和蛋白水平的表达,转染空白质粒的CNE2作为阴性对照,未加处理的CNE2作为空白对照。结果:DNA测序结果显示shRNA片段与设计序列一致;转染各重组质粒后的CNE2细胞,与阴性对照相比,Pokemon基因在mRNA和蛋白水平均有下调表达,其中以shRNA2重组质粒干扰Pokemon表达的作用最显著。结论:筛选出高效干扰Pokemon表达的重组质粒shRNA2,为研究Pokemon基因在鼻咽癌发生发展中的作用提供有效的研究工具。

2型糖尿病伴牙周病患者牙周干预后龈下菌斑中牙周致病菌的比较分析

目的观察2型糖尿病伴牙周病患者牙周干预后临床指标的变化和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Pg)的检出量变化,初步探讨龈下微生物的检出量与牙周干预疗效之间的关系。方法根据随机数字表将确诊为2型糖尿病并伴有牙周病的患者分为实验组和对照组,记录牙周指数。实验组进行牙周干预并取龈下菌斑检测,对照组仅取龈下菌斑进行检测。6个月后复查。观察临床指标和牙龈卟啉单胞菌检出量的变化。结果基线时两组的临床指标和Pg检出量比较差异均无统计学意义(P均>0.05),6个月时,实验组临床指标值较对照组显著降低(P<0.01),Pg检出量降低,但与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。经过牙周干预治疗后,实验组出血指数(SBI)和附着丧失(AL)值均减小,SBI和AL值变化差异均具有统计学意义(P<0.05);而对照组基线和6个月的临床指标值变化差异均无统计学意义。两组Pg的PCR定量检测结果在基线和6个月时变化差异均无统计学意义(P>0.05)。结论牙周干预治疗对改善牙周指数有良好效果,但是难以彻底清除牙周致病菌。

急性脑出血患者外周血单核细胞CD36、CD54表达的临床意义

目的观察急性脑出血(ICH)患者外周血单核细胞CD36、CD54表达的变化及外周血血常规的特点。方法选择急性ICH患者(ICH组)31例及健康体检者(对照组)27例,检测血常规,用流式细胞技术检测外周血单核细胞CD36、CD54表达。结果与对照组比较,ICH组CD54表达率、白细胞计数、中性粒细胞比例均升高(P<0.01)。发病72 h ICH组CD36表达率,显著高于对照组(P<0.01)。治疗1周后外周血单核细胞CD54表达率仍明显高于对照组(P<0.01)。结论 ICH患者外周血单核细胞CD54表达上调,可能与白细胞计数升高共同参与ICH发生、发展,可作为ICH预后观察指标。

EB病毒血清学指标筛查鼻咽癌的研究进展

鼻咽癌在我国华南地区高发,早诊早治可提高鼻咽癌患者的生存率,因此提高该地区人群早期鼻咽癌检出率十分关键。EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染鼻咽上皮细胞是导致鼻咽癌发生的重要因素,EBV多种基因分别表达R反式激活因子(R transactivator,Rta)、Z反式激活因子(Z transactivator,Zta)、早期抗原(early antigen,EA)和病毒衣壳抗原(viral capsid antigen,VCA)以及EB病毒核抗原1(EBV nuclear antigen 1,EBNA1)等多种蛋白,由此在人体血清中产生以免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)为主的抗体,其中Rta-IgG、Zta-IgG/IgA、EA-IgA、VCA-IgA、EBNA1-IgA/IgG为鼻咽癌的特异标志物。该文综述相关基因及其表达蛋白的生物学特性,以及应用这些血清学标志物筛查鼻咽癌高发区人群的诊断价值,为开展早期筛查鼻咽癌研究提供依据。

DLX3和Syncytin-1 mRNA在妊娠期糖尿病患者胎盘钙化组织中的表达及意义

目的探讨妊娠期糖尿病患者(GDM)胎盘钙化组织中同源盒转录因子3(DLX3)和Syncytin-1 mRNA的表达及意义。方法选择2015年9月至2018年9月在广西壮族自治区人民医院产科收治的GDM患者30例作为观察组,另选择同期健康孕产妇30名作为对照组。比较两组的一般临床资料及胎盘钙化组织中DLX3和Syncytin-1 mRNA的表达水平(采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测),探讨GDM发生的影响因素。结果观察组孕期体重增加量为(11.15±4.03)kg,对照组为(13.23±2.98)kg,两组比较差异有统计学意义(t=2.069,P=0.044)。观察组出现巨大儿3例(10.00%),对照组1例(3.33%),两组比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.268,P=0.605)。观察组DLX3 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),但两组Syncytin-1 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的DLX3 mRNA表达水平是促进GDM发生的危险因素(OR=8.142,P=0.004)。结论DLX3是促进GDM发生的危险因素,其可能参与了GDM及胎盘钙化的发生。

人短串联重复序列相关技术及其在法医学中的应用研究进展

由于短串联重复片段(STR)在人类基因中具有广泛性和多态性的特征,已成为了主要的遗传标记,随着其检测技术不断进步,已广泛应用于法医学领域的研究中。该文主要介绍STR特征、相关技术及其在法医学中应用的研究进展。

DNA修复基因XRCC1 Arg194Trp Arg280His和Arg-399Gln多态性与前列腺癌相关性的Meta分析

目的探讨DNA修复基因X线修复交叉互补因子1(XRCC1)主要单核苷酸多态性与前列腺癌易感性的关系。方法在MEDLINE、EMBASE和OVID数据库上检索文献,收集及提取符合纳入标准的以XRCC1密码子194、280、399多态性与前列腺癌易感性为内容的病例对照研究文献,应用Stata统计软件进行Meta分析,比值比(ORs)及其95%可信区间(95%CI)评价关联强度;应用SPSS软件分析吸烟与前列腺癌关系,OR?评价其相对危险度。结果 XRCC1 399 Gln/Gln和XRCC1 280 Arg/His与前列腺癌的发病风险有关(Gln/Gln vs Arg/Arg:OR?=1.27,95%CI=1.02～1.59;Arg/His vs Arg/Arg:OR?=1.66,95%CI=1.09～2.52),尤其在亚组分析中亚洲人的Gln/Gln明显增加了前列腺癌的发病风险(OR?=1.52,95%CI=1.18～1.96);Arg194Trp与前列腺癌的发病风险无明显关联。吸烟是前列腺癌的危险因素(χ2=13.974,P=0.000,OR?=1.22)。结论 XRCC1 399 Gln/Gln和280 Arg/His可能与前列腺癌的易感性相关。

采用反复照射方法建立放射抗拒性鼻咽癌细胞系亚株

目的为成功建立放射抗拒性鼻咽癌细胞系亚株,并探讨鼻咽癌放射抗拒机理。方法采用类似临床放疗的照射模式反复照射从人鼻咽癌细胞系CNE-3中分离出具有放射抗拒性的新细胞系亚株。结果采用类似临床放疗的照射模式反复照射分离出具有放射抗拒性的新细胞系亚株CNE-3R,,其在传代3个月后仍表现出较稳定的放射抗拒性,其SF2值均>0.5。结论采用该研究方法能成功建立放射抗拒性鼻咽癌细胞系亚株,为研究鼻咽癌放射抗拒机理提供了必要的工具。

SNPs检测方法在不同种族遗传差异分析的应用

作为人类可遗传变异中最常见形式,人类基因组单核苷酸多态性（SNPs）代表了种族间的遗传差异。随着SNPs检测技术的快速发展,专家们在SNPs的种族遗传差异的意义及其应用研究中取得了很大进展。本文对SNPs的检测方法及其在种族遗传差异分析方面的应用作简要综述。

正常成年雄性食蟹猴部分免疫功能指标观测

目的提供实验用正常雄性食蟹猴血液免疫功能的部分指标参考值。方法选取人工饲养成年雄性食蟹猴36只,体质量3.5±0.5 kg,检测其外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)、补体(C3、C4)以及γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-5(IL-5)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、白介素-18(IL-18)等细胞因子。结果获得了正常成年雄性食蟹猴细胞免疫、体液免疫部分相关正常参考值,结果表明正常成年雄性食蟹猴的血液学、T细胞亚群、免疫球蛋白、细胞因子和补体等指标均比较稳定。结论提供了正常成年雄性食蟹猴血液免疫学相关的背景数据,为其在免疫领域的研究应用提供参考。

脂肪干细胞及其衍生物促进糖尿病足再生修复的研究进展

随着人们生活条件的改善和饮食结构的改变,我国糖尿病患者数量逐年增多。1980年的流行病学调查显示,我国糖尿病的患病率约为0.67%[1]。随后的40年间,我国糖尿病患者总数不断上升,2021年的数据显示我国糖尿病患者总数已增长至1.4亿例,相较于2011年的9000万例,增幅达56%,位居全球第一,形势严峻[2]。

食蟹猴免疫抑制模型建立初探

目的:探讨建立食蟹猴免疫抑制模型并对其进行生物学相关指标的评价。方法:以食蟹猴为造模动物,选取环磷酰胺、硫唑嘌呤、强的松、他克莫司、霉酚酸酯、环孢素等六种免疫抑制剂进行构建食蟹猴免疫抑制模型,通过物理观察和生化指标检测两方面对食蟹猴免疫抑制模型的构建进行评估,并主要选择了血液学常规、T淋巴细胞亚群、肝肾功能等指标对食蟹猴的免疫抑制状况进行观察。结果:(1)血常规检测中:在六种免疫抑制剂中,环磷酰胺、他克莫司和霉酚酸酯给药后1~3周内,白细胞计数、中性粒细胞计数均显著下降(P<0.05,P<0.01),淋巴细胞计数无明显差异,但淋巴细胞比例呈显著性升高(P<0.05,P<0.01)。环孢素A和硫唑嘌呤给药后血液学大部分指标无显著差异。而强的松给药后白细胞计数不降反升(P<0.05,P<0.01)。(2)T淋巴细胞亚群检测中:六种免疫抑制剂中,环磷酰胺和他克莫司给药后的T细胞亚群变化趋势较为稳定,均表现为T淋巴细胞比例显著升高(P<0.05,P<0.01)、Th细胞比例显著降低(P<0.05,P<0.01)、Tc细胞比例显著升高(P<0.05,P<0.01)。(3)肝肾功能检测中:他克莫司免疫抑制剂给药后1~2周内ALT水平显著升高(P<0.01),2周后ALT逐渐回落。而环磷酰胺、硫唑嘌呤、霉酚酸酯和他克莫司给药至2~3周,均导致AST水平显著升高(P<0.01)。结果说明,这几种免疫抑制剂均会导致食蟹猴肝功能出现阶段性地轻度损害。此外,检测结果表明,六种免疫抑制剂均会导致Crea和Urea水平发生变化,但Crea和Urea指标均分别在正常59~104μmol/L,3.6~9.5μmol/L范围内,表明六种免疫抑制剂对肾功能均无影响作用。结论:成功建立了食蟹猴免疫抑制模型;六种免疫抑制剂均能各自呈现出程度不等、指标不同的免疫抑制效应;环磷酰胺和他克莫司两种药物对食蟹猴进行免疫干预后,可呈现出较为确定、稳定的免疫抑制效应,是建立免疫抑制食蟹猴模型较为适宜的造模剂。

基质细胞衍生因子1α诱导脂肪来源干细胞迁移促进糖尿病缺血下肢肌肉修复的实验研究

背景与目的:基质细胞衍生因子1α (SDF-1α)是一种定向诱导细胞迁移的趋化因子,研究显示,间充质干细胞(MSCs)在受损组织中可以沿着SDF-1梯度迁移到损伤部位并参与组织修复,然而目前尚缺乏SDF-1α诱导脂肪来源干细胞(ASCs)对糖尿病缺血下肢进行组织修复的体内研究。因此,本研究探讨SDF-1α促进大鼠脂肪来源干细胞(r ASCs)向糖尿病大鼠缺血下肢肌肉组织迁移及对组织修复的影响。方法:取SD大鼠脂肪组织分离培养rASCs,行细胞形态观察,鉴定成脂、成软骨及成神经分化能力,并使用带绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒转染和标记r ASCs。将大鼠用STZ法构建糖尿病模型,并结扎大鼠的右下肢股动脉造成下肢缺血后,随机分为两组,通过尾静脉向两组大鼠体内注射r ASCs,其中一组在患肢中段部位肌肉处注射SDF-1α蛋白(SDF-1α+rASCs组),另一组则用同样方式注射等量磷酸盐缓冲溶液(rASCs组)。治疗后的第1、2周行大鼠双下肢血流量检测,计算及比较各组大鼠的缺血下肢-健侧下肢血流比值。在第4周时处死大鼠,取缺血部位的肌肉组织行HE染色,观察不同治疗方法组中肌肉组织的排列情况。以因子Ⅷ(FⅧ)作为微血管的标记,行免疫荧光染色,荧光显微镜下观察组织中FⅧ及GFP的分布情况。结果:所培养的细胞呈长梭形或多角形样生长,并可向脂肪、软骨、神经细胞多向分化,鉴定为rASCs。糖尿病下肢缺血大鼠下肢血流量检测结果显示,在治疗后第1周SDF-1α+rASCs组的缺血下肢-健侧下肢血流比值明显高于r ASCs组(0.33±0.03 vs. 0.26±0.02,P=0.016),治疗后第2周可发现上述差异进一步扩大(0.60±0.02 vs. 0.47±0.01,P=0.050)。HE染色结果显示,在治疗后第4周SDF-1α+rASCs组大鼠的肌肉组织排列更为整齐。免疫荧光结果显示,SDF-1α+rASCs组的骨骼肌组织中r ASCs的数量在治疗后第4周明显高于rASCs组(P<0.05),还能观察到红色荧光(FⅧ)与绿色荧光(rASCs)的重叠。结论:通过提高缺血部位的SDF-1α的浓度能够有效增加迁移至患处的rASCs数量,从而获得优化r ASCs改善患肢血流灌注,促进肌肉组织修复的明显效果。此外,rASCs分化为血管内皮细胞可能是r ASCs促进缺血肌肉修复的关键机制之一。