西番莲茎叶提取物对热应激下蛋鸡产蛋性能、蛋品质和抗氧化性能的影响研究

试验旨在了解西番莲茎叶提取物对夏季热应激下蛋鸡产蛋性能、蛋品质和抗氧化性能的影响。试验于夏季选取210日龄海兰褐蛋鸡240只,随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组4组,对照组饲喂基础日粮,低、中、高剂量组分别在基础日粮中添加250、500、1000 mg/kg的西番莲茎叶提取物,试验期42 d。结果显示,低、中、高剂量组蛋重均显著高于对照组(P<0.05),高剂量组产蛋率显著高于对照组(P<0.05),高、中剂量组平均日采食量显著高于对照组(P<0.05),高剂量组料蛋比显著低于对照组(P<0.05)。高、中剂量组鸡蛋的蛋白高度和哈夫单位显著高于对照组(P<0.05),高剂量组鸡蛋的蛋壳厚度显著高于对照组(P<0.05);各组蛋黄重、蛋黄比例、蛋形指数和蛋黄颜色无显著差异(P>0.05)。高、中剂量组血清中谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组(P<0.05);低、中、高剂量组血清中丙二醛(MDA)含量显著低于对照组(P<0.05);各组间血清中超氧化物歧化酶、总抗氧化能力和过氧化氢酶活性差异不显著(P>0.05)。说明西番莲茎叶提取物可提高夏季热应激条件下海兰褐蛋鸡产蛋性能、蛋品质和抗氧化性能。

布氏乳杆菌和枯草芽孢杆菌对广西麻鸡繁殖性能和卵巢发育的影响

试验旨在研究饲粮中添加布氏乳杆菌和枯草芽孢杆菌活菌液对产蛋高峰期广西麻鸡繁殖性能和卵巢发育的影响。选取健康状况良好、27周龄产蛋高峰期广西麻鸡480只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复40只鸡。试验期9周。对照组饲喂基础饲粮,M1组在基础饲粮中添加布氏乳杆菌和枯草芽孢杆菌比例为1∶1的活菌液,L1组在基础饲粮中添加布氏乳杆菌活菌液,B1组在基础饲粮中添加枯草芽孢杆菌活菌液,益生菌制剂活菌数均为4.5×10^(8) CFU/mL。结果显示:与对照组相比,M1组第2~8周的产蛋率显著提高(P<0.05),平均产蛋率和合格种蛋率显著提高(P<0.05)。M1组血清雌激素(E)、孕酮(PROG)、促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)的生殖激素水平及卵巢雌激素受体(ER)mRNA、孕酮受体(PR)mRNA、促卵泡素受体(FSHR)mRNA和促黄体素受体(LHR)mRNA的相对表达量均显著提高(P<0.05)。研究表明,在饲粮中添加布氏乳杆菌和枯草芽孢杆菌混合菌液可改善产蛋高峰期广西麻鸡种鸡的繁殖性能,促进卵泡成熟和卵巢发育。

竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌的生物学特性研究及安全性初步评价

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。结果表明:(1) GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均生长快,1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:3株受试菌在pH2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,3株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4) 3株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均具有优良的生物学特性,且安全性好,可作为畜禽微生态制剂良好的益生菌候选菌株。

通过抑制caspase-8活性提高PRRSV体外培养滴度的初步研究

探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制,从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株(HP-PRRSV)感染Marc-145细胞,并用三种凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHDFMK)分别处理PRRSV感染细胞,通过比较在不同的浓度、不同的作用时间处理下PRRSV培养滴度(TCID50)来筛选最佳抑制剂及其最佳使用浓度和作用时间。同时采用caspase-8活性蛋白酶检测试剂盒、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞术等检测在最佳抑制剂作用下caspase-8活性、细胞凋亡及其通路相关因子表达情况。结果显示:z-IETD-FMK(caspases-8特异性抑制剂)为最佳抑制剂,10μmol/L为最佳使用浓度,PRRSV感染细胞48 h后加入10μmol/L Z-IETD-FMK能最大限度提高PRRSV体外培养滴度。此外,PRRSV感染Marc-145细胞后,细胞caspase-8活性显著增加,且随着感染时间的延长,细胞凋亡率及促凋亡因子Bax均呈上升趋势,而抑凋亡因子Bcl-2表达水平却呈下降趋势;用抑制剂z-IETD-FMK处理后,细胞caspases-8活性下调,细胞凋亡率也下降,Bax表达量显著低于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01),与此相反Bcl-2的表达水平为升高趋势,显著高于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01)。说明,caspase-8特异性抑制剂能有效抑制PRRSV诱导的细胞凋亡。结果提示HPPRRSV感染可通过caspase-8途径诱导Marc-145细胞凋亡,从而抑制病毒的复制。使用caspase-8特异性抑制剂可有效抑制细胞凋亡,进而提高病毒体外培养滴度。

mRNA疫苗制备技术在甲型流感病毒疫苗研究中的应用

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、H1N1和H3N2亚型人流感病毒(Influenza virus,IV)均属于甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)。IAV含有多种亚型,毒株变异快,因此IAV疫苗株需要根据当年的优势毒株进行相应的调整,这给疫苗的研制和生产带来巨大挑战。信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)疫苗制备工艺简单、生产时间短且容易规模化生产,在疾病预防方面具有广阔的应用前景。笔者对mRNA疫苗的种类、优化策略和IAV mRNA疫苗的研究现状进行了综述,旨在为IAV mRNA疫苗的研发提供理论参考。

广西规模水禽养殖场鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解广西地区规模化水禽养殖场鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的流行血清型、耐药情况及遗传关系,从广西南宁、贵港等地规模化水禽养殖场中临床上疑似感染RA的病死鸭、鹅体内得到5株分离菌,对分离菌进行鉴定,检测其毒力基因,通过多重PCR检测方法鉴定血清型,并对其进行耐药性分析。经试验得到鉴定结果,RA分离菌株在血琼脂培养基上呈平滑圆润、露滴样,圆形隆起的灰白色菌落;革兰氏染色呈阴性短杆菌;5株分离菌经16SrRNA鉴定均为RA,将其命名为2022NNRA01~2022NNRA05;其中,血清鉴定2022NNRA01为血清1型,其余均为血清2型。药敏试验结果显示,5株RA对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻呋、大观霉素、氟苯尼考、磺氨甲唑敏感,对其他抗菌药物呈不同程度的耐药。其中,对安普霉素、庆大霉素、卡那霉素氨基糖苷类药物,四环素类药物多西环素和利福霉素类药物利福平的耐药率为100%。本试验经分离鉴定成功得到5株RA,且其耐药性分析结果可为广西地区RA疾病的疫苗免疫预防选择以及药物治疗提供依据。

H9亚型禽流感病毒M1蛋白原核表达及免疫效果初步研究

旨在原核表达H9亚型禽流感病毒(AIV)M1蛋白,初步探究其免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。通过构建重组质粒pET-32a-M1,诱导表达,Western blot验证蛋白表达情况,将重组蛋白免疫接种小鼠,通过测定血清中IgG抗体效价,脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示,M1重组蛋白主要以可溶性蛋白存在,Western blot结果可见特异性条带。免疫接种小鼠后,血清产生IgG抗体,抗体效价为1∶30000。小鼠脾细胞上清液IL-2、IL-4、IL-6与对照组相比较,含量显著增加(P<0.01),而抑制IL-1β、IL-5、IL-13、IL-12p70、IL-18、GM-CMF、IFN-γ、TNF-α分泌。结果表明,M1重组蛋白免疫原性良好,刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,为禽流感疫苗深入研究奠定了基础。

广西鸭源H3N8亚型禽流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析

[目的]了解广西水禽中分离到的H3N8亚型禽流感病毒的分子遗传进化特征。[方法]将从活禽市场采集的水禽棉拭子样品经处理后接种SPF鸡胚,应用血凝试验和血凝抑制试验对收取尿囊液进行血清学鉴定,然后对分离到的禽流感病毒进行全基因序列测定和遗传进化分析。[结果]血清学及HA和NA基因测序结果显示,该分离毒株为H3N8亚型禽流感病毒,命名为A/duck/Guangxi/446D28/2021(H3N8)。全基因遗传进化分析显示,其HA蛋白无连续碱性氨基酸插入,符合典型低致病性禽流感病毒的特征;NA蛋白出现耐药性氨基酸位点突变;该毒株8个基因片段在GenBank中比对分析结果显示,其同源性最高的毒株基本主要来自越南和位于我国候鸟迁徙路线上的宁夏及江西等省(区)。[结论]该分离株可能是不同亚型禽流感病毒通过相互基因交换所形成的基因重组体。

广西地区鸽圆环病毒Cap和Rep基因的克隆及遗传进化分析

研究旨在了解广西某肉鸽场鸽圆环病毒(PiCV) Cap和Rep基因的遗传变异情况,通过PCR技术对感染PiCV的鸽组织样品克隆Cap和Rep基因并进行测序及序列分析。结果显示,克隆的Cap和Rep基因大小分别为816 bp和954 bp。核苷酸序列同源性比对分析结果显示,克隆的Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,分别为95.5%和97.6%。遗传进化分析结果显示,Cap和Rep基因与XJ1毒株亲缘关系较近。研究表明,广西鸽群中存在PiCV流行,其Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,亲缘关系较近,这为广西地区PiCV的诊断及防控提供了重要参考。

广西地区副猪嗜血杆菌ERIC-PCR指纹图谱分型研究

为探讨肠道细菌基因间重复序列(ERIC)的聚合酶链反应(PCR)技术用于副猪嗜血杆菌基因分型的可行性,对分离自广西地区不同猪场的22株副猪嗜血杆菌进行ERIC-PCR指纹图谱分型研究。结果发现,22株分离株显示出12种指纹图谱,可以区分无法进行血清分型的菌株。表明ERIC-PCR可适用于对副猪嗜血杆菌进行分子流行病学调查及基因分型快速诊断。

广西鸡源肠炎沙门氏菌的分离与鉴定

对广西壮族自治区3个鸡场疑似沙门氏菌感染发病鸡进行细菌分离,并对分离菌株进行染色镜检、生化实验、血清学鉴定、DNA测序、动物回归试验和药敏试验。结果共分离到6株沙门氏菌,生化特征和血清学特征符合肠炎沙门氏菌特性;DNA测序结果与肠炎沙门氏菌同源性为100%;动物回归试验表明,分离菌株能致死SPF鸡,并复制出与临床表现一致的病例;药敏试验结果表明,分离菌株对诺氟沙星和阿米卡星高度敏感,为广西地区鸡源沙门氏菌病的防治提供参考依据。

广西H9亚型禽流感病毒的分离鉴定和生物学特性研究

通过对2011年—2014年从广西不同地区的活禽市场、养鸡场、野生鸟类保护区等地采集的咽喉腔及泄殖腔拭子进行病毒分离,用血凝及血凝抑制试验初步鉴定出含H9亚型禽流感病毒的样品,对其进行纯化得到17株H9亚型禽流感病毒,用针对H9亚型禽流感病毒HA基因、N2亚型禽流感病毒NA基因的特异性引物对分离株进行RT-PCR扩增,分别获得特异性目的片段后进行测序分析,结果显示所有分离株经鉴定均为H9N2亚型禽流感病毒。对所有分离株的生物学特性进行研究,发现17株H9亚型禽流感病毒分离株均符合低致病禽流感病毒的特点,其中16株分离株通过受体亲和特性测定证明具有SAα2,3及SAα2,6两种受体结合特性,提示具有感染哺乳动物的潜能。

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10^(4) CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。

可形成生物膜的猪源奇异变形杆菌分离鉴定及致病性研究

为确诊某猪场猪发病死亡原因,采集死亡猪病变组织,用常规方法分离鉴定细菌并进行致病性和耐药性检测。结果显示:从病死猪肺脏分离到1株奇异变形杆菌GX-PM1,与GenBank收录的奇异变形杆菌AYQ-1株同源性高达99.9%;小鼠致病性试验鉴定为强毒株:药敏实验检测结果显示,该菌株对阿米卡星、头孢氨苄为极敏,对青霉素G、头孢拉定、左氟沙星等为高敏,对阿莫西林、恩诺沙星等药物效果为中敏,对四环素、红霉素、复方新诺明、磺胺异恶唑等8种药物完全耐药;对耐药基因进行PCR扩增发现在该菌株中存在四环素类、氯霉素类、磺胺类耐药基因;GX-PM1株毒力基因型为ureC(-)、atfA(+)、pmfA (+)、zapA (+)、mrpA (-)、atfC (+)、ucaA (+)、rsbA (-);生物膜实验研究表明,分离株具有生物被膜形成能力,且为强黏附型(+++)。本研究表明此疫情由奇异变形杆菌引起,可用头孢类和氨基糖苷类药物进行治疗。

血清4型禽腺病毒广西分离株单克隆抗体的制备及鉴定

为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)广西分离株(FAdV-4-GX2018-005)的特异性单克隆抗体,将FAdV-4-GX2018-005作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株制备腹水并纯化得到单克隆抗体,利用ELISA和IFA鉴定单克隆抗体的特异性。结果表明,成功获得3株单克隆细胞株3A3、13A11和4D5。3株杂交瘤细胞株分泌的抗体,能与FAdV-4产生特异性反应,与其他血清型禽腺病毒(FAdV-1、FAdV-2、FAdV-3、FAdV-5、FAdV-6、FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10和FAdV-11)不发生反应。本研究成功制备FAdV-4广西分离株单克隆抗体,为FAdV-4检测方法的建立奠定了良好基础。

我国猪圆环病毒3型研究进展及概况

猪圆环病毒病3型(porcine circovirus virus 3,PCV3)于2016年首次被发现并鉴定,可引起猪心脏和多系统炎症、皮炎肾病综合征、仔猪消瘦腹泻、母猪繁殖障碍及流产等。流行病学调查表明,PCV3能够单独感染各个年龄阶段的猪并引起明显的临床症状。目前针对PCV3尚无有效的疫苗和治疗药物,导致疫情在全球不断蔓延,甚至在一些地区呈逐年上升趋势,对全球养猪业造成了重大的经济损失。文章从PCV3的分子生物学特征、流行病学、感染现状、检测方法、亚单位疫苗研究进展等方面进行综述,以期为PCV3的相关研究提供参考。

2019—2022年广西部分地区猪场主要病毒性疫病流行病学调查及分析

为了解2019—2022年广西地区猪场主要病毒性传染病的流行特征,应用PCR及RT-PCR方法对近四年临床上送检的疑似猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(PoRV)感染的1046份病料进行病原检测,并开展流行病学分析。结果显示:CSFV、PRRSV、PCV-2、PCV-3、PRV、TGEV、PEDV和PoRV的阳性率分别是3.91%(21/537)、20.46%(143/699)、29.90%(116/388)、16.10%(81/503)、27.75%(121/436)、2.10%(8/381)、28.50%(61/214)和13.74%(18/131)。其中,PCV-2和PEDV的感染率呈逐年递减的趋势,TGEV的感染率呈逐年上升的趋势。单一性感染中PRV和PEDV感染率较高,平均感染率为别为13.53%,18.22%;双重感染中PRRSV和PCV-2的感染率最高,平均感染率达11.34%。其次为PEDV和PoRV二重感染,平均感染率为8.05%。PCV-3和PEDV的感染率在春季较高,分别为18.80%和40.00%。PRRSV、PCV-2、PRV、TGEV、PoRV的感染率在冬季比较高,分别为24.40%、40.57%、37.30%、3.23%、19.44%。结果表明:对广西猪场危害较为严重的病毒性疫病为PRRSV、PCV-2、PRV和PEDV,需要加强病原的监测和提高综合防控能力,以减少疾病的发生及经济损失。

广西本地黄牛环形泰勒虫病的诊治报告

牛环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒虫属的环形泰勒虫寄生于黄牛、水牛、瘤牛、牦牛及犏牛的红细胞和淋巴细胞内所引起的一种血液原虫病,该病表现为地方性流行并且季节性明显,多呈急性经过,发病率和死亡率高,可给养牛业造成巨大的经济损失^([1-2])。2020年9月,广西西部山区某县牛场发生一起病例,经流行病学调查、病理剖检和实验室检查,确定是由环形泰勒虫感染所致。现将情况报告如下。

马脓皮病的病原分离鉴定及生物学特性研究

为探究马脓皮病的病原种类及特性,从病马的皮肤脓汁中分离到一株革兰氏阳性菌,经16SrDNA鉴定为金黄色葡萄球菌。经致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因等检测。结果显示,以浓度为9.3×10~8 CFU/mL菌液攻毒小鼠,致死率为40%;分离菌对氧氟沙星等14种药物高敏,具有fnbA、hly/hla、hysA、clfA和clfB等5个毒力基因和norA和gyrA 2个耐药基因。此结果可作为诊治马脓皮病用药参考。