表达IFN-α的重组猪繁殖与呼吸综合病毒的构建及生物学特性分析

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害我国生猪业的重要疫病之一,其病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),是一种免疫抑制性病毒。干扰素(IFN)是一类具有免疫调节功能和抗病毒作用的细胞因子。IFN-α除更直接的抗病毒作用外,还可以调节宿主的先天性和适应性免疫。论文构建表达IFN-α的重组PRRSV,分析重组病毒的生物学特性以及IFN-α的生物学活性。通过反向遗传操作方法将IFN-α插入到PRRSV ORF1b和ORF2a之间,重组质粒转染细胞后可以拯救出重组病毒(rGXAM-P-IFN-α)。插入到PRRSV基因组中的IFN-α可遗传稳定9代。重组病毒生长特性分析可发现rGXAM-P-IFN-α复制能力显著低于亲本病毒。rGXAM-P-IFN-α感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)可显著上调抗病毒基因(PKR,ISG15和ISG54)mRNA表达水平,为进一步研发新型PRRSV疫苗提供参考。

猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立

为制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白多克隆抗体,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,通过PCR扩增N蛋白基因,将N蛋白基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-N。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG诱导N蛋白表达,将纯化后的重组N蛋白免疫小鼠,获得N蛋白多克隆抗体。将纯化后的N蛋白作为抗原,建立检测PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法,并评估该方法的特异性、重复性和准确性。结果表明,表达的重组N蛋白呈可溶性,制备的N蛋白多克隆抗体ELISA效价能达到1∶2048000,IFA和Western blot结果表明制备的鼠多克隆抗体能特异性识别PRRSV N蛋白。建立的间接ELISA方法特异性良好,重复性试验变异系数均小于10%,且与同类型商品化试剂盒结果比较,符合率达到91.10%,可为PRRSV N蛋白的免疫学检测和结构功能的研究提供参考。

纤维二糖水解酶在乳酸乳球菌中的表达

为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(T.reesei)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后,将正确的重组质粒通过电击转化进入乳酸菌NZ3900感受态细胞,通过选择性抗生素氯霉素筛选阳性克隆,放大培养后使用终浓度为20 ng/mL的Nisin进行诱导表达,诱导后的菌液经SDS-PAGE鉴定,有符合预期大小的条带,说明CBH II基因在乳酸乳球菌NZ3900中表达。研究为乳酸乳球菌的改造及开发临床应用奠定基础。

一例猫肠梗阻病例的诊断与治疗

肠梗阻是一种临床上较为常见的消化系统疾病,多为犬猫喜爱衔咬玩耍误食异物或异食癖导致。就一例猫吞食软性异物所致消化道梗阻的病例,阐述其诊断与治疗方案,为提高猫肠梗阻的临床诊断及治疗水平提供参考。

塞内卡病毒广西分离株的初步分离与鉴定

为了确诊一例疑似SVA感染的临床病例,本试验将从广西地区某猪场母猪和肥育猪鼻及蹄部采集的出现典型水泡性病变的猪水泡液进行无菌处理后接种PK-15细胞,连续传代培养,通过细胞病变、RT-PCR扩增、基因序列测定、TCID_(50)和间接免疫荧光等方法对分离得到的病毒进行鉴定。结果显示:该病毒株在PK-15细胞上生长良好,可见明显细胞病变;接种PK-15细胞进行TCID_(50)测定,病毒滴度达到10^(-6.75)/mL;间接免疫荧光试验结果显示,接种第4代细胞培养物的BHK-21细胞出现特异的绿色荧光;扩增和测定了VP1基因序列后进行同源性及遗传进化分析,发现该毒株与Senecavirus病毒属中的病毒成员同源性最高,与之前2017年报道的广东分离株SVA-CH-GDYS02-2017和SVA-CH-GDLZ01-2017位于较近的进化分支内。以上结果表明,已成功从样品中分离到了SVA,且该毒株可以在PK-15和BHK-21细胞上进行增殖。本研究成功分离到一株SVA,为后续塞内卡病毒的诊断和疫苗研制提供试验材料。

表达O型口蹄疫病毒VP1蛋白的重组塞内卡病毒的构建与鉴定

A型塞内卡病毒(SVA)是近年来新流行的一种传染性病原,与口蹄疫病毒(FMDV)具有相似的基因组结构,所致临床症状也十分相似。为了研发一种新型的基因工程活载体疫苗,用于预防塞内卡病毒感染和口蹄疫,以SVA全长感染性克隆pSVA-GX01为基础,在SVA 2A与2B基因之间插入O型FMDV的VP1基因,经双酶切及测序鉴定,成功获得了重组质粒pSVA-FMDV-VP1-O。将重组质粒转染BHK-21细胞,拯救获得重组病毒rSVA-FMDV-VP1-O,间接免疫荧光试验鉴定显示,该重组病毒可在细胞中表达O型FMDV的VP1蛋白。对该重组病毒进行体外生长增殖特性以及遗传稳定性分析表明,重组毒株和亲本毒株在BHK-21细胞上具有相似的增殖特性,插入的FMDV VP1基因可在细胞传代过程中稳定存在6代。研究结果为开发以塞内卡病毒为载体构建表达口蹄疫病毒VP1蛋白的重组基因工程活载体疫苗提供了参考。

塞内卡病毒3D蛋白的截短表达及多克隆抗体的制备

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种能引起猪特发性水疱病(Porcine idiopathic vesicular disease,PIVD)的病原体。SVA 3D蛋白主要编码RNA依赖的RNA聚合酶,与病毒的RNA复制密切相关。为制备3D蛋白的多克隆抗体,试验构建SVA 3D蛋白基因截短片段的原核表达质粒pET-32a-3D,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达、纯化获得重组蛋白。用重组蛋白免疫新西兰大白兔后收集血清,获得了SVA 3D蛋白的多克隆抗体。将SVA感染BHK-21细胞,用制备的3D蛋白的抗体进行IFA和Western blot检测,结果显示,用制备的3D蛋白抗体能检测在SVA感染细胞中表达的3D蛋白,说明制备的3D蛋白多克隆抗体与3D蛋白反应性良好,为后续SVA致病机制的深入研究提供材料储备。

一例犬冠状病毒病的病例报告

犬冠状病毒病是由犬冠状病毒引起的一种临床上以呕吐、腹泻、脱水及易复发为特性的高度接触性传染病。该病对幼犬危害严重,如诊断和治疗不及时,容易导致犬只死亡。就一例犬冠状病毒病的临床诊断及治疗方案进行总结,为提高该病的诊断及治疗水平提供参考。

副溶血弧菌与嗜水气单胞菌双重PCR检测方法的建立

为建立一种可精准、快捷鉴别检测副溶血弧菌(VP)及嗜水气单胞菌(AH)的方法,根据GenBank公布的VP Tlh基因及AH aerA基因保守区序列,设计合成两对特异性引物,通过优化反应体系及反应程序,成功建立了一种可同时检测VP与AH的双重PCR方法,并开展了特异性及敏感性试验。结果显示:VP Tlh和AH aerA基因扩增条带大小分别为500、760 bp;反应体系中Tlh与aerA基因引物最优浓度分别为7.5、10.0 nmol/L,反应程序中最佳退火温度为56.8℃;该方法对VP、AH的最低可检出细菌浓度均为1.2×10^(3)CFU/mL;对地衣芽孢杆菌、微小杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡阳芽孢杆菌、普通变形杆菌、维氏气单胞菌、布氏柠檬酸杆菌、豚鼠气单胞菌、霍乱弧菌、拟态弧菌、简氏气单胞菌等其他非目标菌均无交叉反应,仅对VP和AH呈特异性阳性扩增。综上,本研究建立了一种可快速鉴别诊断VP、AH的双重PCR检测方法,其特异性强、灵敏度高,可为VP、AH等细菌性病原引发的水生动物疫病的快速诊断、监测及有效防控提供技术支持。

一例犬冠状病毒与毛滴虫混合感染的诊治

犬冠状病毒病是一种以急性胃肠炎为主要症状的高度接触性传染病,幼犬的发病率和死亡率最高,防控该病最有效的措施是定期接种疫苗。犬毛滴虫病是毛滴虫寄生在犬肠道内的一种原虫性疾病,主要引起犬出现腹泻症状,主要预防措施是犬在幼年适宜时期进行全面体检和按时驱虫,值得关注的是寄生于犬的毛滴虫虫种可能均具有一定的人兽共患传播潜力。现就一例犬冠状病毒与毛滴虫混合感染病例的诊断及综合治疗进行总结,为该类疾病的诊治提供参考。

一例犬细小病毒与肠道寄生虫混合感染的诊治

犬细小病毒病是一种临床表现为发烧、食欲不振、呕吐、腹泻且便中带血的高度接触性传染病,对犬类的危害性极大,防控该病最有效的措施是定期接种疫苗。肠道寄生虫病主要引起食欲不振、慢性腹泻、胃肠道出血等症状,主要预防措施是给犬按时驱虫和保持环境卫生。现就一例犬细小病毒与肠道寄生虫混合感染病例的临床诊断与治疗方案进行总结,为该类疾病的诊治提供参考。

一例犬子宫蓄脓的病例报告

犬子宫蓄脓是常见的母犬产科疾病,母犬在发情中后期激素紊乱,子宫内膜增生,子宫颈微张导致细菌从阴道内进入子宫后繁殖,引起子宫发炎。介绍一例流浪犬开放型子宫蓄脓病例,通过临床诊疗后恢复良好,供同行参考。

一例猫白血病的诊断和治疗

一只3岁7个月的雄性英短银渐层猫,发现其食欲不振、日渐消瘦、反复呕吐,经临床检查、血常规检查、SAA检查和血液生化检查后初步诊断为毛球症,后通过实时荧光定量PCR检查,确诊为猫白血病,采取针对性治疗后实时荧光定量PCR检查结果转阴,康复出院。

一例犬胃肠炎的病例报告

胃肠炎是指胃肠道黏膜以及深至黏膜下层组织的炎症^([1]),临床特征有呕吐、腹泻、发热、精神沉郁、食欲不振等,是犬的常见病和多发病。胃肠炎分为胃炎和肠炎^([2]),以胃炎为主时,犬出现腹痛、食欲不振并伴随呕吐,严重时呕吐物中带血,体温有时升高;以肠炎为主时,犬水样腹泻出现频繁,粪便腥臭,体温升高至40 ℃以上,严重时体温下降,伴随有严重脱水、眼窝下陷等症状,甚至死亡。2022年2月,南宁市华波宠物医院接诊的一例犬胃肠炎.

一例犬股骨骨折内固定术失败病例

通过询问病史、体格检查、影像学检查以及血液检查等方法对一只5月龄中华田园犬的近端股骨骨折进行诊断,应用矫形钢板与螺钉内固定方法对该患犬进行手术治疗。患犬在术后7 d出现了钢板松脱,确认骨折内固定手术失败,后手术取出钢板,采用夹板绷带外固定法并进行药物治疗,2个月后患犬虽然有轻微跛行,但是基本恢复行走,不影响正常生活。详述了该病例的诊疗过程,剖析了内固定手术失败的原因,并结合该病例的治疗过程总结了防止内固定手术失败的方法以及手术失败后的补救方案。

美洛昔康在犬乳腺肿瘤诊疗中的应用

犬乳腺肿瘤(Canine mammary tumor,CMT)是动物临床上因乳腺细胞癌变导致的一种常见的自发性肿瘤,临床上以犬的乳腺内出现一个或多个肿瘤为特征。不同年龄和品种的犬均有发病,常见诱因是各种因素导致的性腺激素对于靶器官的反馈性调节作用失调[1]。10岁左右的老龄小型犬依然是高发群体,其中以贵宾犬最为多见[2]。犬共有5对乳腺,CMT多发于后两对乳腺,常见治疗手段是手术切除。美洛昔康是新一代烯醇类非甾体类解热镇痛抗炎药,高选择性作用于环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2),适用于类风湿性关节炎和骨关节炎等的疼痛、肿胀及软组织炎症、创伤性疼痛、手术后疼痛的对症治疗,与适宜的抗菌药配伍使用,可辅助治疗急性乳房炎。美洛昔康作为一种在宠物临床中广泛应用的药物,其安全性和有效性得到了宠物医生的一致认可[3]。在手术切除乳腺肿瘤后使用美洛昔康注射液,可高效抗炎、镇痛,甚至起到抑制癌细胞、防止复发的作用,配合抗生素使用效果显著并可减短疗程。南宁市华波宠物医院接诊1例老龄贵宾犬,经检查确诊为恶性CMT复发。经积极治疗,获得良好效果,至今未见复发,现将诊疗情况报告如下。

一例猫死胎难产的绝育手术报告

母猫绝育是阻止母猫发情和繁衍后代的有效手段,一般采用手术方法将母猫的卵巢与子宫摘除^([1])。健康猫的手术适宜年龄是5~6月龄,幼猫可以在断奶后6~8周进行手术^([2])。若患上生殖系统疾病需切除卵巢和子宫的不受时间限制。猫难产指母猫妊娠期满后不能顺利产出胎儿,胎儿异常、产道狭窄、产力不足等都是难产的常见原因。

猫皮肤真菌和戈托伊蠕形螨混合感染的诊治报告

猫皮肤真菌病是临床上常见的疾病,是由真菌感染猫皮肤、被毛和爪甲后,引起猫皮肤出现圆形或不规则的脱毛、红斑、渗出、结痂、鳞屑和瘙痒等症状的一种接触性传染病[1]。猫皮肤真菌病病原主要是犬小孢子菌,传染源为患病猫,健康猫或易感猫直接接触患病猫或者间接接触到被患病猫污染的生活用品都有可能导致感染发病。猫一旦感染,不及时治疗则转为慢性感染,使猫常年患病。猫皮肤真菌病可发生于一年四季,特别是在温暖潮湿季节,该病有着更高的发病率[2]。同时该病亦是人畜共患病[2],不仅影响猫的健康,对人类健康也存在一定风险,具有重要的公共卫生意义。猫蠕形螨病是一种由猫蠕形螨引起的疾病,常见的蠕形螨有猫蠕形螨和戈托伊蠕形螨两种,其中戈托伊蠕形螨病是一种接触传染性疾病,临床症状表现为猫体表皮肤出现红斑、皮屑、脱毛和结痂。本院2021年8月接诊一例家庭性猫皮肤病相互感染的病例,经治疗获得痊愈,现对该病例的诊疗过程进行小结,以供同行参考。

一例母猫膀胱结石的诊断与治疗

介绍了2022年6月26日在广西南宁市华波宠物医院收治的一例膀胱结石病例,阐明了其血常规检查、血液生化检查、SAA检查和影像学检查的诊断结果以及治疗方案。该病例表现出膀胱结石的典型临床症状,但特别之处在于该患猫是母猫,由于母猫和公猫在生理结构上的差异,母猫患膀胱结石的情况在临床上较少见。现就一例母猫膀胱结石病例的临床诊断及治疗进行总结,供参考。