曲妥珠单抗对SW-620人结肠癌细胞增殖凋亡的影响及其与奥沙利铂协同作用的研究

目的观察不同浓度曲妥珠单抗单独或联合奥沙利铂对SW-620人结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养SW-620人结肠癌细胞。(1)细胞增殖实验:将细胞分为2个大组:曲妥珠单抗组和曲妥珠单抗+奥沙利铂组,每个大组内设8个浓度小组(每个小组设5个复孔),曲妥珠单抗组的浓度依次为0、0.001、0.01、0.1、1、10、100及1 000μg/mL,对应的曲妥珠单抗+奥沙利铂组曲妥珠单抗的浓度与前相同,不同之处在于均加入了奥沙利铂(10μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞的吸光度(A)值。(2)细胞凋亡实验:组别设置同增殖实验,只是曲妥珠单抗的浓度仅包括0、0.1、1及10μg/mL。采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率及细胞周期分布。(3)人表皮生长因子受体2(her-2)蛋白表达检测:分别以0、100及1 000μg/mL曲妥珠单抗,以及0、1及10μg/mL曲妥珠单抗联合奥沙利铂(10μmol/L)处理SW-620细胞,采用Western blot法检测各组细胞中her-2蛋白的表达。结果 (1)细胞增殖实验:同种浓度下曲妥珠单抗+奥沙利铂组的A值均低于曲妥珠单抗组(P<0.05),且随着曲妥珠单抗浓度的增加,A值在逐渐降低。(2)细胞凋亡实验:同种曲妥珠单抗浓度下,曲妥珠单抗组+奥沙利铂组的细胞凋亡率均较曲妥珠单抗组高(P<0.05)。流式细胞检测:不同浓度曲妥珠单抗+奥沙利铂处理后,随浓度增加,G_1期细胞比例呈下降趋势,S期细胞比例呈上升趋势,且呈剂量依赖性;至1μg/mL和10μg/mL时,与曲妥珠单抗组比较,曲妥珠单抗+奥沙利铂组的G_1期细胞比例较低,S期细胞比例较高(P<0.05);在0.1、1和10μg/mL浓度的曲妥珠单抗条件下,曲妥珠单抗联合奥沙利铂组的G_2期细胞比例较曲妥珠单抗组升高(P<0.01)。(3) her-2蛋白的表达水平:1、100及1 000μg/mL曲妥珠单抗组细胞中her-2蛋白的表达水平逐渐降低,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);0、1及10μg/mL曲妥珠单抗+奥沙利铂组中her-2蛋白的表达水平也逐渐降低,3组间两两比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度曲妥珠单抗可抑制SW-620人结肠癌细胞的增殖,诱导其凋亡。曲妥珠单抗和奥沙利铂具有协同抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用。