高压液相色谱技术分离制备杆菌肽各组分的研究

目的开发制备型高压液相色谱分离杆菌肽各组分的方法。方法根据杆菌肽各组分化学结构性质,采用纳微Unisil C_(18)柱,通过改变流动相pH和流动相配比,以及不同的上样量,探索杆菌肽各组分分离的方法。收集分离得到的不同组分,经脱盐-冷冻干燥,得到相应杆菌肽组分冻干粉。结果纳微Unisil C_(18)柱可以用于杆菌肽各组分的分离,流动相配比为甲醇(A)∶[1.54‰乙酸铵水溶液(乙酸调pH至5.0)-乙腈(9∶1,V/V)](B)=9.0∶11.0(V/V),总流速40 m L·min^(-1),上样量200mg,检测波长为254 nm。制备得到的杆菌肽各组分纯度均大于95%。结论该方法上样量大,稳定性好,收集到的各组分纯度高,为杆菌肽各组分的分离制备提供了借鉴。

抗真菌药物研究进展和研发新方向

根据抗真菌药物化学结构的不同,介绍了氮唑类、多烯类、棘白菌素类抗真菌药物的作用机制、应用现状及研究进展,提出在开发全新抗真菌药的同时,考虑对现有抗真菌药物进行以降低毒性、提高药效为目的的剂型改造和结构修饰,更大限度地利用现有抗生素资源,为治疗真菌感染提供更多可以选择的药物和剂型。

PTP1B抑制活性真菌F956的鉴定和代谢产物研究

目的研究PTP1B抑制活性真菌菌株F956及其代谢产物。方法通过形态观察及ITS序列系统发育分析鉴定活性菌株F956;对其发酵产物进行分离纯化获得单体化合物并通过综合波谱解析确定代谢产物的化学结构。对得到的化合物进行分子对接及PTP1B抑制活性评价。结果 F956鉴定为Mucor fragilis(易脆毛霉);从其代谢产物中得到2个具有PTP1B抑制活性的化合物F956-5和F956-6,其中F956-5与化合物JBIR-12相同,F956-6为JBIR-12的13位羟基甲基化衍生物,分子对接结果显示F956-6可占据PTP1B的活性位点;其对PTP1B的IC_(50)分别为7.12和13.92μg/mL。结论化合物F956-5(JBIR-12)和F956-6由易脆毛霉产生及其对PTP1B的抑制活性均为首次报道。

聚合物纳米微球分离纯化棘白霉素B母核方法研究

以聚合物纳米微球为层析介质,采用HPLC检测方法,开发高纯度棘白霉素B母核的分离纯化工艺,并对层析条件进行优化。结果表明,当选择Uni PS 30型聚合物纳米微球为层析介质、上样量为1.2g·(100g介质)-1、以体积分数为3%的乙醇进行洗脱、流速为12mL·min-1时,得到的棘白霉素B母核纯度大于98%。建立了高纯度棘白霉素B母核的分离纯化工艺,流程简单、可行,为该产品产业化开发提供了一定的理论基础。

聚合物纳米微球分离纯化格尔德霉素方法研究

研究了聚合物纳米微球分离纯化格尔德霉素的方法。通过聚合物纳米微球型号、洗脱液体积分数、洗脱速度、加样量的选择,确定聚合物纳米微球分离纯化格尔德霉素工艺为:采用PS30RPC型聚合物纳米微球作为层析填料,洗脱液乙醇体积分数65%、洗脱速度6.0 mL.min-1、加样量(样品∶填料,g∶g)1∶100,此时,平均层析收率为92.5%、平均总收率为81.6%、平均成品纯度为98.7%。该分离纯化方法简便可靠,适于工业化生产。

大孔吸附树脂分离纯化Pneumocandin B_0的研究

研究了用大孔吸附树脂从发酵液中提取Pneumocandin B0(PB0)的工艺条件。从8种大孔吸附树脂中筛选出HZ818吸附PB0效果较好,静态吸附量可达10 436μg·g-1。以HZ818树脂吸附饱和后,先用40%乙醇洗脱去除杂质、再用85%乙醇解吸,解吸收率达91.6%,PB0浓度富集20倍以上,色谱纯度由13.3%提高至78.6%。该吸附-洗涤-解吸工艺简单易行、成本低、环保,适合工业化生产。

大孔吸附树脂分离纯化棘白霉素B母核的工艺研究

研究了大孔吸附树脂分离纯化棘白霉素B母核(ECBN)的工艺条件。以大孔吸附树脂D303为脱色树脂、HZ835为吸附树脂,将ECBN滤液pH值调至5.5进行吸附,吸附量为14 512μg·mL^(-1);再以5%乙醇水溶液为解吸剂解吸,解吸率为91.8%;最后经纳滤浓缩、脱炭、结晶、真空干燥等工艺得到ECBN粗粉,含量为65%左右,色谱纯度大于80%,提取总收率超过60%。该工艺简单易行、操作成本低、溶媒消耗少,适合工业化生产。

高纯度阿扎霉素B的分离纯化工艺研究

研究了大孔树脂层析分离阿扎霉素B的工艺过程,对树脂类型、洗脱条件和上样量进行了优化。结果表明,HZ816树脂为最佳层析介质,上样量为0.01g.(mL树脂)-1,洗脱剂为体积分数70%的乙醇,洗脱速度为1BV.h-1树脂床体积。按此工艺所得产品纯度大于95%,过程总收率大于60%。该方法简单易行、成本低、收率高,适宜工业化生产。

树脂吸附法分离纯化非达霉素的研究

目的研究大孔吸附树脂分离纯化非达霉素的工艺条件。方法以非达霉素的吸附量为考察指标,从中筛选树脂;并对吸附及解吸条件进行优化,得到适宜的纯化操作条件。结果 HZ816树脂为最佳吸附剂,优化的条件为吸附流速为2BV/h,解吸剂为80%的乙醇-水溶液。在此实验条件下所得产品纯度≥90%,收率≥60%。结论 HZ816树脂对非达霉素有较好的吸附分离性能,适合于非达霉素的提纯。

应用常压室温等离子体诱变技术选育非达霉素高产菌株

目的通过菌种诱变方法筛选获得非达霉素高产菌株。方法以非达霉素产生菌N12W-396作为出发菌株,采用新型常压室温等离子技术(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)结合非达霉素自身抗性处理诱变菌种,以摇瓶发酵液效价作为筛选指标。结果与出发菌株相比,获得的高产突变株FD-13-194的摇瓶发酵能力提高了42.9%,且遗传性能稳定,在50L发酵罐中发酵208h非达霉素产量可达2612μg/mL。研究表明,ARTP最佳的照射时间为300s,非达霉素抗性筛选的最小抑菌浓度(MIC)为1800μg/mL。结论常压室温等离子体诱变技术能够有效的作用于非达霉素产生菌,结合其自身产物抗性筛选是获得高产菌株的良好手段,有利于提高非达霉素的工业生产水平。

A-40926混合物中B_0组分的分离纯化

目的开发一种高纯度A-40926混合物中B_0组分(以下简称A-40926 B_0)的分离纯化工艺。方法采用中压色谱系统,以聚合物微球为载体,A-40926 B_0的收率为指标,筛选聚合物微球的类型,优化洗脱条件。结果型号为Uni PS30-300的微球为最佳层析介质,上样量为10mg(每毫升填料),洗脱剂依次为体积分数30%,45%的乙醇溶液,流速为1.5BV/h(BV:层析柱体积);所得产品纯度大于95%,层析总收率大于75%。结论此种高纯度A-40926 B_0的分离纯化方法简单易行,收率稳定,适于工业化生产。

从发酵液中提取达托霉素的工艺优化

通过对达托霉素发酵液预处理、溶剂萃取、结晶、干燥得到达托霉素粗品。确定了以pH值6.5～7.5的缓冲溶液作为浸提溶剂、加入5～8BV丙酮进行冷藏结晶的优化提取工艺。该工艺简单、经济,适合工业化生产。

HPLC法同时测定发酵液中纽莫康定A_0与B_0的含量

采用HPLC方法同时测定发酵液中纽莫康定A0与B0的含量。色谱柱为SepaxSapphire C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比45∶55,内含0.1‰三氟乙酸),流速为1.0 mL.min-1,紫外检测波长为214nm。结果表明,纽莫康定A0与B0的浓度分别在47.5～191.4μg.mL-1和38.4～153.6μg.mL-1的范围内,与峰面积呈良好的线性关系(R分别为0.9997和0.9998);检测灵敏度分别为6.86 ng、5.95 ng;平均回收率分别为99.15%(RSD=0.96%,n=9)和99.31%(RSD=0.98%,n=9)。该方法简便、准确、重现性好,可用于发酵液中纽莫康定A0与B0含量的测定。

产非达霉素药用植物内生放线菌N12W0304的分类鉴定

目的对一株分离自药用植物仙鹤草中的产非达霉素菌株N12W0304进行分类研究。方法通过形态特征、培养特征观察、生理生化特征、胞壁分析及16S r DNA序列分析等多相分类研究对菌株进行鉴定。结果菌株N12W0304属于游动放线菌属(Actinoplanes sp.)菌株。结论本报道是首次从仙鹤草中分离到游动放线菌属非达霉素产生菌。

氨基酸前体对棘白霉素B发酵合成的影响

以构巢曲霉(Aspergillus nidulans)发酵生产酯肽类化合物棘白霉素B,研究棘白霉素B己肽环结构的前体性氨基酸对产物的代谢影响,显示出脯氨酸、鸟氨酸、苏氨酸在发酵48 h补入,对发酵代谢有促进作用。利用响应面统计学方法进行前体及有机氮源配方优化,得出优化配方:脯氨酸4.55 mg/m L,鸟氨酸1.85 mg/m L,苏氨酸0.97 mg/m L,棉籽粉2.62%,摇瓶发酵水平达到3 270μg/m L,较原水平提高30.2%。新工艺在50 L罐上放大,发酵水平进一步提高至3 520μg/m L,显示出良好的工业应用前景。

伊维菌素氧化降解杂质的分离与鉴定

将伊维菌素原粉在含有H_(2)O_(2)的甲醇溶液中进行加速降解,得到伊维菌素氧化降解杂质粗品,利用色谱纯化技术对伊维菌素氧化降解杂质粗品进行分离纯化,并运用MS、NMR分析鉴定其结构,确定该氧化降解杂质为8a-oxo-H_(2)B_(1a)。

非达霉素粗品中杂质的分离与鉴定

目的分离和鉴定非达霉素粗品中的杂质。方法采用制备液相色谱技术对非达霉素粗品中的杂质进行分离提纯,并通过核磁共振波谱和质谱分析鉴定杂质的结构。结果分离并鉴定了4个非达霉素杂质化合物,分别为非达霉素的有关化合物E、有关化合物K、有关化合物O和闰年霉素A4。结论杂质化合物与非达霉素骨架结构一致,属同系列化合物,由非达霉素发酵代谢过程产生,为非达霉素的质量控制和安全性评价提供了技术支持。

非达霉素产生菌氮离子注入诱变及其发酵培养基优化

目的通过氮离子注入对游动放线菌(Actinoplanes deccanensis)SIIA-A2098进行诱变、筛选高产突变株,并采用响应面法对突变株的发酵培养基进行优化,以提高非达霉素产量。方法采用多剂量氮离子注入对菌株SIIA-A2098进行诱变选育高产突变株。采用Plackett-Burman设计法筛选出影响突变株发酵的显著因素,然后采用CDD设计法分析优化显著影响因素参数。结果与结论氮离子注入得到非达霉素高产突变株SIIA M3510,产量为92.8μg/m L,是野生型菌株产量(11.5μg/m L)的8倍。Plackett-Burman设计法筛选出3个显著影响因素为葡萄糖、鱼粉蛋白胨和豆油,响应面法优化出它们的最佳数值分别为2.919%、0.644%和1.078%。在此优化条件下,摇瓶非达霉素发酵产量达到约244.75μg/m L,较优化前提高40.04%。

不同氨基酸和植物油对替考拉宁产量及组分含量的影响

研究了氨基酸和植物油对替考拉宁产量和组分含量的影响。结果发现,与对照相比,在发酵培养基中添加0.05%异亮氨酸和0.05%L-缬氨酸,替考拉宁产量分别提高24.7%和38.2%;在发酵培养基中添加0.50%大豆油和0.50%玉米油,替考拉宁产量分别提高20.4%和28.7%。L-缬氨酸和大豆油在提高替考拉宁产量的同时,对主成分A2-2的影响作用是相反的,L-缬氨酸可以升高A2-2含量,而大豆油则降低A2-2含量。L-缬氨酸和大豆油的联合使用可进一步提高替考拉宁产量,当L-缬氨酸和大豆油添加量分别为0.06%、0.75%时,替考拉宁产量提高47.2%。优化后的配方经过50L发酵罐发酵验证,替考拉宁的平均发酵效价达到5 652U·mL^(-1),各组分含量均符合质量要求,主成分A2-2含量达到53.1%。

东方拟无枝酸菌产万古霉素发酵工艺优化

采用东方拟无枝酸菌V19-07发酵产万古霉素,通过单因素实验对发酵工艺进行了优化,确定最优发酵工艺为:发酵温度28℃、发酵液pH值7.2、通气量1.0 vvm、溶解氧浓度10%。该工艺经50 L发酵罐验证,平均发酵效价达14117 U·mL^(-1),产量较优化前提高18.8%,可用于规模化生产。