猪肺炎支原体乳酸脱氢酶在诱导猪支气管上皮细胞凋亡中的作用

猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)不仅参与猪肺炎支原体的代谢还与猪肺炎支原体的毒力相关。因此,本研究通过原核表达及亲和层析获得猪肺炎支原体乳酸脱氢酶重组蛋白(recombinant LDH, rLDH),之后分别用不同浓度的rLDH与猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cell, PBEC)孵育,经显微镜观察rLDH对细胞形态的影响,通过CCK-8法检测rLDH对细胞活力的影响。选取对细胞形态及活力影响不显著的50和100μg·mL^(-1) rLDH分别与PBEC孵育,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,反转录荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法和免疫印记检测凋亡相关基因caspase 3、caspase 8、caspase 9、Bax、BCL-2的转录水平和蛋白水平。结果显示:猪肺炎支原体rLDH呈剂量依赖性地诱导PBEC凋亡,其作用与猪肺炎支原体菌株一致。用rLDH及Mhp 168孵育后,PBEC的促凋亡因子Bax、caspase 3和caspase 9的mRNA水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的mRNA水平显著下调,caspase 8的mRNA水平未发生显著变化。促凋亡因子Bax、caspase 3的蛋白表达水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的蛋白表达水平显著下调。结果表明,猪肺炎支原体可能通过LDH诱导PBEC内源性细胞凋亡,凋亡相关因子caspase 3、caspase 9、Bax和BCL-2在其中发挥重要作用。

微小扇头蜱P0基因的克隆及其编码蛋白的生物信息学分析

为探究微小扇头蜱P0基因序列特征,预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,筛选出P0蛋白的B、T优势抗原表位,本研究克隆了微小扇头蜱P0基因,运用Clustal X软件分析P0基因序列特征,用在线软件EXPASY、PRABI和SWISS-MODEL预测P0蛋白的理化性质和二、三级结构,用在线软件ABCpred Prediction、Scratch、IEDB和NetCTL筛选P0蛋白的B、T优势抗原表位。试验结果显示:微小扇头蜱P0基因全长957 bp,碱基A含量为24.0%,T含量为20.3%,G含量为27.5%,C含量为28.2%,A+T含量为44.3%,G+C含量为55.7%,共编码318个氨基酸;P0蛋白分子量为34 ku,理论等电点(pI)为5.86,平均亲水系数为-0.153,不稳定指数为38.15;P0蛋白的二级结构含163个α螺旋(占比51.25%),130个无规卷曲(占比40.88%),25个延伸链(占比7.86%),其中以α螺旋为主要结构;P0蛋白的三级结构以α螺旋的含量最高,该蛋白的全局模型质量评估(global model quality estimation, GMQE)、定性模型能量分析(qualitative model energy analysis, QMEAN)值分别为0.49和0.52±0.05,无信号肽和跨膜结构域,但存在40个磷酸化位点和1个糖基化位点;P0蛋白有13个B淋巴细胞优势抗原表位和6个T淋巴细胞优势抗原表位。综上所述,微小扇头蜱P0基因序列呈GC偏好,P0蛋白是以α螺旋为主要结构成分的亲水性酸蛋白,具有B、T淋巴细胞优势抗原表位,是今后研制防控微小扇头蜱疫苗的理想靶标。

猪场粪污中抗菌药及抗性基因污染控制及消减研究

猪场抗菌药的大量使用造成了粪污中含有大量抗菌药,随之抗性基因污染加剧,给动物和人的健康造成了巨大的威胁。规模化养猪场粪污中的抗生素和抗性基因ARGs的污染控制对保障猪场安全、高效、可持续发展具有重要的意义。综述了有效控制规模化猪场抗生素及耐药基因污染的具体做法,并对猪场粪污的好氧堆肥消减抗性基因工艺的优化路径进行了概括,对消除规模化猪场抗菌药抗性基因危害,保障猪场安全、高效、可持续发展具有一定的参考价值。

传统中药在人类呼吸道传染病中的应用对猪支原体肺炎防治的启示

传统中药一直在我国各种疾病的防治中发挥重要作用,尤其是面对一些较严重的传染病时,相关机构充分发挥传统医学的优势,积极推动中药应用,并充分证明了它的有效性和安全性。猪支原体肺炎是猪常见的一种慢性、接触性呼吸道传染病,在世界范围内广泛流行,给世界养猪行业带来了巨大的经济损失,它的诸多症状与人类呼吸道传染病有诸多相似之处。通过总结人类呼吸道传染病和猪支原体肺炎的相似性以及中药在人类呼吸道传染病的应用,分析目前抗猪肺炎支原体感染的防控措施及存在的主要问题,探讨其对防治猪支原体肺炎的启示,为猪支原体肺炎的防控研究提供思路和参考。

一例副猪嗜血杆菌感染引发脑膜炎的诊治报告

某猪场保育仔猪出现散发的神经症状,怀疑伪狂犬或者链球菌感染。实验室检测结果显示伪狂犬病原阴性。但在出现神经症状仔猪的脑组织中分离到大量略透明的小菌落。通过16S rRNA引物测序鉴定为副猪嗜血杆菌。药敏试验显示,该菌对头孢哌酮敏感;对恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林等药物都有明显的耐药性。