一株小鹅瘟病毒的生物学特性分析

从江苏省某发病鹅场中分离到1株疑似小鹅瘟病毒,纯化后病毒通过电镜观察可见直径约20~25 nm的病毒粒子;琼脂扩散试验结果显示该毒株与小鹅瘟阳性血清发生沉淀反应,与其他阳性血清未发生反应;人工感染雏鹅,可致发病和死亡,通过基因序列测定及遗传进化分析进一步确认该分离株为小鹅瘟病毒。该流行株与当前市售的小鹅瘟弱毒活疫苗具有较大的遗传差异,可为新疫苗的开发提供基础。

兽用生物制品质量管控现状与对策分析

目前,兽用生物制品在控制动物疫病和推动畜牧业健康发展以及有效保障动物产品质量安全等方面都起到了积极的促进作用,给人们带来了很大的经济效益。但是其依然有问题存在,人们为追求效益,降低成本,生产一些质量低劣的产品,这类产品的使用对于动物来说危害是巨大的,而且对于人们的健康也有着很大的威胁。对此,本文就以此为例,详细对兽用生物制品的质量管控进行分析,从其现状问题出发,并提出具体的解决对策。

2022年江苏省4种猪腹泻病毒分子流行病学调查

为了解江苏省猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)流行毒株的遗传变异趋势,采集了2022年江苏省不同猪场的病猪腹泻病料36份,使用RT-PCR方法分别检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV感染情况,并对部分检测结果为阳性的PEDV、TGEV、PDCoV进行S基因扩增、测序和分析,对PoRV进行VP4、VP7基因扩增、测序和分析,共获得8个PESV S基因,1个TGEV S基因,1个PDCoV S基因,9个PoRV VP4及VP7基因序列。基于PEDV S基因的序列分析结果表明,2022年江苏PEDV流行毒株与我国2010年以来流行的GⅡ-b亚群变异株的序列同源性为97.0%~99.7%,属于同一亚群,而与CV777、SD-M等早期毒株亲缘关系较远;江苏PEDV流行毒株S1蛋白区域存在氨基酸的突变、插入及缺失,不同流行毒株之间存在一定的差异。基于TGEV S基因的序列分析结果表明,江苏TGEV流行毒株与中国毒株WH-1同源性最高,为99.9%;其S基因仅发生了3个氨基酸突变。基于PDCoV S基因的序列分析结果表明,江苏PDCoV流行毒株与CHN/HG/2017株的同源性最高,为98.2%,与来自中国、越南、老挝、泰国等东南亚国家的毒株亲缘关系较近,属于同一群;江苏PDCoV流行毒株的S1蛋白区域发生6个氨基酸的突变。基于PoRV VP4及VP7基因的序列分析结果表明,江苏PoRV流行毒株属于A群轮状病毒,具有G3[P13]型、G3[P23]型、G4[P13]型、G4[P23]型、G9[P13]型、G9[P23]和G11[P13]型7个不同的基因组合型。本研究结果为掌握江苏地区PEDV、TGEV、PDCoV、PoRV的流行情况、遗传进化趋势及其防控提供了理论依据。

PK-15细胞悬浮培养猪圆环病毒2型(YZ株)增殖工艺的研究

猪圆环病毒2型（Porcinecir covims type2，PCV-2）是近年来发现的一种较难控制的传染病。该疾病主要侵害哺乳仔猪、育肥猪及怀孕母猪，其特征性临床症状为患猪体质不良、皮肤苍白，引起的疫病包括仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）、增生性坏死性肺炎（PNP）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、猪呼吸系统疾病综合征（PRDC）、繁殖障碍、先天性震颤及肠炎等。

重组型番鸭细小病毒JH10株的分子特征解析

为了解析番鸭细小病毒(MDPV)分离株JH10的分子特征,本研究对该毒株全基因组进行了扩增、测序、重组分析及遗传进化树的构建。结果显示:JH10株基因组由5071个核苷酸组成,P9启动子区和VP3基因内部约1.1 kb区域经历了重组,GPV鹅胚化弱毒株SYG61v参与了P9启动子区的重组,而GPV强毒株LH、B和SYG61v不同程度地参与了VP3基因内部的重组;以VP3基因重组片段构建遗传进化树,JH10株与8个经典型GPV株处于同一个进化分支中,而以毗邻的上下游非重组区片段分别构建的遗传进化树中,JH10株则与4个经典型MDPV株处于同一分支。本研究结果表明,JH10株为经典型MDPV和GPV之间的重组产物,该研究结果为进一步阐明重组型MDPV的致病机理奠定了基础。

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及三价灭活疫苗免疫效力分析

副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道早期定植菌也是格拉泽病的病原体,给猪场带来较严重的经济损失。为了调查副猪嗜血杆菌血清型的流行情况,采用细菌分离培养、玻板凝集法及PCR方法,从广东、广西、山东、江苏、江西45个规模化猪场送检的疑似样品中共分离鉴定了34株副猪嗜血杆菌,其中6株(17. 65%)血清4型、9株(26. 47%)血清5型、8株(23. 53%)血清12型、4株(11. 76%)血清13型以及7株(20. 59%)未定型菌株。为了有效地防控副猪嗜血杆菌病的流行,以4、5、12血清型优势流行血清型制备3价灭活苗,用仔猪免疫/攻毒试验评价3价灭活疫苗免疫保护力。动物实验表明,该疫苗对副猪嗜血杆菌4型、5型和12型具有较好的免疫保护能力。

鹅星状病毒的分离鉴定及其致病性研究

为鉴定引起河南新乡某鹅场鹅痛风的病原,采集具有典型痛风症状和病变的肝脏、肾、肺和脾组织,对病料进行病原分离、PCR扩增、序列分析、电镜观察、动物回归试验和组织病理学观察。结果显示:所分离的病原接种鹅胚后,9 d内死亡率约75%;死亡鹅胚剖检显示胚体严重水肿、紫褐色充出血、尿囊膜沉积大量的尿酸盐。基因序列检测结果表明分离株与公布的2株鹅星状病毒同源性高达98.4%~99.0%;电镜观察结果显示病毒粒子有实心和空壳2种,无囊膜,直径大小20 nm左右。动物回归试验显示可复制典型的雏鹅痛风症状,攻毒后可引起雏鹅20.0%~26.7%的死亡率,并严重影响未死亡鹅的生长性能;死亡鹅剖检可见心、肝、肺、肾等内脏表面出现明显的尿酸盐沉着。研究表明分离的病原为鹅星状病毒。

禽星状病毒研究进展

禽星状病毒属于星状病毒科。禽类临床感染禽星状病毒可引起病毒性腹泻,鸡肾炎、鸭致死性肝炎、鵝内脏痛风等疾病,导致生长发育迟缓、生产力低下,严重可导致死亡,给养殖业造成了一定的损失。文章就近年来禽星状病毒的病原、流行特点、检测方法及防控措施进行综述,以期为后期进一步研究提供参考。

四株Ⅰ群禽腺病毒的分离与鉴定

将从临床采集的发病鸡组织处理后经绒毛尿囊膜接种7日胚龄SPF鸡胚,通过PCR方法对鸡胚培养物进行鉴定,确定分离到4株Ⅰ群禽腺病毒。结合免疫学试验、病理学试验以及动物回归试验对病毒进行特性研究,结果表明分离的病毒均能致鸡死亡并表现出临床症状。使用针对Ⅰ群禽腺病毒Hexon基因的特异性引物对病毒进行基因测序分析发现,分离株均属于基因C型血清4型禽腺病毒。

一株牛病毒性腹泻/黏膜病毒株的分离与鉴定

从云南某牛场疑似BVDV感染的病料通过接种MDBK细胞分离到1株BVDV,为了解分离毒株的特性,进行了病原学和分子生物学研究。该分离毒株连传15代均不产生CPE,为NCP型BVDV。通过电镜检测可观察到直径为40~60 nm病毒粒子。该分离病毒能被牛病毒性腹泻标准阳性血清中和,且能被BVDV IFA荧光抗体识别;采用BVDV 5'-UTR基因特异性引物,经RTPCR可扩增出288 bp特异性片段。将该片段测序后与Gen Bank已发表的30株BVDV 5'-UTR序列进行同源性比较,同源性为68.7%~89.2%。与我国分离的BJ1202株(登陆号:KF925514.1)和Y2株(登陆号:KY964311.1)同源关系最近,均为89.2%。与2014年以来我国分离的BVDV毒株亲缘关系在88%左右。5'-UTR遗传进化分析证实该分离毒株为BVDV-1型。动物回归试验显示,该分离毒株可引起出现体温升高、腹泻、粘膜病等典型的BVD/MD症状。结果表明,分离的毒株为BVDV,命名为BVDV/W株。

鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗的免疫效果

为了研究鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗对种鹅的免疫效果,试验用鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗对种鹅进行接种,并对种鹅所产蛋孵出的雏鹅进行攻毒,采用琼脂扩散试验法检测鹅血清中GoAs抗体的水平,记录雏鹅攻毒结果。结果显示:三批疫苗免疫28 d后试验组种鹅均有抗体产生;对照组种鹅的抗体均为阴性。试验组雏鹅攻毒后一切正常,存活率100%,无不良临床症状。对照组雏鹅攻毒后第3天精神沉郁、厌食、站立不稳、离群、排稀灰白色或黄绿色粪便,存活率50%,死亡鹅剖检可见关节肿大,关节内和内脏表面有石灰样尿酸盐沉积,肾脏肿大和充血,脾脏出血严重,有灰白色坏死灶。研究结果表明鹅星状病毒重组Capsid蛋白亚单位疫苗免疫效果良好,能有效预防鹅星状病毒的感染。

牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的原核表达及其免疫原性

为研制检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的试剂盒,对IBRV gD蛋白主要功能域的表达及免疫原性进行研究。根据NCBI数据库录入的1型牛疱疹病毒(bovine herpesvirus type 1)gD蛋白序列(Gen Bank登录号为NC_001847)设计引物,用PCR扩增gD基因类免疫球蛋白结构域,构建原核表达载体pET32a–Δg D,转化大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达。经SDS–PAGE分析,获得了相对分子质量约43 000的目的蛋白,该蛋白的相对分子质量与gD融合蛋白的理论相对分子质量一致。经镍柱纯化后,重组蛋白的质量浓度为2.5 mg/m L,纯度约为95%,Western Blot及ELISA鉴定结果显示该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,可用于IBRV抗体检测试剂盒的开发。

免疫鸡感染马立克氏病病毒的诊断

采用细胞培养和免疫荧光试验从河南某种鸡场已免疫马立克氏病疫苗的产蛋期发病肉种鸡中成功分离到一株马立克氏病病毒,命名为MDV/He N15。用PCR方法对其pp38、meq和g B基因进行序列分析,与Gen Bank参考序列比较发现,分离株meq和pp38基因与Ⅰ型MDV毒株的同源性分别达到99.0%~99.8%和99.8%~100%,g B基因序列与参考株GX0101序列完全一致,基因上具有强毒特征。表明在免疫过疫苗的鸡群中仍然存在MDV强毒感染的风险。

血清抗体检测代替攻毒保护法评估小鹅瘟灭活疫苗免疫效果的比较研究

研究通过检测种鹅琼扩血清抗体水平和对应的被动免疫雏鹅琼扩血清抗体水平发现,当疫苗免疫剂量大于0.75 m L/只时,免疫4周时种鹅血清抗体水平及雏鹅血清抗体水平均较高。雏鹅血清抗体水平与雏鹅攻毒保护水平比较发现,雏鹅抗体(血清原液)阳性组和血清抗体效价达到1∶2及以上的雏鹅,攻毒后14日均未发生死亡,表明当雏鹅血清抗体阳性即可完全保护雏鹅,即雏鹅血清抗体水平与攻毒保护评价方法具有较高的正相关性。因此,本研究结果表明采用血清学效力检验可以替代传统动物攻毒试验方法,可作为小鹅瘟灭活疫苗效力检验的指标。

猪圆环病毒2型REP蛋白的原核表达及免疫原性鉴定

[目的]开发和研制鉴别猪圆环病毒疫苗免疫和野毒感染的ELISA检测试剂盒。[方法]根据NCBI数据库录入的2型猪圆环病毒(porcine circovirus 2,PCV-2) REP蛋白序列(Gen Bank登录号为KX828581)设计引物,利用PCR扩增REP蛋白全长基,构建原核表达载体p ET-28a-rep,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达。[结果]经过SDS-PAGE分析,获得了大小约40 ku的目的蛋白,与理论大小相一致。重组蛋白经镍柱纯化后重组蛋白浓度为40μg/m L,纯度约95%。Western Blot及ELISA鉴定结果显示,该重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。[结论]鉴于该重组蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该重组蛋白可为开发区分猪圆环病毒2型疫苗免疫和野毒感染的检测试剂盒奠定基础。

两株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离与鉴定

临床采集的发病鸽组织处理后经绒毛尿囊膜接种10日胚龄SPF鸡胚,并通过免疫学和分子生物学方法进行病原鉴定,确定分离到2株鸽Ⅰ型副黏病毒。结合免疫学试验和分子生物学试验对分离株研究发现,分离病毒与鸽新城疫病毒参考株处于同一个遗传进化分支,核苷酸序列一致性为89.6%~94.5%,分离株F蛋白裂解位点的氨基酸序列与新城疫强毒一致。表明在我国鸽群中仍存在高致病性新城疫病毒。研究结果为鸽瘟的防控提供了一定的理论基础。

Ⅰ型禽腺病毒在我国鸡群中的流行情况和防控措施

腺病毒是全世界家禽和野禽常见的传染病原。许多腺病毒可在健康禽体内复制，症状非常轻微或不表现感染症状，但有一些因素，特别是并发感染时，腺病毒可成为条件性病原。根据血清学关系，禽腺病毒可以分为12个血清型(FAdV1-12)。而国际病毒分类委员会（ICTV）将禽腺病毒的12个血清型分为5个亚群(FAdVA-E)。I群禽腺病毒在中国鸡群中发病率非常之高，且呈逐年上升趋势,且在水禽中也有发病的报道。主要造成鸡群的包涵体肝炎和心包积液两种临床类型，给养鸡企业造成较大的经济损失。笔者通过对流行地区腺病毒的跟踪监测和对病毒的分离鉴定，以了解I型禽腺病毒在我国的流行特点和现状，同时对该病的防控提供一定的措施。

C株猪瘟病毒NS3蛋白抗原表位分析及分段表达活性检测

以经典毒株C株的基因组为模板,测序后对NS3蛋白的二级结构进行分析,并对抗原表位进行预测,结果表明NS3的二级结构非常丰富并且存在丰富的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位。截获3个不同的基因区域a、b和c,并设计相应的引物,分别扩增出约645、609和615 bp的靶基因,分别用pET-28a表达载体进行重组后,获得pET-28a-NS3a、pET-28a-NS3b与pET-28a-NS3c,用表达菌株BL21(DE3)进行表达,b段表达较高,可溶性表达较好,纯化后,可获得重组蛋白CSFV-His-NS3b, SDS-PAGE验证表达的重组蛋白大小约为27 kD,Western-Blot证实其具有良好的免疫原性,并且通过ELISA测得蛋白浓度约5 mg/mL,表明该蛋白特异性很强,可用于猪瘟诊断试剂盒的开发应用。

江苏省猪伪狂犬病流行病学调查及两种疫苗免疫效果评估

为了掌控江苏地区规模化猪场伪狂犬病野毒的感染情况及其流行性趋势,比较变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的免疫防控效果。于2017年5月份至2019年1月份对江苏地区59个规模场进行采样,通过间接ELISA方法检测猪群中的gE抗体来鉴定猪群是否被伪狂犬病野毒感染。另外,在一猪伪狂犬病阳性的规模猪场进行变异株猪伪狂犬病疫苗(C株)和Bartha-K61疫苗的防控效果的实验,通过检测猪伪狂犬病gE,gB抗体及中和抗体来判定猪群的猪伪狂犬病抗体保护水平。显示4608份检测血样中,gE阳性1681份,阳性率36%,母猪群gE阳性率46%,育肥猪群gE阳性率28%,59个猪场中育肥阶段gE阳性的猪场22个,占比37%。在其中一个商品猪群gE抗体100%阳性猪场进行2组猪伪狂犬病疫苗的实验,通过实验2组商品猪gE抗体18周龄至出栏前均为阴性,同时检测发现变异株疫苗(C株)对经典株和变异株的中和抗体效价均高于Bartha-K61疫苗。结果表明,江苏地区猪伪狂犬病感染压力较大,另外C株疫苗相对于进口的Bartha-K61株疫苗在本场的免疫效果更佳。

传染性法氏囊病疫苗防控进展

传染性法氏囊病（InfectiousBursalDisease，IBD）又称甘布罗病（GumboroDisease），最早于1962年在美国特拉华州甘布罗市发现，是由传染性法氏囊病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus，IBDV）引起鸡的一种高度接触性传染病。IBDV主要侵害雏鸡法氏囊内的B淋巴细胞，损伤法氏囊，