哺乳动物的肝静脉系

在分叶明显的肝脏,每叶均有肝静脉汇集其静脉血。左内侧叶和右内侧叶之间发生愈合的肝脏,其间出现肝中静脉。马属动物方叶与右叶之间有较深裂隙,肝中静脉缺如。愈叶程度高的肝脏(牛、羊),主要肝静脉仅为左、中、右三支,故肝静脉的数量与愈合相关。国际兽医解剖学名词(NominaAnatomicaVeterinaria,N.A.V.)的相关条目是不合适的,应予补充。

哺乳动物肝内门管鞘系统的相似性和肝脏类型

作者通过对猪、牛、羊、马、驴、兔、狗、猕猴、梅花鹿等动物肝内门管鞘系统的观察 ,发现哺乳动物和人的门管鞘系统是相似的 ,全肝均可分为左、右二叶和左外侧段 ,左内侧段 ,右内侧段 ,右外侧段。作者认为哺乳动物肝脏在外形上的主要区别在于愈合程度不一 ,并可按愈合情况将哺乳动物肝分为多叶类型和全愈合类型。

鸡γ-干扰素基因的克隆及其在原核和真核系统中的表达

应用一步法逆转录—聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术对罗曼蛋鸡γ_干扰素基因 (CHIFN_γ)进行了扩增。试验结果表明 ,在植物血凝素 (PHA) 5 0 0 μg/mL、细胞浓度 2 .5× 1 0 6/mL、诱导 1 0h,能从外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞的总RNA中扩增出特异性片段。将RT_PCR产物克隆到PGEM_Teasy载体 ,经过限制性酶切分析、测序证实克隆到的CHIFN_γ基因正确 ,命名为PGEM_CHIFN_γ。序列分析表明 ,CHIFN_γ基因与已发表的鸡IFN_γ基因的同源性为 95 .6%～ 1 0 0 % ,氨基酸水平同源性为 92 .8%～ 1 0 0 % ,与鸭IFN_γ核苷酸同源性为 67.5 %。将CHIFN_γ基因克隆到原核表达载体pGEX_6P_1的GST基因的下游 ,经IPTG诱导后表达出了 43kD的融合蛋白 ,超声波裂解后发现融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,裂解上清无抑制病毒活性 ;然而将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3 .1中 ,通过脂质体转染COS_1细胞 ,用鼠抗CHIFN_γ高免血清进行间接免疫荧光试验 (IFA) ,结果表明在COS_1细胞的细胞膜和胞浆内均有CHIFN_γ表达 ,且细胞病变抑制试验证实 ,转染后细胞培养上清有干扰素活性 ,在鸡胚成纤维细胞 (CEF)上抑制VSV病毒的效价可达到 1 0 2 4U/ml。这些结果表明真核表达系统对CHIFN_γ基因表达产物的活性有重要影响。

SV40T基因转化的山羊乳腺上皮细胞系及其生物学特性

目的 建立能用于乳腺特异表达基因构件质量检验的山羊乳腺上皮细胞系。方法 根据已发表的SV4 0病毒T基因序列设计引物 ,以整合有SV4 0DNA早期基因区的COS 1细胞基因组DNA为模板 ,用高保真PCR扩增SV4 0T基因。将获得的SV4 0T基因克隆入真核表达载体 ,并用获得的重组表达质粒转染山羊原代乳腺上皮细胞。经有限稀释和反复传代后获得转化细胞克隆 ,对其生物学特性进行研究。结果 扩增出序列正确的SV4 0T基因 ,重组质粒转染获得的转化细胞的对数生长期为接种后第 4天 ,细胞群体倍增时间为 2 3 5h ,克隆形成率为2 6 7%。DNA斑点杂交试验证明转化细胞的基因组中整合有SV4 0T基因 ,染色体核型分析试验表明转化细胞的核型无明显异常 ,裸鼠接种试验证明转化细胞不能形成肿瘤 ,软琼脂集落形成试验表明转化细胞在软琼脂中不能生长。部分细胞克隆已在体外传 30代以上 ,保持正常乳腺上皮细胞的形态特征 ,在胶原基质上能形成腺泡样结构。结论 本研究获得的SV4 0T基因转化的山羊乳腺上皮细胞具有转化细胞系的生物学特性。

犬瘟热病毒扬州分离株融合蛋白F和附着蛋白H基因的序列分析

根据Genbank犬瘟热病毒(CDV)毒株序列分别设计融合蛋白F和附着蛋白H全基因的2对引物,以2个CDV扬州分离株(CDV-YZ0101、CDV-YZ0102)为模板RT-PCR扩增出H基因和F基因2个片段,将其克隆进pGEM-Teasy载体,并进行序列分析。结果表明:H基因的开放阅读框架(ORF)为1 824 bp,2种分离株间核苷酸和编码氨基酸同源性达98％左右,与中国长春分离株、美国、日本分离株的同源性分别为96％、93％-95％和90％-91％。氨基酸分析显示扬州分离株与其他分离株的H蛋白有8-9个可能的天冬酰胺糖基化位点,而OP-CDV疫苗株只有4个类似位点。扬州分离株与长春分离株同属一个系,与美国、日本分离毒株以及疫苗株相比,均存在着明显的差异。F基因ORF为1 989 bp,不同毒株间的核苷酸及编码氨基酸差异主要表现在信号肽区域,而编码的F0前体蛋白表现出较高同源性(97％-99％),且所有的13个半胱氨酸残基、4个可能的天冬氨酰糖基化位点和2个疏水区域均完全一致。因此CDV F与H蛋白基因相比有很高的同源性,证明中国分离株与国外参考株有差异。

小型动物静脉缓冲采血技术的研究

采用缓冲负压采血技术 ,以采样管作为负压缓冲室 ,根据不同动物的特点 ,分别在禽类、兔、鼠、羊等小动物进行试验 ,选择合适的采血部位 ,研究其采血效果。结果表明 :采用该技术能够快速。

江豚肝内门静脉系的初步观察

The portal venous system within liver of Neophocaena phocaenoides asiaeorientalis was observed. The portal venous system is similar to other mammals (pig, rabbit, ox, dog, goat, rhesus monkey). The R. sinister of the portal vein gives off the v.dorsalis lobi sin lat.,the v. ventralis lobi sin.lat., the v. lateralis lobi sin.med.,the v. medialis lobi sin,med.,Rr.lobi caudati and Rr.lobi quadrati; the R. dexter of portal vein gives off the v. lobi dext.med.,the v. lobi dext.lat. and the V. processus caudati. It seems that the portal venous system of aquatic mammals and terrestrial mammals show no obvious difference.

一株鸡副粘病毒的分子特性研究

应用 RT-PCR技术对新城疫病毒 ( NDV) Y98株的 F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定 ,并与多株已报导的 NDV参考株相应片段进行序列比较 ,经遗传基因进化树分析后 ,首次报道了基因

鹅副粘病毒F蛋白基因的克隆和序列分析

鹅副粘病毒分离株YG97经 10日龄鸡胚增殖后纯化 ,提取病毒的基因组RNA ,采用RT_PCR一次性扩增出与预期设计的 1.7kb大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯后克隆入pGEMR_T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,初步获得了含鹅副粘病毒F基因的阳性克隆。将所获得的阳性重组质粒进一步进行了序列鉴定。序列分析表明扩增的F基因片段的长度为16 95bp ,共编码 5 5 3个氨基酸 ,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112 R_R_Q_K_P_F117,与NDV的强毒株特征相符 ,同时也与鹅副粘病毒分离株致病性实验结果相符。同源性分析表明 ,与国内标准强毒株F48E9的核苷酸同源性为 86 % ,与国内外其它毒株的核苷酸同源性在 82 %～ 89%之间 。

犬细小病毒分离株VP2基因的克隆与序列分析

以犬细小病毒 (Canine parvovirus,CPV)扬州分离株病毒的 DNA为模板 ,根据基因库 CPV-d序列设计合成了VP2基因的 1对特异引物 ,进行聚合酶链式反应 ,扩增出约 1 .7kb的片段 ,按常规方法克隆进 p UC1 8载体 ,经 Eco R 和Sal 双酶切筛选到阳性质粒 ,进一步对该片段进行序列分析。结果表明 :所扩增基因片段长度为 1 740 bp,与美国参考株 CPV-d (type 2 )、CPV-1 5 (type 2 a)、CPV-3 9(type 2 b)相比较 ,核苷酸同源性分别高达 99.5 %、99.7%、99.7%。

我国部分地区禽源性大肠杆菌的外膜蛋白型

测定了从我国１８个省、市、自治区分离到的２０４个禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株的外膜蛋白型（ＯｕｔｅｒＭｅｍｂｒａｎｅＰｒｏｔｅｉｎＰａｔｅｒｎｓ，ＯＭＰ型）。这些分离株共产生了４个ＯＭＰ型，５６个Ｏ１８分离株可分为３个ＯＭＰ型，５４个Ｏ７８分离株、２８个Ｏ２分离株、２６个Ｏ８８分离株、２２个Ｏ１１分离株和１８个Ｏ２６分离株，分别出现了４、２、１、３和１个ＯＭＰ型。其中，ＯＭＰ１型为６个血清型所共有，ＯＭＰ３型则同时存在于Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２和Ｏ１１分离株中。结果表明，优势血清型中，Ｏ１８、Ｏ７８、Ｏ２和Ｏ１１分离株具有多样性的ＯＭＰ型，而Ｏ８８、Ｏ２６分离株的ＯＭＰ型则高度一致。

中国部分地区新城疫病毒的分子流行病学研究

选取 1 994年以来从中国部分地区分离的 8株新城疫病毒 ( NDV)野外毒株 ,用反转录聚合酶链式反应 ( RT PCR)技术扩增其 F基因重要的功能区片段 ,同时进行克隆和序列测定 ,构建 NDV的遗传进化树 ,分析其遗传关系 .结果表明 :所分离的毒株在分裂位点的氨基酸顺序均相当于 NDV的强毒株 .通过遗传进化树分析表明 8株分离株中有 7株为基因 VII型新城疫病毒 ,说明基因

禽大肠杆菌病免疫保护机理的研究

以禽病原性大肠杆菌O18、O78分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫 14日龄鸡 ,以相同或不同外膜蛋白型 (Outermembraneproteinpattern ,OMP型 )的O18、O78分离株攻毒。结果表明 :O78血清型相同和不同OMP型分离株间能获得最大保护 ;O18血清型相同OMP型分离株间获得最大保护 ,而不同OMP型分离株间不能保护 ;上述两个血清型的分离株间不论OMP型是否相同 ,均缺乏保护。以间接ELISA试验、间接血凝试验分别测定了试验鸡临攻毒前针对大肠杆菌OMPs和脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)的抗体。结果表明 :免疫组鸡血清上述两种抗体明显高于攻毒对照组 ;在免疫组 ,存活鸡临攻毒前血清中上述两种抗体滴度恒高于死亡鸡 ,但除 3个组外 ,多数组差异不显著 ;攻毒对照组这一关系不稳定。结果说明 :禽大肠杆菌疫苗的免疫保护 ,主要与O血清型有关 ,部分与OMP型有关 ,如O18分离株 ;免疫保护性抗原含OMPs。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术的建立

根据病毒基因组特征,以聚合酶链反应(PCR)为基础,建立一种能快速鉴别马立克氏病(MD)、禽白血病(AL)和网状内皮增生症(RE)3种常见鸡肿瘤病的诊断技术。研究确定以MDV的132 bpr及ALV和REV的LTRs作为PCR扩增的特异性基因片段,改进样品DNA的提取程序,优化PCR及三重PCR的反应条件及参数,并对该诊断技术的特异性、敏感性进行研究。结果表明:建立的诊断技术具有特异、敏感、快速、经济的优点,为开发鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒奠定了基础。

奶牛γ-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达

根据奶牛γ干扰素 ( Bov IFN-γ)基因的 c DNA序列设计 1对引物 ,应用一步法逆转录聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术从奶牛脾淋巴细胞的总 RNA中扩增出特异性片段。将 RT-PCR产物克隆到 Pucm-T载体中 ,经过限制性酶切分析、测序证实扩增得到的 Bov IFN-γ基因序列正确。将该基因片段切下并克隆到大肠杆菌表达载体 PGEX-6P-1谷光甘肽 S 转移酶基因的下游 ,经 IPTG诱导后 ,表达出 42 ku的融合蛋白 ,薄层扫描测定可溶性融合蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的 2 5 %。通过细胞病变抑制试验证实 ,融合蛋白具有较好的生物学活性 ,在牛肾细胞上抑制水泡性口炎病毒的活性可达到 1 63 84U· mg- 1 ,有望成为预防和控制奶牛疾病的新产品。

利用PCR法鉴定产SLT-IIe大肠杆菌

类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ Ｓｈｉｇａｌｉｋｅ Ｔｏｘｉｎ Ⅱ Ｖａｒｉａｎｔ， Ｓ Ｌ ＴⅡｖ ｏｒ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ），是仔猪水肿病的主要致病因子。根据 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 基因序列，合成一对针对 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 操纵子基因保守区的寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）扩增方法。通过对产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 毒素大肠杆菌菌株 Ｔ Ｂ１、产 Ｓ Ｌ ＴⅡ毒素大肠杆菌菌株 ９３３ Ｗ 和产 Ｓ Ｌ ＴⅠ毒素大肠杆菌菌株 Ｈ３０ 的试验，结果表明用所设计的引物建立的 Ｐ Ｃ Ｒ方法可特异性鉴定产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 大肠杆菌。用此法对本实验室从患水肿病仔猪肠道分离的 １５ 株大肠杆菌进行了鉴定，结果可从 １５ 个菌株的 １２ 株中扩增到 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 的特异性保守序列基因片段，而其它菌株未见此保守序列的基因片段。

重组融合蛋白GST SLT ⅡeB表达条件的研究

通过在不同温度、不同诱导时间、不同异丙基硫代 β Ｄ 半乳糖苷（ＩＰＴＧ） 诱导浓度条件下，对重组大肠杆菌ＰＰＳＬＴ ⅡｅＢ 表达的谷胱甘肽 Ｓ 转移酶（ＧＳＴ） 与类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体Ｂ 亚单位（ＳＬＴ ⅡｅＢ） 的融合蛋白（ＧＳＴ ＳＬＴ ⅡｅＢ） 的分析，结果表明：在所试条件中，温度是影响表达的主要因素，重组大肠杆菌（ＰＰＳＬＴ ⅡｅＢ） 在２８ ℃温度条件下，可以明显表达融合蛋白ＧＳＴ ＳＬＴ ⅡｅＢ． 在ＩＰＴＧ 为１ｍｍｏｌ·Ｌ－ １ 浓度条件下，２ ｈ 的诱导即可获得明显表达． 在所试几种ＩＰＴＧ 诱导浓度下，通过５ ｈ 的诱导，均可获得明显表达．４００ ｍＬ２ＸＹＴＡ 培养基产生的融合蛋白在１ ．８ ｍｇ 以上．

禽病原性大肠杆菌1型菌毛的分离与鉴定

以旋涡混合法使禽病原性大肠杆菌分离株５６６ 、１７９４ 和ＴＫ３ 菌毛脱落，经硫酸铵沉淀、透析后进行蔗糖密度梯度离心，收集密度为１１０ 至１１５ｇ／ｃｍ３ 的蛋白带，经ＳＤＳＰＡＧＥ测定，３ 株菌菌毛蛋白的分子量分别在１７５ 、１７０ 和１７０ｋＤ；提纯菌毛保留了甘露糖敏感性凝集豚鼠红细胞的能力，证明它们为１ 型菌毛；从１７９４ 株提取的１ 型菌毛免疫ＢＡＬＢ／Ｃ 小鼠产生的高免血清在Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 中与３ 个菌株的相应菌毛蛋白均呈阳性反应。上述结果表明，受检的３ 株禽病原性大肠杆菌均表达了１ 型菌毛，其分子量在１７５ ～１７０ｋＤ 之间，３ 个菌株的１

鸡副粘病毒病的病毒特性和基因型研究及疫病防制

用 SPF鸡胚分别从不同患病鸡群中分离到 4株病毒 ,经病毒学鉴定 ,该病毒为禽副粘病毒 型 .根据新城疫毒力的国际判定标准测定 ,4株病毒均属于新城疫强毒株 ;人工感染 71周龄 SPF鸡均 1 0 0 %发病致死 ;应用 1株鹅副粘病毒制备的具有对禽副粘病毒 型共同的群特异性单抗和仅对鹅副粘病毒毒株、鸡副粘病毒毒株呈阳性反应 ,而对新城疫 F4 8E8,Lasota等毒株不发生反应的特异性单克隆抗体 ;应用RT-PCR技术对禽副粘病毒 型分离株 F基因的部分片段进行扩增、测序 ,并绘制基因进化树作分析 .结果表明 :鸡副粘病毒株为基因 型 .用 Y98毒株和 T99毒株制备的油乳剂灭活苗经试验和生产应用 。

选择优良菌株用于仔猪水肿病疫苗的改进

传统的仔猪水肿病疫苗 (目前市场上广泛使用 ) ,只是以致水肿病大肠杆菌菌株的O抗原为基础 ,而没有考虑水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原 ,其免疫效果难以提高。在仔猪水肿病疫苗的改进中 ,我们除了考虑O13 9、O18、O14 1菌体抗原之外 ,还利用PCR技术、单克隆抗体技术、电镜技术筛选了含有水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原的菌株。本研究中获得用于新一代仔猪水肿病疫苗的三型大肠杆菌菌株 :O13 9:SLT_lle+ :F18ab+ 、O13 8:SLT_lle+ :F18ab+ 以及O14 1:SLT_lle+ :F18ac+ 。