磷酸二酯酶4抑制剂在中枢神经系统疾病中的作用研究进展

磷酸二酯酶(PDE)通过催化细胞内的环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的水解参与调节神经元可塑性、突触发生、突触传递、记忆形成和认知功能等细胞生理过程及功能发挥。大量基础和临床研究证明PDE4抑制剂主要通过抑制cAMP水解、提高cAMP含量,增强其下游效应,从而改善中枢神经系统疾病的发生和发展。PDE4抑制剂可提高长时程增强效应、海马神经元cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化和记忆相关Arc基因的表达,从而改善认知和记忆障碍以及阿尔茨海默病样症状;通过减轻α-突触核蛋白诱导的细胞毒性,增加miR-124-3p对细胞活性的作用而抵抗帕金森病的发生发展;可激活cAMP/PKA/CREB通路,从而减弱神经炎症和氧化应激,增强神经可塑性,改善精神分裂症;通过抑制海马的晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、Toll样受体4和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3通路降低小胶质细胞激活和IL-1β产生,下调HMGB1/RAGE信号通路和抑制炎症因子,在抑郁症中发挥作用;通过减少小脑神经胶质细胞损伤,增加伤害性感受阈值,改善相互学习和记忆缺陷,从而在孤独症谱系障碍的治疗中发挥作用;通过调节cAMP含量影响脆性X智力低下蛋白表达,有望应用于脆性X染色体综合征治疗;促进少突胶质祖细胞分化并增强髓鞘形成而影响多发性硬化症治疗。PDE4与双向情感障碍也有关,可能作为治疗靶点之一。目前还有不少PDE4抑制剂处于中枢神经系统疾病的临床试验阶段。本文综述了PDE4抑制剂治疗中枢神经系统疾病的基础研究和临床试验进展,以期为中枢神经系统疾病的预防和治疗提供新的思路,为中枢神经系统药物的研发提供新策略。

PDGF-BB诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的探讨血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的最佳干预时间及浓度,并鉴定其向成骨细胞分化的能力。方法体外分离培养新西兰大白兔BMSCs原代细胞,选用3代细胞用于PDGF-BB干预实验。将筛选好的细胞接种于96孔培养板中,分为空白组:加DMEM完全培养基;对照组:BMSCs+DMEM完全培养基;其余各组采用PDGF-BB干预浓度分别为10、25、50、100 ng/mL。分别于干预的24、72、120、168 h用CCK-8法检测每组浓度对细胞的增殖作用,筛选出PDGF-BB对BMSCs干预的最佳时间及浓度。诱导后的细胞用细胞免疫化学法鉴定骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、Runt相关转录因子2(Runx-2)、Ⅰ型胶原(COL-IA1),免疫荧光鉴定OCN。结果在不同的时间点PDGF-BB干预BMSCs的吸光度值改变不同,差异有统计学意义(F=441.351,P<0.01),表明不同浓度PDGF-BB干预BMSCs后,细胞增殖是不同的。25 ng/mL PDGF-BB组与其他5组比较差异均有统计学意义(P<0.01),干预72 h增殖率最高。诱导后的细胞免疫化学染色OCN骨钙素、Runx-2、COL-1均为阳性,OCN骨钙素的免疫荧光表达也是阳性,且阳性率>90%。结论25 ng/mL PDGF-BB组干预BMSCs在72 h是对细胞增殖作用最强,诱导后的细胞可以分化为成熟的成骨细胞,为下一步诱导后细胞移植治疗牵张成骨模型奠定了基础。

黑加仑浆果提取物对宫颈癌化疗影响的实验研究

目的:研究黑加仑浆果提取物(Blackcurrant,BC)对宫颈癌化疗的减毒增效作用。方法:建立宫颈癌移植瘤裸鼠模型,随机分为4组:模型组、5-氟脲嘧啶(5-Fu)组、BC组、5-Fu+BC组,干预14 d结束实验,检测各项指标。结果:各干预组瘤体积、瘤重明显低于模型组,5-Fu+BC组瘤体积和瘤重分别为(0.312±0.026)cm^3、(0.45±0.04)g,大于5-Fu组的(0.210±0.018)cm^3、(0.30±0.03)g。5-Fu+BC组白细胞数为(3.52±0.43)×10~9/L,5-Fu组为(3.64±0.40)×10~9/L,两组差异无统计学意义。结论:黑加仑浆果提取物对5-Fu治疗移植性裸鼠宫颈癌未引起减毒增效作用。

一种适合动态研究的大鼠深静脉血栓动物模型

目的建立一种适合动态研究的大鼠深静脉血栓动物模型。方法将60只体重为(230±20)g的SD大鼠按随机数字表法分为3组:动物模型组36只,对照组18只,假手术组6只。动物模型组采用改良下腔静脉结扎法制备动物模型,造模后观察血管内膜及血栓不同时期的病理变化,并与对照组及假手术组做观察比较。结果采用改良法制作模型后,大鼠下腔静脉内不仅均形成稳定的血栓,而且形成血栓的血管段的近心端保持通畅,符合人体静脉血栓形成急性期的病理演变。结论成功制作适合动态研究的大鼠深静脉血栓动物模型。

阿魏海螵蛸软胶囊的急性毒性和长期毒性实验研究

目的观察阿魏海螵蛸软胶囊的急性毒性和长期毒性反应,为临床用药提供参考依据。方法急性毒性实验:选取KM小鼠70只,按体质量随机均分为7组,每组10只,实验组小鼠分别给予6个不同浓度剂量的阿魏海螵蛸软胶囊(32.0、25.6、20.5、16.4、13.1、10.48g/kg体质量),空白对照组小鼠给予等容积的蒸馏水,给药容积为0.4mL/10g体质量,灌胃给药1次,观察小鼠急性毒性反应。长期毒性实验:SD大鼠150只,按体质量随机均分为5组:空白对照组、溶媒对照组及阿魏海螵蛸软胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组(0.313、0.626、3.132g/kg)。空白对照组给予等容积蒸馏水,溶媒组给予等容积的大豆油,给药容积1mL/100g体质量,灌胃给药,每天1次,连续90d,停药后恢复性观察2w。连续给药1个月、3个月及恢复期2w时,对大鼠进行血液常规学、血液生化学指标测定,计算脏器系数,观察脏器组织病理学变化。结果急性毒性实验表明:阿魏海螵蛸软胶囊对小鼠的LD50=15.658g/kg(95%置信区间13.783~17.640g/kg)。长期毒性实验表明:在给药期与空白对照组比较,阿魏海螵蛸软胶囊高剂量组大鼠的血常规和血生化指标中RBC、HGB、HCT、TG、TC降低,MCH、MCV、ALT、ALP升高(P<0.05),阿魏海螵蛸软胶囊中剂量组大鼠血清中TG含量降低(P<0.05),差异有统计学意义,但各指标均在正常参考值范围内。停药2w后与空白对照组比较,阿魏海螵蛸软胶囊高剂量组大鼠血清中Glu降低(P<0.05)。阿魏海螵蛸软胶囊高、中、低剂量组大鼠在给药期间及恢复期各脏器系数与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),组织病理学检查亦未见病理改变。结论阿魏海螵蛸软胶囊在临床拟用量范围内使用具有一定安全性。

甘草酸介导miRNAs对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨miRNAs在甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤过程中的作用及其机制。方法将45只雄性SD大鼠随机分成甘草酸组(灌胃56%白酒和甘草酸)、模型组(灌胃56%白酒)和对照组(灌胃蒸馏水),给药8周后采集血液和肝组织。检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;提取肝组织RNA,大鼠miRNA芯片检测,对miRNA表达量进行分析,对差异miRNA进行靶基因预测,并采用Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway富集分析了解差异miRNA的功能,使用Cytoscape构建差异miRNA-mRNA-Pathway调控网络进一步筛选调控关键miRNA与通路,qRT-PCR对挑选的miRNA进行表达量验证分析。结果与模型组相比,甘草酸组能改善肝组织病变,降低肝血清AST和ALT水平(P<0.05)。通过比较分析甘草酸组和模型组芯片数据,共筛选出差异表达miRNA 13个(P<0.05,fold change≥1.5),其中上调10个,下调3个。差异miRNA靶基因GO分类注释显示,差异miRNA主要与细胞黏附、抗氧化活性、代谢过程、生物过程调控、细胞杀伤、免疫系统等功能相关。差异miRNA靶基因KEGG Pathway通路分析显示,MAPK信号通路、mTOR信号通路、Ras信号通路、Hippo信号通路、PI3K-Akt信号通路、wnt信号通路、细胞凋亡等信号通路可能在甘草酸改善酒精性肝损伤病变过程中发挥着重要的调控作用。结论该研究建立了甘草酸治疗大鼠酒精性肝损伤的miRNA表达谱,提示miR-615、miR-107-3p和miR-292-5p可能在甘草酸治疗酒精性肝损伤过程中起着重要的作用。

松弛素抑制氧化应激反应保护小鼠心肌微血管内皮细胞的缺氧/复氧损伤

背景:松弛素是人松弛素2的重组形式,作为机体内源性抗纤维化活性物质,松弛素治疗可能会缓解急性心力衰竭患者的症状并改善其预后,但尚未有研究松弛素在氧化应激方面对缺氧/复氧损伤小鼠心肌微血管内皮细胞(H5V)的作用。目的:探讨松弛素在小鼠H5V细胞缺氧/复氧损伤模型中的作用。方法:建立小鼠H5V细胞缺氧/复氧损伤模型,分别为缺氧3,6,12 h,复氧3 h,通过检测细胞活力和乳酸脱氢酶活性确定细胞缺氧/复氧的最佳时间。选用不同质量浓度的松弛素(0,60,100,140,180 ng/mL)作用于H5V细胞缺氧/复氧损伤模型,通过检测细胞活力和乳酸脱氢酶活性确定松弛素干预的最佳质量浓度。在此基础上,将H5V细胞分为3组:对照组、缺氧/复氧模型组、缺氧/复氧+180 ng/mL松弛素组,检测丙二醛、超氧化物歧化酶和活性氧水平。结果与结论:(1)与对照组比较,缺氧6 h/复氧3 h、缺氧12 h/复氧3 h的细胞活力均显著降低(P<0.05),细胞上清中乳酸脱氢酶活性均显著增加(P<0.05),选取缺氧6 h/复氧3 h进行后续实验;(2)与缺氧/复氧模型组比较,缺氧/复氧+松弛素180 ng/mL组细胞活力显著增加(P<0.05),细胞上清中乳酸脱氢酶活性显著降低(P<0.05),选取松弛素180 ng/mL进行后续干预实验;(3)与缺氧/复氧模型组比较,缺氧/复氧+180 ng/mL松弛素组活性氧、丙二醛水平显著降低(P<0.05),超氧化物歧化酶水平显著增加(P<0.05);(4)结果表明,H5V细胞经缺氧6 h/复氧3 h可建立H5V细胞损伤模型,经180 ng/mL松弛素干预后提高了细胞活性和细胞抗氧化应激能力。

松弛素保护心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制

背景:研究报道松弛素可显著改善病理因素导致的心肾功能障碍,抑制心肌肥厚、抗纤维化以及改善缺血再灌注损伤等,但其对内皮细胞缺氧复氧损伤的保护机制尚不明确。目的:探讨松弛素保护心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制。方法:取生长状态良好的小鼠心肌微血管内皮细胞系(H5V),分3组处理:对照组常规培养33 h,模型组常规培养24 h后给予6 h缺氧+3 h复氧模拟心肌缺氧再灌注损伤,松弛素组常规培养(加180 ng/mL松弛素)24 h后给予6 h缺氧+3 h复氧(加180 ng/mL松弛素)模拟心肌缺氧再灌注损伤。检测细胞通透性与Caspase-3的表达,细胞上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平,RT-PCR检测细胞中钙黏蛋白、Akt1、GSK-3βmRNA表达;Western blot检测细胞中钙黏蛋白、Akt、GSK-3β蛋白表达。结果与结论:(1)与对照组比较,模型组细胞通透性增强(P<0.05),细胞内Caspase-3表达升高(P<0.05);与模型组比较,松弛素组细胞通透性降低(P<0.05),细胞内Caspase-3表达降低(P<0.05);(2)与对照组比较,模型组上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平升高(P<0.05);与模型组比较,松弛素组3种炎症因子水平降低(P<0.05);(3)3组间细胞中钙黏蛋白、Akt1、GSK-3βmRNA表达比较差异无显著性意义(P>0.05);(4)3组间细胞中钙黏蛋白、Akt、GSK-3β总蛋白表达比较差异无显著性意义(P>0.05);与对照组比较,模型组磷酸化钙黏蛋白、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,松弛素组磷酸化钙黏蛋白、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05);(5)结果表明,松弛素治疗通过增强钙黏蛋白表达,减少缺氧复氧引起的小鼠心肌微血管内皮细胞损伤,抑制炎症因子的释放,减轻细胞凋亡,该作用可能与激活Akt/GSK-3β信号通路有关。

miRNAs在大鼠酒精性肝损伤中的作用研究初探

目的 探讨miRNAs在大鼠酒精性肝损伤病变过程中的作用及其机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分成模型组和对照组,模型组灌胃56%白酒,对照组灌胃蒸馏水,连续8周;解剖取肝组织,采用大鼠miRNA芯片对肝中miRNAs进行检测,对其表达量进行分析,对差异miRNA进行靶基因预测,并采用Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway富集分析了解差异miRNA靶基因的功能,使用Cytoscape构建差异miRNA-mRNA-Pathway调控网络进一步筛选调控关键miRNA与关键通路,RT-qPCR对挑选的miRNA进行表达量验证分析。结果 通过比较分析模型组和对照组芯片数据,共筛选出差异表达miRNA 12个(P<0.05,Fold change≥2),其中上调2个,下调10个。差异miRNA靶基因GO分类注释显示,差异miRNA与信号转导、代谢过程、抗氧化活性、细胞杀伤、酶调控活性、生物调控等生物功能密切相关。差异miRNA靶基因KEGG Pathway通路分析显示,AMPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、Hippo信号通路、Wnt信号通路、癌症、自噬、胰岛素抵抗、Ras等信号通路可能在酒精性肝损伤病变过程中发挥着重要的调控作用。通过构建差异miRNA-mRNA-Pathway调控网络筛选出的Hub miRNA和通路有miR-145-5p、miR-107-3p、miR-297、Hippo信号通路、癌症、PI3K-Akt信号通路、AMPK信号通路等。qRT-PCR结果显示挑选验证miRNA表达变化趋势和基因芯片结果一致。结论 本研究建立了大鼠酒精性肝损伤miRNA表达谱,提示miR-145-5p、miR-107-3p及miR-297可能在肝酒精性病变过程中起着重要的作用。

单核细胞源性巨噬细胞MAC387对肝泡型包虫病患者肝脏炎症与纤维化的作用

目的通过检测肝泡型包虫病(AE)患者肝组织中MAC387的表达水平,探讨其在肝脏炎症和纤维化中的作用。方法收集新疆医科大学第一附属医院2020年6月至2022年3月收治的32例AE患者肝脏组织标本,分为病灶近旁肝组织(CLT组)与远端对照肝组织(DLT组)。通过HE染色和天狼星红染色分别评估患者肝组织病理学炎症改变及胶原沉积,并对CLT组进行炎症分级评分和纤维化分期评分;用免疫组织化学实验分别检测CLT组和DLT组MAC387的阳性表达,并将AE患者分为MAC387高水平组和MAC387低水平组,分析临床主要肝功能生化指标的相关性及手术前后各指标的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测两组肝组织MAC387mRNA的表达。结果与DLT组相比,CLT组肝脏中MAC387显著增加(P<0.001)。此外,与炎症分级评分和纤维化分期评分较低的患者相比,炎症分级评分和纤维化分期评分较高的患者肝脏中MAC387浸润更多(P<0.001),且MAC387高水平组与ALT、AST呈正相关(ALT:r=0.523,P=0.013;AST:r=0.503,P=0.017),与GGT、ALP、Alb无显著相关性(均P>0.05),MAC387低水平组与ALT、AST、GGT、ALP、Alb均无相关性(均P>0.05)。术后第9天,MAC387低水平组的GGT水平高于MAC387高水平组,且差异有统计学意义(P<0.05)。CLT组MAC387mRNA表达显著高于DLT组(P<0.05)。结论MAC387在肝泡型包虫病患者肝组织中高表达,并且在炎症分级评分和纤维化分期评分较高患者中浸润增加,提示可能在加重AE的肝脏炎症和纤维化中发挥作用。

大鼠肝缺血再灌注损伤对心脏能量代谢和结构的影响及其机制

目的:探讨肝缺血再灌注损伤对心脏能量代谢和结构的影响及其可能的发生机制。方法:健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为对照组、缺血30min组(I组)及缺血30min再灌注即刻组、2h组、4h组和6h组(I/R组、I/R2h组、I/R4h组和I/R6h组),每组8只。用偶氮显色法测定血清中的内毒素,用放射免疫法测定心肌组织胰岛素和胰岛素抗体,取心肌制备组织匀浆测丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO),乳酸含量。结果:在肝缺血再灌注损伤过程中,内毒素在I组和I/R组达到高峰,随着再灌注时间的延长逐渐下降,但仍高于对照组(P<0.05)。I组及I/R各组MDA的含量明显高于对照组,在I/R2h组、I/R4h组、I/R6h组差别更为明显(P<0.05);再灌注各组MPO活性明显高于对照组、I组(P<0.05);随着再灌注时间的延长,心肌组织中乳酸含量明显增加(P<0.05),但在I/R6h组呈下降趋势(P<0.05);胰岛素的含量在I/R4h组和I/R6h组明显下降(P<0.05);而胰岛素抗体在各组间无显著差异(P>0.05)。结论:肝缺血再灌注损伤过程中,肠源性内毒素吸收入血及肝脏解毒功能的降低所致的内毒素血症可能是引起心脏能量代谢和结构改变的始动环节。

血小板衍生生长因子BB促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖

背景:研究报道小鼠前破骨细胞分泌的血小板衍生生长因子BB可以促进成骨细胞和成血管细胞形成,而应用血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的最佳浓度及最佳时间尚不明确。目的:探讨血小板衍生生长因子BB对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的最佳干预质量浓度及最佳干预时间。方法:体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其表面标记物CD45、CD29和CD34,选用纯度较高的骨髓间充质干细胞进行干预实验。将筛选好的细胞接种于96孔培养板中,对照组骨髓间充质干细胞用α-MEM完全培养基培养,其余各组在此基础上加入6.25,12.5,25,50,100μg/L血小板衍生生长因子BB。干预1,3,5,7 d采用CCK-8法检测细胞增殖情况,筛选出血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的最佳时间及质量浓度。结果与结论:①经流式鉴定:CD29呈阳性表达(94.6%),CD45呈阴性表达(3.3%),CD34呈阴性表达(0.2%),得到纯度较高的大鼠骨髓间充质干细胞;②采用重复测量方差分析,不同时间点间血小板衍生生长因子BB干预骨髓间充质干细胞的吸光度值改变不同,第3天增殖效果最强,差异有显著性意义(F=27.773,P<0.001),进一步采用LSD法对分组因素进行两两比较,25μg/L血小板衍生生长因子BB组与其他5组比较差异均有显著性意义(P<0.05);③结果表明,25μg/L血小板衍生生长因子BB干预第3天对骨髓间充质干细胞有明显促增殖作用,血小板衍生生长因子BB质量浓度大于50μg/L会促进细胞凋亡。

血小板衍生生长因子BB诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化

背景:关于血小板衍生生长因子BB促进骨髓间充质干细胞成血管的研究报道较少,而新生血管网提供的营养、生长因子和细胞因子对于骨组织生成具有至关重要的作用。目的:探讨血小板衍生生长因子BB诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的效果。方法:①体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其表面标记物CD45、CD29和CD34的表达,选用纯度较高的骨髓间充质干细胞进行血小板衍生生长因子BB干预实验;②第3代骨髓间充质干细胞经25μg/L血小板衍生生长因子BB诱导3 d,进行Matrigel基质胶细胞管腔形成实验,FITC-UEA-1和DIL-ac-LDL以及CD31免疫荧光染色鉴定,流式细胞术检测CD31的表达,最后采用RT-PCR检测血管内皮生长因子的mRNA水平。结果与结论:血小板衍生生长因子BB诱导后的细胞与Matrigel基质胶混匀接种后,可形成明显的管状结构;血小板衍生生长因子BB诱导后的细胞FITC-UEA-1和DIL-ac-LDL以及CD31表达均为阳性;血小板衍生生长因子BB诱导后细胞中血管内皮生长因子的mRNA表达均高于未诱导骨髓间充质干细胞(P <0.05)。结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞经血小板衍生生长因子BB诱导后可以分化为具有功能的血管内皮细胞。

UPLC-Q-TOF-MS法测定绵羊血浆中阿苯达唑及其3种代谢产物的浓度及药代动力学研究

目的建立同时测定绵羊血浆中阿苯达唑(ABZ)、阿苯达唑亚砜(ABZSO)、阿苯达唑砜(ABZSO_2)、阿苯达唑氨基砜(ABZSO_2-NH_2)浓度的超高效液相色谱-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法,并研究阿苯达唑脂质体混悬液在健康绵羊体内的药代动力学特征。方法 6只绵羊单剂量灌胃给予阿苯达唑脂质体混悬液(10mg/kg)后,不同时间点颈静脉采血,血浆样品经乙腈沉淀蛋白法处理后,采用UPLC-Q-TOF-MS法测定血药浓度,内标为甲苯咪唑(MBZ),色谱柱为ACQUITY UPLC~? BEH C_(18)(2.1mm×50mm,1.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.4mL/min,进样量为2μL,柱温为40℃,采用电喷雾离子化(ESI)源,正离子扫描模式,选择监测离子检测(SIM),ABZ m/z 266.096,ABZSO m/z 282.091,ABZSO_2m/z 298.086,ABZSO_2-NH2m/z 240.081,内标MBZ m/z 296.104,应用Kinetica程序计算药代动力学参数。结果阿苯达唑浓度为6.2～798.0ng/mL,阿苯达唑亚砜浓度为5.2～5 370.0ng/mL,阿苯达唑砜浓度为3.3～3 168.0ng/mL,阿苯达唑氨基砜浓度为8.6～1 100.0ng/mL,线性关系良好(r=0.999 5、0.998 1、0.999 4、0.998 8),定量下限分别为6.2、5.2、3.3、8.6ng/mL,提取回收率均>95.3%,日间、日内精密度RSD均<15.0%,在本实验涉及的条件下样品稳定。绵羊灌胃给予阿苯达唑脂质体混悬液后,血浆中检测不到ABZ母体药物;给药后36、48h可检测到较低浓度ABZSO_2-NH_2。用非房室模型测得主要药代动力学参数,ABZSO和ABZSO_2的T_(1/2)、C_(max)、AUC_(0-∞)分别为(5.13±2.00)h、(3.78±0.78)μg/mL、(59.10±6.24)μg×h/mL和(3.29±0.09)h、(0.53±0.070)μg/mL、(13.66±1.54)μg×h/mL。结论本方法可靠、专属性强,适用于ABZ及其代谢物的血药浓度测定和药代动力学研究,为综合评价阿苯达唑脂质体混悬液提供参考。

大鼠肝缺血再灌注损伤时血清内毒素的变化及对心功能的影响

目的：探讨肝缺血再灌注损伤时内毒素变化对心功能的影响及其可能的发生机制. 方法：健康雄性Wistar大鼠48只随机分为对照组、缺血30 min组（Ⅰ组）及缺血30 min再灌注即刻、2 h、4 h和6 h组（I/R及I/R2、4、6 h 组）,每组8只,采用BL-420生物信号采集系统测定各组心功能[包括心率（HR）、左室收缩压（LVSP）、左室舒张末期压力（LVEDP）、左室内压最大上升/下降速率（±dp/dtmax）],采用偶氮显色法测定血清中的内毒素水平. 结果：在肝缺血再灌注损伤过程中,Ⅰ组、I/R组HR明显低于对照组（P＜0.05）,随着再灌注时间的延长呈上升趋势,但与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;I/R6 h组LVSP 、±dp/dtmax明显低于对照组（P＜0.05～0.01）,LVEDP明显高于对照组（P＜0.01）;Ⅰ组和I/R组内毒素水平达到高峰,随着再灌注时间的延长逐渐下降,但仍高于对照组（P＜0.05）. 结论：肝缺血再灌注损伤过程中,肠源性内毒素吸收入血及肝脏解毒功能的降低所致的内毒素血症是引起心功能改变的始动环节之一.

血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

背景:研究表明,小鼠前破骨细胞分泌的血小板衍生生长因子BB可以促进成骨细胞和成血管细胞形成,尚无血小板衍生生长因子BB是否可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的相关研究。目的:探讨血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。方法:①体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其表面标记物CD45、CD29和CD34的表达,选用纯度较高的骨髓间充质干细胞进行血小板衍生生长因子BB干预实验;②第3代骨髓间充质干细胞经25μg/L血小板衍生生长因子BB诱导3 d,进行Ⅰ型胶原免疫荧光染色,然后采用碱性磷酸酶改良钙钴法和偶氮偶联法、茜素红法对细胞进行染色,鉴定成骨细胞的表面特征,最后采用RT-PCR检测Runx-2和Gli-2的mRNA水平。结果与结论:①经细胞免疫荧光染色,诱导后细胞的Ⅰ型胶原绿色荧光表达率>90%;②经碱性磷酸酶改良钙钴法染色,可见细胞胞质中有黑色条索状附着,说明这些细胞均表达有活性的碱性磷酸酶;经碱性磷酸酶偶氮偶联法染色,可见细胞胞浆中含有蓝色的有活性的碱性磷酸酶;经茜素红染色,可见细胞聚集在一起形成小的红色的钙结节;③经RT-PCR检测,血小板衍生生长因子BB诱导后Gli-2和Runx-2的mRNA表达均高于未诱导骨髓间充质干细胞(P<0.05);④结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞经血小板衍生生长因子BB诱导后可以分化为具有功能的成骨细胞。

5/6肾切除致大鼠慢性肾衰竭模型对心房电生理特性的影响

目的构建5/6肾切除致大鼠慢性肾衰竭模型,并探讨其心房电生理特性。方法选取SPF级雄性SD大鼠30只,适应性饲养1周后通过随机数字表法随机分为对照组(control组)与肾衰组(CKD组),各15只。对两组大鼠体重、血清指标、超声心动图、心率、血压、心房有效不应期(atrium effective refractory period,AERP)、房颤诱发率进行测量和比较。结果5/6肾切除可成功制作大鼠慢性肾衰竭模型。与control组比较,6周后CKD组肌酐、尿素氮显著增加,体重显著降低,心脏重量显著增加,心脏/体重比增加,血压显著增加,CKD组室间隔收缩末期厚度、室间隔舒张期厚度均显著增加,左室后壁厚度显著增加,左心房内径增大,两组间差异均具有统计学意义(P<0.05),而左室射血分数无显著变化,差异无统计学意义(P>0.05);心房有效不应期显著缩短,房颤诱发率显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠5/6肾切除模型6周后可成功制作慢性肾衰竭模型,同时可引起高血压,心衰,心房有效不应期缩短和房颤诱发率增加。

肾去交感神经对心肌梗死后室性心律失常的影响

目的探讨肾去交感神经(RDN)对成年犬心肌梗死后室性心律失常的作用。方法8只成年健康比格犬随机分为2组:肾去交感神经组(RDN组,n=4)结扎冠状动脉前降支构建心肌梗死模型,心肌梗死后1 h给予外科+肾去交感神经消融;假手术组(Sham组,n=4)结扎冠状动脉,仅开腹分离肾动脉不进行肾去交感神经消融。对比两组犬的室性心律失常发生率(VA)、心室有效不应期(ERP)、测定心室肌交感神经的蛋白表达。结果心肌梗死4周,RDN组的室性早搏数较Sham组明显减少[(350.5±66.92)个/24 h比(525.8±265.96)个/24 h,P<0.05)];两组间室速的数目也存在显著差别[(12.00±6.56)个/24 h比(30.75±19.52)个/24 h,P<0.05)]。心肌梗死4周,RDN组心外膜的有效不应期较Sham组延长[(175±3.5)ms比(143±6.22)ms;P<0.05)],RDN组的有效不应期离散度(dERP)与Sham组比较显著减小。RDN组室颤阈值明显增高[(5.5±0.65)V比(9.25±1.31)V;P<0.05)]。RDN组心肌梗死交界区的酪氨酸羟化酶(TH)及生长相关蛋白(GAP-43)的蛋白表达均显著低于Sham组[(0.656±0.083)比(1.094±0.072),(0.505±0.062)比(0.779±0.034),P<0.05]。结论肾去交感神经可以抑制心肌梗死后室性心律失常的发生,延长心室ERP并降低不应期离散度,逆转心脏交感神经重构,肾去交感神经改善心肌梗死交界区电生理特性,预防心肌梗死后室性心律失常的发生并降低心源性猝死的发生。

db/db2型糖尿病小鼠的肠道、门脉血中LPS水平与血糖的相关性分析

目的:探讨LPS水平与2型糖尿病血糖相关性。方法:采用db/db 2型糖尿病小鼠db/db组和对照组db/m,收集门脉血、结肠组织并取匀浆液,用酶联免疫法(ELISA)测定肠道、门脉血中脂多糖的水平;用血糖仪测血糖值。结果:db/db模型组与db/m组相比,肠道LPS水平高(P<0.05),门脉血中LPS水平高(P<0.05),肠道比门脉血中LPS水平高(P<0.05),FPG是高的(P<0.05),结肠、门脉血中LPS分别与血糖成正相关(r=0.72,P<0.01;r=0.71,P<0.01)。结论:LPS水平与2型糖尿病的血糖有关,可为糖尿病的机制的研究提供有力的依据。