库尔勒香梨中性多糖结构及其抗氧化抗过敏性哮喘活性研究

检测库尔勒香梨中性多糖(Pyrus sinkiangensis Yu. neutral polysaccharide,PSNP-1、PSNP-2)的结构、抗氧化活性以及对过敏性哮喘小鼠的影响和机制。利用柱色谱分离得到了PSNP-1、PSNP-2两组分。PSNP-1、PSNP-2的总糖含量分别为91.81%、98.62%,糖醛酸含量分别为2.94%、3.11%,分子量分别为1503.14 kDa、26.73 kDa,其中PSNP-1的单糖组成及摩尔比主要为葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=54.6∶5.1∶2.9及少量甘露糖和鼠李糖,PSNP-2主要为甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖∶阿拉伯糖=1.8∶38∶10.5∶33及少量的鼠李糖。两种多糖均有多羟基糖的特征吸收峰并且是以α-糖苷键和β-糖苷键相连的吡喃糖环中性多糖且均有三股螺旋结构。体外抗氧化实验显示PSNP-1、PSNP-2有良好的抗氧化活性,且对OVA诱导的哮喘小鼠有改善作用,其作用机制可能通过干预TLR4/NF-κB信号通路从而改善OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症。

芜菁酸性多糖体内抗肿瘤活性研究

目的:探究芜菁酸性多糖一组分(BRAP-1)对非小细胞肺癌H226细胞荷瘤小鼠的影响。方法:将60只小鼠分为模型组(0.1 mL/10 g)、阳性药物顺铂组[3 mg/(kg·2 d)]、BRAP-1低剂量组[50 mg/(kg·d)]、BRAP-1中剂量组[100 mg/(kg·d)]和BRAP-1高剂量组[200 mg/(kg·d)]。试验期间观察小鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率、脏器指数;酶联免疫法检测各组小鼠血清中的白细胞介素18(IL-18)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;实时荧光定量核酸扩增法(q-PCR)、免疫印迹试验检测IL-18、IL-1β、受体相互作用蛋白1(RIP-1)、RIP3、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)基因表达情况。结果:与模型组相比较,BRAP-1低、中剂量组抑瘤效果明显(P<0.05),阳性组和BRAP-1高剂量组抑瘤率效果显著(P<0.01);模型组与其他各组相比较,阳性组和BRAP-1高剂量组小鼠血清中IL-1β含量显著增加(P<0.01),IL-18、TNF-ɑ在阳性组中明显降低(P<0.05),BRAP-1各剂量组中显著增加(P<0.01);q-PCR、免疫印迹试验结果显示,与模型组相比IL-1β随给药剂量增加mRNA相对表达量减少(P<0.01),而IL-18、MLKL、RIP1、RIP3的mRNA及蛋白相对表达量增加(P<0.01)。结论:BRAP-1可以通过调节免疫细胞因子水平,上调坏死性凋亡相关蛋白MLKL、RIP1、RIP3抑制肺鳞癌H226细胞体内生长。

复方结合雌激素黄体酮阴道用乳膏的乳化剂筛选与体外释放研究

目的筛选复方结合雌激素黄体酮阴道用乳膏的乳化剂,并测定乳膏体外释放特性。方法以十六醇、单硬脂酸甘油酯、白蜂蜡、硬脂酸甲酯、液体石蜡、鲸蜡醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、黄体酮为油相,苯甲醇、甘油、结合雌激素、纯化水为水相。分别加入0.24%十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)或8%聚二乙醇-7-硬脂酸酯(Tefose■63)为乳化剂,采用乳化法制备2种O/W型复方结合雌激素(Conjugated estrogens,CE)黄体酮(Progesterone,P4)阴道用乳膏,并采用综合评分法进行质量评价。2种乳膏均含有结合雌激素0.625 mg/g和黄体酮80 mg/g。选取16只新西兰大耳兔,随机分为4组,SDS组(使用含SDS乳膏进行给药)、Tefose■63组(使用含Tefose■63乳膏进行给药)、空白基质组(不含乳化剂的空白基质)以及生理盐水组(以生理盐水代替乳膏进行给药),4组均皮肤给药0.5 mL,阴道给药1 mL,每天1次,连续给药7 d后取皮肤、阴道组织进行HE染色,评价2种乳膏刺激性。筛选出较优的复方乳膏,采用LOGAN体外透皮仪测定该复方乳膏中CE和P4的单位面积累计释放量与累计释放率。结果含SDS乳膏综合评分为(95.83±0.03)分,含Tefose■63乳膏综合评分为(95.80±0.05)分。空白基质组与生理盐水组兔阴道黏膜完整,SDS组出现明显阴道黏膜复层扁平上皮损伤,Tefose■63组阴道黏膜轻微损伤。两种含不同乳化剂乳膏对皮肤均无明显刺激性。筛选出最优复方阴道用乳膏中CE释放速率为(13.15±0.37)μg·cm^(-2)·h^(-1/2),P4的释放速率为(297.73±12.48)μg·cm^(-2)·h^(-1/2),两者单位面积累积释放量与时间的平方根呈线性关系,符合Higuchi方程。结论采用Tefose■63为乳化剂的复方结合雌激素黄体酮阴道用乳膏外观洁白细腻、性质稳定、阴道黏膜的刺激性较小,并具有良好的体外释放特性。

雌酮硫酸钠的制备及其对小鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的研究雌酮硫酸钠(Estrone sulfate sodium,ES)的制备方法及其对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法(1)采用雌酮和氨基磺酸通过氨基磺酸化和离子置换法合成ES。采用核磁共振内标法计算ES的纯度,采用紫外光谱法、红外光谱法、高分辨质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱对ES进行结构分析。(2)建立雌鼠更年期模型,将小鼠随机分为溶媒组(蒸馏水0.094 mg/kg体重)、雌二醇组[(Estradiol,E2),给药剂量0.3 mg/kg体重]和ES组(给药剂量0.094 mg/kg体重)灌胃给药2周后建立小鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测量心梗面积,评估ES预处理对小鼠心肌损伤的影响。结果合成的ES纯度为66.6%,Tris含量30.8%,表征结果显示产物为雌酮硫酸钠。与溶媒组比较,E2降低小鼠心肌缺血/再灌注损伤面积,但是E2组差异不具有统计学差异,而ES组小鼠心肌缺血/再灌注损伤导致的心肌梗死面积减少,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本合成方法能够得到纯度较高且稳定的ES,动物试验结果证明ES能够减少小鼠心肌缺血再灌注损伤后的心肌梗死面积。

甘草酸及其制剂抗新冠感染作用机制研究进展

2019年12月,中国湖北省武汉市报告了不明微生物引起的病毒性肺炎。2020年1月3日,中国国家病毒疾病控制和预防研究所(IVDC)的科学家通过结合Sanger测序、Illumina测序和纳米孔测序鉴定出新的人类感染冠状病毒[1]。国际病毒分类委员会将该病毒命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severeacute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)[2]。

复方甘草酸苷片中甘氨酸与DL-甲硫氨酸原料药的理化性质及晶型稳定性的初步研究

目的研究复方甘草酸苷片中甘氨酸和DL-甲硫氨酸的固态理化性质和晶型稳定性。方法采用X-射线粉末衍射(X-ray powder diffraction,XRPD)、扫描电镜(Scanning electron microscopy,SEM)、同步热分析(Simultaneous thermal analytical techniques,TGA/DTG-DSC)、傅里叶红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)等分析方法对两种氨基酸原料药固体的理化性质与晶型稳定性进行了表征,探讨其在高温(60℃)、高湿(25℃,相对湿度75%±5%)、粉碎(<10℃)及水中的晶型稳定性。结果室温条件下甘氨酸为块状的α-型晶体,分解温度为257.4℃,ΔHf为773.5 J/g。α-型甘氨酸在高温(60℃)、高湿(25℃,相对湿度75%±5%)、粉碎(湿度<10℃)及60℃水中稳定性较好,未发生转晶;DL-甲硫氨酸为易吸附团聚的片状晶体,易发生固态转晶与溶液介导转晶。在高温(60℃)条件下固体DL-甲硫氨酸会由γ-型转为α-型,热分解温度和ΔH\-f均随α-型增多而增加,低温下γ-型更稳定。由于溶液介导转晶,在60℃水中结晶也只得到γ-型DL-甲硫氨酸。结论α-型甘氨酸与γ-型DL-甲硫氨酸可作为复方甘草酸苷制剂研发的优势晶型。对两个氨基酸固态理化性质及晶型稳定性的考察,可为原料药的物态质量控制和制剂研发的晶型筛选与控制提供实验基础。

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆甘草酸及其代谢物的浓度及药物动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中甘草酸及其代谢产物甘草次酸含量的超高效液相色谱-串联四极杆质谱(UPLC-MS/MS)方法,进行大鼠体内药物动力学研究。方法采用ACQUITY UPLC BEH C 18(2.1 mm×150 mm,1.7μm),以5 mmol/L乙酸铵(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL/min,电喷雾离子源,负离子模式下,多反应监测(MRM)方式,以格列喹酮为内标;大鼠口服给药,取血后血样经甲醇沉淀蛋白,检测大鼠血药浓度。结果甘草酸与甘草次酸血浆浓度在0.0099~2.8990μg/mL与0.0400~26.8900μg/mL范围内线性关系良好,方法学各项指标均符合要求。药动学参数甘草酸T max为(1.83±0.41)h,C_(max)为(0.42±0.04)μg/mL,AUC_(0-∞)为(2.13±0.43)h·μg^(-1)·mL^(-1),t_(1/2)为(16.74±8.45)h。代谢产物甘草次酸T max为(7.5±1.64)h,C max为(3.58±0.65)μg/mL,AUC 0-∞为(25.24±0.86)h·μg^(-1)·mL^(-1),t_(1/2)为(8.97±3.22)h。结论该方法专属性好,准确可靠,线性范围广,适用于同时检测体内甘草酸与甘草次酸浓度用于药物动力学研究。

基于UPLC-QTOF-MS^(E)的倒提壶指纹图谱的建立和多指标含量测定

目的对倒提壶进行化学成分分析,建立倒提壶高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并对5种成分进行定量分析,对不同来源的倒提壶进行质量评价。方法采用超高效液相色谱四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-QTOF-MSE)结合UNIFI数据库对倒提壶的化学成分进行鉴定;采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈(A)-0.2%磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱;流速为1 mL·min^(-1);柱温为30℃;检测波长为354 nm;进样量为10μL。建立15批倒提壶的HPLC指纹图谱,进行相似度评价,采用2种化学模式识别方法综合分析不同来源倒提壶的差异,并对5种成分进行定量分析。结果在正离子模式下共鉴定出8个化合物,负离子模式下鉴定出16个化合物;建立了倒提壶HPLC指纹图谱共有模式,确定了14个共有峰,指认了5种成分,相似度均大于0.900,5种成分定量分析方法符合方法学要求。结论基于UPLC-QTOF-MS^(E)分析结果所建立的HPLC指纹图谱和多指标成分定量分析方法准确可靠,可为倒提壶的质量控制提供参考。

20-羟基黄体酮甘油三酯前药20-DHP-C5-TG的制备及其淋巴转运途径初探

目的制备20-羟基黄体酮甘油三酯前药(20-DHP-C5-TG),考察该前药经胃肠道吸收通过淋巴转运进入体循环的过程。方法以黄体酮为原料经还原、选择性氧化得到20-羟基黄体酮(20-DHP),对20-DHP进行亲脂性结构修饰,通过酯键将母药20-DHP与修饰基团连接,得到目标前药20-DHP-C5-TG,经IR、1 H-NMR、13 C-NMR对其进行结构表征。取大鼠腹腔注射环己酰亚胺建立乳糜微粒阻断模型,随机分为正常给药组(灌胃给予前药油溶液400 mg/kg体重)、淋巴阻断组(腹腔注射环己酰亚胺3 mg/kg体重,1 h后灌胃给予前药油溶液400 mg/kg体重),分别于给药后5 min、15 min、0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h取血,采用HPLC法测定正常给药组和淋巴阻断组的药时曲线下面积,计算淋巴转运比例。结果20-DHP和20-DHP-C5-TG均制备成功,产率分别为42%和44%。20α-DHP-C5-TG前药的淋巴转运比例为90.065%,20β-DHP-C5-TG前药的淋巴转运比例为84.950%。结论20-DHP-C5-TG前药在体内具有明显的淋巴转运趋势,入血后能够释放出母药。

黄体酮脂质体微针的制备及体外性质考察

目的制备黄体酮脂质体,优选黄体酮脂质体微针的处方工艺,考察黄体酮脂质体微针的体外释放及经皮渗透效果。方法制备黄体酮脂质体,以包封率、粒径及电镜下形态进行表征。将黄体酮脂质体与微针基质材料甲基丙烯酰化明胶(GelMA)混合,采用溶剂铸造法制备微针阵列,对微针的皮肤穿刺性、载药量、体外释放、经皮渗透性能进行考察。结果制得的黄体酮脂质体包封率为(70.88±2.07)%,粒径为(266.93±9.05)nm,聚合物分散性指数(PDI)为(0.23±0.03),72 h体外释放率为(83.58±2.54)%。黄体酮脂质体微针最优工艺为:以15%的甲基丙烯酰化明胶为微针基质,光引发剂LAP浓度为0.25%,制得微针的载药量为(329.83±3.00)μg/cm^(2),光固化后,微针溶胀度均在200%以上。在体外释放实验中,分别经光固化1、2、3 min的黄体酮脂质体微针释放量随光固化时间的延长而下降。在体外经皮渗透实验中,在96 h时光固化1 min的累计渗透量为(167.08±4.75)μg/cm^(2),光固化2 min的累计渗透量为(159.69±6.04)μg/cm^(2),3 min的累计渗透量为(135.47±11.34)μg/cm^(2)。结论优选出的黄体酮脂质体微针成型性好,机械强度高。相较于脂质体,黄体酮微针能够更加有效地经皮渗透,可改善黄体酮透皮制剂的透皮性能。

基于非靶向代谢组学与转录组学探究氨基酸缓解甘草酸苷致大鼠假性醛固酮增多症的分子机制

目的研究复方甘草酸苷片中氨基酸缓解甘草酸苷致假性醛固酮增多症的机制。方法SD大鼠灌胃给予过量甘草酸苷建立假性醛固酮增多症模型,将SD大鼠分为空白对照组(等体积生理盐水)、甘草酸苷组(甘草酸单铵盐,300 mg/kg)、甘草酸苷与氨基酸复方组(300 mg/kg,含甘草酸单铵盐﹕甘氨酸﹕DL-甲硫氨酸=1.25∶1∶1)连续灌胃14 d,收集大鼠肾脏、肝脏,HE染色法检测大鼠肾脏组织、肝脏组织损伤情况;采用超高效液相色谱-串联飞行时间质谱联用仪(UHPLC-Q-TOF MS)对大鼠肝脏进行非靶向代谢组学分析,筛选潜在靶点;通过转录组学数据分析与醛固酮增多症相关的醛固酮腺瘤患者差异基因功能,关联推测氨基酸改善醛固酮增多的可能机制。结果与空白对照组相比,甘草酸苷组大鼠肾小管扩张、近曲小管上皮水肿;肝细胞空泡样变性、甘草酸苷与氨基酸复方组大鼠肾脏组织、肝脏组织损伤情况有所改善,仅部分大鼠肾小管扩张、肾近曲小管上皮水肿;肝细胞空泡样变性。代谢组学分析,与甘草酸苷组相比,甘草酸苷与氨基酸复方组筛选出9个潜在靶点;转录组学数据分析氨基酸可能通过脂代谢过程的调节等过程改善醛固酮增多。结论氨基酸可通过作用靶点LDLR调节脂代谢通路改变肉豆蔻酸等代谢物的表达缓解假性醛固酮增多症。

复方甘草酸苷片中三种活性成分在四种不同溶出介质中溶出曲线的测定

目的测定复方甘草酸苷片(美能)中甘草酸苷、甘氨酸和DL-蛋氨酸分别在pH1.2盐酸溶液、pH4.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、pH6.8磷酸盐缓冲溶液和水介质中的溶出曲线。方法采用浆法,转速为50 r/min,以pH 1.2盐酸溶液、pH4.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液、pH6.8磷酸盐缓冲溶液和水为溶出介质,溶出介质体积为900 mL进行溶出实验;采用高效液相色谱法检测甘草酸苷、甘氨酸和DL-蛋氨酸的含量,计算累积溶出百分率,绘制溶出曲线。结果通过分析方法验证,溶出曲线测定法的精密度、重复性、加样回收率及稳定性试验的RSD均小于2%;甘草酸苷在pH4.0、pH6.8缓冲溶液和水中60 min内平均累积溶出率均达到85%以上,但在pH1.2盐酸溶液中溶出较慢,120 min时平均累积溶出率为70%;溶出前10~20 min具有延迟释放现象。甘氨酸和DL-蛋氨酸在四种溶出介质中60 min内平均累积溶出率均达到85%以上。结论所建立的溶出测定方法准确可靠,测得3个批次复方甘草酸苷片中3种活性成分在4种不同溶出介质中的溶出曲线,为其仿制药的溶出曲线相似性评价提供了参考。

苯并咪唑类化合物抗宫颈癌活性的3D-QSAR及分子对接研究

目的研究苯并咪唑类衍生物抗宫颈癌的构效关系,对其进行合理设计与修饰,并运用分子对接技术模拟化合物与PI3Kα以及微管蛋白的作用方式。方法运用比较分子力场分析法(CoMFA)和比较分子相似性指数分析法(CoMSIA)对30个苯并咪唑类衍生物进行三维定量构效关系(3D-QSAR)分析,同时采用分子对接研究化合物与PI3Kα亚型激酶4JPS、微管蛋白1SA0之间的相互作用方式。结果与结论构建的CoMFA(q^(2)=0.618,R^(2)=0.877)和CoMSIA(q^(2)=0.612,R^(2)=0.855)模型具有良好的统计学意义和预测能力,依据该模型设计9个新化合物,其中化合物33预测值最高。分子对接显示化合物33可与4JPS的Asn467、1SA0的Asp251氨基酸残基形成氢键作用,结合能高于模板化合物16。本研究可为苯并咪唑类PI3Kα和微管蛋白双重抗宫颈癌药物的设计和结构优化提供参考。

粉末直接压片法研制结合雌激素缓释片及与参比制剂的释药相似性考察

目的 研制结合雌激素(conjugated estrogens, CE)亲水凝胶骨架缓释片,进行试验制剂与参比制剂倍美力■体外释放的相似性考察。方法 参照质量源于设计(QbD)理念,采用高效液相色谱法(HPLC)与差示扫描量热法(DSC)结合评价原辅料相容性。采用粉末直接压片工艺研制结合雌激素缓释片。对物料属性和工艺参数进行风险评估,通过Plackett-Burman(P-B)设计筛选影响CE片关键质量属性(CQAs)的关键物料属性(CMAs)和关键工艺参数(CPPs)。建立释放曲线的测定方法,并使用非模型依赖相似因子(f_(2))法评价试验制剂与参比制剂的体外释放一致性。结果 CE原料药(API)加速条件(40±2)℃,相对湿度(75±5)%存放30 d,马烯雌酮硫酸钠降解22.04%,雌酮硫酸钠降解9.53%,提示CE API对湿热敏感。CE API与各辅料的混合样品与平行对照相比热力学行为相似,提示原辅料相容性良好。粉末直接压片法制备的CE缓释片的硬度、释放度等均符合规定。在pH 1.2释放介质中羟丙甲纤维素的处方比例显著影响试验制剂与参比制剂释药行为的相似性。照最优处方生产的三批试验制剂批间释放均一性良好,试验制剂与参比制剂在4种介质(pH 1.2盐酸介质、pH 4.5醋酸盐介质、pH 6.8磷酸盐介质和水介质)中f_(2)值均>50,提示二者在体外具有相似的释放行为。结论 粉末直接压片法制备CE片的工艺稳定可靠,具备工业生产的可行性。