培养间充质干细胞的上清液对食管癌细胞ECA109生物学行为的影响

目的:探讨脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养的上清液对食管癌细胞ECA109增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响。方法:培养人脐带MSCs,提取过滤脐带MSCs培养的上清液与食管癌细胞ECA109共培养,通过细胞划痕实验和CCK-8实验检测ECA109细胞迁移、增殖能力;采用流式细胞测定技术检测ECA109细胞凋亡情况;利用RT-PCR和Western blot检测相关通路中ERK、AKT、PI3K的表达水平。结果:划痕实验48 h,MSCs上清液共培养组ECA109细胞划痕面积为(17.157±1.425)μm^(2),明显高于对照组划痕面积(14.500±0.563)μm^(2)(P=0.04);CCK-8结果显示,48 h后MSCs上清液培养组ECA109细胞OD值(1.069±0.254)显著低于对照组(1.718±0.520)(P=0.037);流式细胞术检测结果显示MSCs上清液共培养组细胞早期凋亡率(12.36±2.47)%高于对照组(7.23±0.86)%;G2+S期MSCs上清液共培养组细胞比例(39.82±1.01)%相比对照组(55.17±9.60)%显著减少。RT-PCR结果显示,MSCs上清液共培养组AKT mRNA表达量(0.35±0.01)明显低于对照组(1.00±0.05)(P=0.004);Western blot可以看出,MSCs上清液共培养组ERK、AKT蛋白表达均低于对照组,差异有统计学意义。结论:MSCs上清液抑制食管癌细胞ECA109的增殖和迁移能力,促进ECA109细胞的凋亡,且ERK和AKT的蛋白质表达水平均下降。

肺结核患者外周血T细胞协同刺激分子表达和NK细胞比例

目的检测肺结核(PTB)患者外周血协同刺激分子CD28、CD152/细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA4)、程序性死亡受体1(PD-1)和自然杀伤(NK)细胞的水平,探讨PTB患者T细胞亚群活化和NK细胞功能,以及T细胞协同刺激信号分子在PTB发病机制中的作用。方法募集32名PTB患者(PTB组)和同期健康体检人员15名(对照组)。流式细胞术检测外周血T淋巴细胞CD28、CD152的表达,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析两者之间的关系,流式细胞术检测外周血调节性T细胞(Treg)表面分子PD-1的表达以及NK细胞的比例。结果与对照组相比,PTB组CD8^(+)CD28^(+)T细胞比例、CD8^(+)CD152^(+)T细胞比例显著偏低。ROC曲线显示,变量CD8^(+)CD152^(+)T细胞比例对PTB的预测能力有一定准确性(AUC=0.800,CI=0.664~0.936)。CD4^(+)CD28^(+)T细胞以及CD4^(+)CD152^(+)T细胞比例无预测价值。PTB患者的CD4^(+)CD28^(+)T细胞和CD8^(+)CD28^(+)T细胞具有正相关关系(r=0.563)。与对照组相比,PTB组患者NK细胞比例显著降低。结论PTB患者CD8^(+)CD152^(+)T细胞、CD8^(+)CD28^(+)T细胞、NK细胞比例显著降低。

LINC00324对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制

目的探讨LINC00324对黑色素瘤增殖、迁移和侵袭能力的影响及分子机制。方法基于基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)数据库分析LINC00324在黑色素瘤组织和癌旁组织中的表达水平以及对患者预后的影响。在黑色素瘤细胞株SK-MEL-2中转染LINC00324过表达载体和siRNA,并标记为过表达阴性对照组(NC组)、过表达组(OE组)、沉默阴性对照组(si-NC组)和沉默组(si-LINC00324组);实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00324转染效率以及Beclin1、LC3A/B、Bcl-2的mRNA表达水平;CCK-8实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot实验检测关键蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,LINC00324在黑色素瘤组织中低表达(P<0.05),且低表达患者的预后较差。qRT-PCR结果显示,LINC00324的过表达载体和siRNA在黑色素瘤细胞中转染成功(P<0.01)。与NC组相比,OE组SK-MEL-2细胞增殖、迁移以及侵袭能力明显减弱(P<0.01);与si-NC组相比,si-LINC00324组SK-MEL-2细胞增殖、迁移能力提高(P<0.01)。与NC组相比,OE组细胞中Beclin1、LC3A/B、Bcl-2的mRNA水平下调(P<0.01);与si-NC组相比,si-LINC00324组细胞中Beclin1、LC3A/B、Bcl-2的mRNA水平上调(P<0.01)。Western blot结果显示,与NC组相比,OE组细胞中p62和Bcl-2的蛋白水平上调(P<0.05),LC3BⅡ蛋白水平下调(P<0.01);与si-NC组相比,si-LINC00324组细胞中p62和Bcl-2的蛋白水平下调(P<0.05),LC3BⅡ蛋白水平上调(P<0.05)。结论LINC00324在黑色素瘤组织和细胞系中低表达,可以通过上调Bcl-2抑制自噬影响黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

ChatYY应用于生物化学教学中的思考

随着人工智能技术在各行各业中的广泛应用,教师有必要对当前医学生物化学的教学现状及其所面临的挑战进行深入分析。文章介绍了ChatYY在教育领域的功能特性和应用,其如何通过交互式方法在医学生物化学教学中呈现教学内容、对学生学习效果进行评估与反馈。ChatYY能有效提高教学效率与互动性,对医学生物化学的教学具有积极意义,为未来教学创新提供了借鉴与思路。

铜绿假单胞菌鞭毛基因fliI的敲除对其鞭毛形成及生物膜生成的影响

目的探讨铜绿假单胞菌鞭毛相关基因fliI的缺失对其鞭毛生长、生物膜形成及运动能力的影响。方法应用Red同源重组技术构建铜绿假单胞菌鞭毛相关基因fliI的缺失株,通过菌落形态观察、动力试验、生物膜检查以及扫描电镜菌体观察等比较fliI基因缺失后对铜绿假单胞菌活力的影响。结果与原始菌株比较,fliI缺失株的菌落迁徙能力减弱,细菌运动能力下降,生成的生物膜附着能力下降;但fliI基因缺失株仍有鞭毛存在。结论铜绿假单胞菌fliI基因的缺失不影响其鞭毛的形成,但可使得其运动能力减弱和生物膜产生受抑,可能导致其致病性降低。

巴里坤县城镇与牧区人群血浆致动脉粥样硬化指数与尿酸水平的相关性分析

目的分析巴里坤县城镇与牧区人群血浆致动脉粥样硬化指数(AIP)与尿酸水平的相关性。方法选取2018年9月至2021年3月在新疆维吾尔自治区哈密市巴里坤县医院进行体检的1388例体检人群(城镇人群675例,牧区人群713例)作为研究对象。按照是否患有高尿酸血症分别将城镇人群和牧区人群分为城镇高尿酸血症组(285例)、城镇对照组(390例)和牧区高尿酸血症组(141例)、牧区对照组(572例)。比较城镇高尿酸血症组和城镇对照组临床资料,以及牧区高尿酸血症组和牧区对照组临床资料。采用Spearman相关分析城镇高尿酸血症组和牧区高尿酸血症组的AIP与尿酸水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析城镇人群及牧区人群发生高尿酸血症的危险因素。结果城镇高尿酸血症组体质量指数(BMI)、舒张压、AIP、尿酸、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平高于城镇对照组,腰围大于城镇对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。牧区高尿酸血症组BMI、AIP、尿酸、TG水平高于牧区对照组,年龄、腰围大于牧区对照组,TC、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于牧区对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,城镇高尿酸血症组和牧区高尿酸血症组的AIP与尿酸水平均呈正相关(r_(s)=0.384、0.405,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,BMI升高、腰围增大是城镇人群发生高尿酸血症的独立危险因素(P<0.05)。AIP升高,HDL-C、TC水平降低,腰围、年龄增大是牧区人群发生高尿酸血症的独立危险因素(P<0.05)。结论城镇与牧区人群AIP与尿酸水平密切相关,对预测该地区人群高尿酸血症的发生具有重要意义。

CD147通过Akt/mTOR信号通路调控脂肪酸合成对子宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨CD147的表达对子宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响和潜在的分子机制。方法分析UCSC数据库BSG基因(编码CD147蛋白)在子宫颈癌中的表达,采用Log-rank test法评估各组表达的预后差异。应用Western blot法检测CD147在Siha、Hela和H8细胞中的表达,通过慢病毒转染Hela细胞下调CD147表达,并验证其转染效率。运用Western blot法检测各组细胞中p-Akt、p-mTOR、ACC1、FASN、E-cadherin和N-cadherin的表达;使用BODIPY染色和脂肪酸试剂盒检测细胞中脂肪酸含量;利用CCK-8、平板克隆和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。sh-CD147组经Akt激动剂(SC79)处理后,Western blot法检测细胞中p-Akt、p-mTOR、ACC1、FASN、E-cadherin和N-cadherin的表达;选用BODIPY染色和脂肪酸试剂盒检测细胞中脂肪酸含量;利用平板克隆实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果UCSC数据库显示CD147在子宫颈癌中的表达高于正常子宫颈组织(P<0.01);CD147过表达的患者预后不良。Western blot检测结果显示,与H8细胞相比,Siha和Hela细胞中CD147蛋白表达增高(P=0.011)。下调CD147表达后,与Hela组相比,sh-CD147组细胞中CD147、ACC1和FASN蛋白表达降低(P<0.001);BODIPY荧光染色减弱,脂肪酸含量下降(P<0.001);细胞集落形成能力、侵袭和迁移能力降低;sh-CD147组细胞中E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、p-Akt和p-mTOR表达降低。与sh-CD147相比,经Akt激动剂SC-79剂处理后(sh-CD147-SC79)细胞内p-Akt、p-mTOR、ACC1、FASN和N-cadherin表达升高,E-cadherin表达降低,脂质染色和脂肪酸含量检测结果与关键酶表达一致(P<0.01),细胞增殖、侵袭迁移能力显著增强。结论CD147通过Akt/mTOR信号通路调控脂肪酸合成,促进子宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移。

糖宁孜亚比土斯片基于高糖人结直肠腺癌细胞模型对小克里斯滕森菌-TαMCA-FXR/TGR5轴的调控作用

目的探讨糖宁孜亚比土斯片(TZT)基于高糖人结直肠腺癌细胞模型对小克里斯滕森菌科-牛磺-α鼠胆酸钠盐(TαMCA)-法尼醇X受体(FXR)/G蛋白偶联受体5轴的调控作用。方法配制菌株液体培养基、高糖培养基、TZT溶液、TαMCA溶液,培养菌株,制备灭活小克里斯滕森菌及其发酵液,常规培养人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)。取部分细胞随机分为对照组、灭活菌体组、106 CFU/mL活菌组、10^(7)CFU/mL活菌组、10^(8)CFU/mL活菌组、10^(9)CFU/mL活菌组,对照组用无菌Caco-2专用培养基培养,灭活菌体组用灭活小克里斯滕森菌菌体悬液干预,106 CFU/mL活菌组、10^(7)CFU/mL活菌组、10^(8)CFU/mL活菌组、10^(9)CFU/mL活菌组分别在含有完全分化的Caco-2细胞培养板孔中加入2 mL 10^(9)CFU、10^(8)CFU、10^(7)CFU、10^(6)CFU的小克里斯滕森菌活菌干预。取部分细胞随机分为对照组、发酵培养液组,对照组用无菌Caco-2专用培养基培养,发酵培养液组用小克里斯滕森菌发酵液干预。取部分细胞随机分为对照组、高糖组及TZT低、中、中高、高剂量组,除对照组外其他各组加入8 g/L高糖培养基干预24 h,TZT低、中、中高、高剂量组分别加入10、25、50、100μg/mL的TZT含药培养基干预24 h。取部分细胞随机分为对照组、25μmol/L TαMCA组、50μmol/L TαMCA组,后两组换入25、50μmol/L的含TαMCA培养基干预24 h。实时荧光定量PCR法检测FXR、TGR5、IL-8、IL-10 mRNA,Western blotting法检测FXR、TGR5蛋白。结果与对照组比较,10^(6)CFU/mL活菌组、10^(7)CFU/mL活菌组、10^(8)CFU/mL活菌组、10^(9)CFU/mL活菌组TGR5 mRNA表达高(P均<0.05),FXR、IL-8、IL-10 mRNA表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与对照组比较,菌发酵液组FXR mRNA表达高(P均<0.05),TGR5 mRNA表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与对照组比较,高糖组FXR mRNA表达高(P<0.05),TGR5 mRNA表达低(P<0.05),FXR、TGR5蛋白表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与高糖组比较,各TZT组FXR mRNA表达低(P均<0.05),TGR5 mRNA表达高(P均<0.05),FXR、TGR5蛋白表达差异无统计学意义(P均>0.05)。与对照组比较,25μmol/L TαMCA组FXR mRNA、蛋白表达低(P均<0.05),TGR5 mRNA、蛋白表达高(P均<0.05);50μmol/L TαMCA组FXR蛋白表达低(P<0.05)。结论小克里斯滕森菌具有一定的抗炎效果,TZT可能通过促进小克里斯滕森菌的生长,产生代谢产物影响胆汁酸代谢,促进TαMCA肠道内累积,进一步抑制肠FXR表达,促进TGR5表达。

Barnesiella intestinihominis菌的安全性评价

目的:对分离自健康成人粪便中且在代谢性疾病发生状态下生长可能受到抑制的Barnesiella(巴恩斯氏菌属)厌氧菌进行体内外生物安全性评价,为今后代谢性疾病的微生态制剂的研发与应用提供基础。方法:通过急性毒性试验,连续14 d给昆明鼠灌胃不同剂量的Barnesiella intestinihominis(B.intestinihominis)菌培养液,观察动物是否出现死亡、中毒现象以及观察体重、生化指标的变化进行体内安全性评价。通过溶血性实验,胃酸和肠液的耐受性实验,以及其对9种抗生素的敏感性实验来进行体外评价。结果:实验组均未出现B.intestinihominis菌灌胃导致的死亡,中毒现象,其体重和脏器指数同对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),各脏器也未出现任何病理学变化。B.intestinihominis菌在哥伦比亚血琼脂平板上不产生溶血环,属于γ溶血;其胃酸耐受性不强,但肠液耐受性良好,对氯霉素、氨苄西林、万古霉素和四环素敏感,但是对链霉素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素、克林霉素耐药。结论:口服B.intestinihominis菌株对小鼠无毒性作用,具有良好的体内安全性,其胃酸耐受性不强,对革兰阴性菌有作用的抗生素敏感,若作为微生态制剂还需要验证对不同疾病的有益效果以及需要制作保护剂。

布鲁氏菌病患者外周血中Siglec-7^(+)单核细胞与Th1/Th2细胞的相关性研究

目的:探讨布鲁氏菌病患者外周血中单核细胞的Siglec-7表达以及Siglec-7^(+)单核细胞与Th1/Th2细胞的相关性,分析Siglec-7分子在布鲁氏菌病患者中的临床意义。方法:纳入初诊为布鲁氏菌感染的患者50例(BI组),健康对照46例(正常对照组)。流式细胞术检测外周血单核细胞Siglec-7表达,分析Siglec-7^(+)单核细胞与布鲁氏菌病患者临床指标的相关性;流式细胞术检测Th1/Th2细胞水平,CBA法检测外周血清IFN-γ和IL-4含量,分析Siglec-7^(+)单核细胞与Th1/Th2水平、IFN-γ/IL-4含量的相关性。结果:BI组Siglec-7^(+)单核细胞水平较对照组明显升高(P<0.001);肝功能和肺X线异常的布鲁氏菌病患者体内Siglec-7^(+)单核细胞水平较两者正常的患者升高(P<0.001,P<0.05);Th2细胞水平和IL-4含量较对照组升高(P<0.05),而Th1细胞水平、IFN-γ含量与Th1/Th2、IFN-γ/IL-4较对照组明显降低(P<0.001);Siglec-7^(+)单核细胞水平与Th1细胞水平、IFN-γ含量呈负相关(r=-0.651,r=-0.407);与Th2细胞水平、IL-4含量呈正相关(r=0.706,r=0.530)。结论:在布鲁氏菌感染过程中,Siglec-7^(+)单核细胞增多并可能参与Th1/Th2细胞失衡。

脐带间充质干细胞外泌体对脓毒症小鼠肝保护性研究

目的 探讨脐带间充质干细胞产生的外泌体对脓毒症小鼠肝保护效果。方法 选择32只SPF级雄性Balc小鼠,6~8周龄,取8只作为control组(注射100μL生理盐水),另24只小鼠造模,腹腔注射铜绿假单胞菌(P.aeruginosa),浓度1.5×10^(9)CFU/mL,100μL,模型建立3 h后,随机分为模型组(model组,注射等体积生理盐水)、低浓度间充质干细胞外泌体治疗组(lc组,腹腔注射0.1μg/μL hUCMSCs-exo,100μL进行治疗)和高浓度间充质干细胞外泌体治疗组(hc组,腹腔注射0.5μg/μL hUCMSCs-exo,100μL进行治疗),每组8只。比较4组实验小鼠的肝组织病理损伤程度、肝脏功能水平、血液炎性因子水平和存活率。结果 病理组织切片显示,model组肝细胞排列不均,核破裂,出现溶解性坏死,大量空泡变性,炎性细胞浸润;lc组肝细胞排列不均,细胞核固缩,大量空泡,炎性细胞浸润;hc组小鼠的肝细胞形态恢复,数量增多,肝细胞排列相对整齐,水肿和空泡减轻。与model组相比,hc组小鼠肝脏丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及胆红素(Bilirubin)水平显著降低,有统计学差异(P<0.01);hc组小鼠接受治疗24 h后,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,有统计学差异(P<0.05);对小鼠治疗后72 h平均存活率做log-rank检验,结果显示,lc组与hc组存活率均有不同程度提高。结论 脐带间充质干细胞外泌体对脓毒症小鼠的肝脏具有保护作用,有助于减少小鼠肝脏组织损伤,降低炎性因子水平,提高脓毒症小鼠存活率。

CD147通过AIM2炎症小体介导宫颈癌细胞焦亡和增殖

目的 探讨跨膜蛋白CD147表达量变化对AIM2炎症小体介导的宫颈癌细胞焦亡及增殖的影响。方法 采用Western blot实验检测CD147在宫颈癌细胞SiHa(HPV+)、C33a(HPV-)和正常宫颈上皮细胞H8(HPV+)、HCer Epic(HPV-)中的表达水平;通过慢病毒转染SiHa细胞下调CD147的表达,根据不同处理分为SiHa组、阴性对照组(shCD147-NON)、敲低组1(shCD147-1)和敲低组2(shCD147-2),通过Western blot、RT-qPCR和观察细胞绿色荧光表达验证转染效果;通过Western blot和RT-qPCR检测CD147和AIM2炎症小体相关因子AIM2、Caspase-1、IL-18、GSDMD蛋白和mRNA的表达;检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)释放度,荧光倒置显微镜下观察细胞的形态;CCK-8实验检测细胞的增殖能力;细胞克隆实验检测细胞集落形成能力。结果 Western blot结果显示,与HCerEpic细胞比较,SiHa细胞中CD147蛋白表达最高(P <0.05);CD147低表达慢病毒有效下调了SiHa细胞CD147表达水平(P <0.05);Western blot及RT-qPCR实验结果表明,与SiHa组相比,shCD147-1组和shCD147-2组AIM2、Caspase-1、IL-18、GSDMD蛋白和mRNA表达明显升高(P <0.05);乳酸脱氢酶(LDH)释放实验显示,与SiHa组相比,shCD147组LDH释放度明显升高(P <0.05);荧光倒置显微镜下显示,shCD147组出现肿胀和空泡化,表现出典型的细胞焦亡现象;与SiHa组相比,shCD147-1组和shCD147-2组细胞增殖能力和集落形成能力明显降低(P <0.05)。结论 CD147低表达有效上调宫颈癌SiHa细胞AIM2炎症相关因子的表达,诱发细胞焦亡,抑制细胞的增殖和克隆。

原花青素对中枢神经系统的保护作用及其机制研究进展

中枢神经系统疾病是一类病因及发病机制极为复杂的疾病,其治疗和干预措施的研究一直是神经科学领域的重点和难点。原花青素作为一种天然抗氧化剂,在清除自由基、抗氧化、抗炎与抗凋亡等方面的显著保护作用受到广泛关注,在中枢神经系统损伤领域也已经取得了显著的研究进展。本文阐述国内外关于原花青素对中枢神经系统损伤保护作用及相关机制的研究进展,特别是在神经退行性疾病、化学药物引起的神经损伤、应激导致的神经损伤、脑血管疾病以及脊髓损伤等方面的应用情况。原花青素作为一种潜在的治疗中枢神经系统疾病的天然化合物,其保护作用和机制研究的不断深入,将为开发新的治疗策略提供重要依据。

马里苷减轻糖尿病小鼠心肌纤维化

目的研究马里苷(marein)对糖尿病小鼠心肌纤维化的影响。方法选取5~6周龄10只瘦素受体基因缺陷杂合(db/m)雄性小鼠为对照组和30只对糖尿病瘦素受体基因缺陷db/db雄性小鼠,db/db雄性小鼠分为:db/db组(db/db,n=10)、二甲双胍(Met)阳性药组(每日灌胃280 mg/kg,n=10)和马里苷药物干预组(每日灌胃50 mg/kg,n=10)。持续给药8周后,HE染色、Masson染色观察心脏形态学改变;免疫组织化学检测波形蛋白(vimentin)的分布及表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织fibronectin、vimentin、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达。结果db/db组心肌纤维肥大,二甲双胍组和马里苷组心肌结构损伤有所改善。db/db组小鼠心肌组织胶原纤维表达较db/m组增多(P<0.01),二甲双胍组和马里苷组心肌组织胶原纤维的表达较db/db组下降(P<0.01)。db/db组相比于对照组心肌组织vimentin的表达明显升高(P<0.01),二甲双胍组和马里苷组vimentin的表达较db/db组明显降低(P<0.01)。db/db组fibronectin、vimentin、TGF-β1的表达较db/m组明显升高(P<0.01),二甲双胍组和马里苷组fibronectin、vimentin、TGF-β1表达明显下降(P<0.01)。结论马里苷能够改善糖尿病db/db小鼠心肌组织的纤维化。

马里苷减轻高糖诱导的大鼠心肌细胞系H9c2损伤

目的研究马里苷对高糖所致大鼠心肌细胞系(H9c2)损伤的影响。方法将H9c2细胞分为对照组(Ctrl)、高糖(30 mmol/L)损伤模型组和马里苷(25、50、100μmol/L)干预模型组。MTT法检测H9c2细胞的活性;Western blot检测细胞LC-3Ⅱ/Ⅰ、p62、mTOR蛋白表达。结果与对照组相比,模型组细胞活性下降(P<0.01),马里苷组H9c2细胞活性显著增强(P<0.01);模型组LC-3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05),p62及mTOR水平升高(P<0.01),马里苷组LC-3Ⅱ/Ⅰ水平增加,p62及mTOR降低(P<0.01),且随着浓度的增加蛋白质表达量更加明显。结论马里苷能够影响高糖诱导的心肌细胞损伤的自噬相关蛋白质的表达。

琐琐葡萄多糖对Aβ_(1-42)诱导HT22细胞氧化损伤的改善作用

目的:探讨脱蛋白后琐琐葡萄多糖(DVTP)对Aβ_(1-42)诱导的阿尔兹海默症细胞模型氧化损伤的影响。方法:将HT22细胞分为对照组,模型组(Aβ_(1-42))及Aβ_(1-42)+DVTP(20、40、80μg/mL)组,使用CCK8检测细胞存活率,在光镜、透射电镜下观察细胞形态和线粒体结构变化,DCFH-DA和JC-10荧光探针法测定细胞中活性氧(ROS)及线粒体膜电位水平,同时利用RT-qPCR和Western blot分析Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC的mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率下降,细胞形态及线粒体结构损伤程度较高;ROS水平升高,线粒体膜电位下降;Keap1 mRNA及蛋白表达水平升高,Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC表达水平降低。同模型组相比,DVTP预处理后细胞存活率显著提升,细胞形态及线粒体结构损伤程度较低;ROS水平降低,线粒体膜电位升高;Keapl mRNA及蛋白表达水平下降,Nrf2、HO-1、NQO1、GCLC表达水平升高。结论:DVTP可通过调节抗氧化酶的表达水平改善Aβ_(1-42)诱导的氧化损伤,有望成为一种治疗AD的候选药物。

HPV E6通过Rap1信号通路影响宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移的研究

目的探讨人乳头瘤病毒E6蛋白(human papillomavirus E6 protein,HPV E6)对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在分子机制。方法基于Illumina Hiseq 4000转录组测序技术检测12例不同程度的宫颈病变组织之间的基因表达特征,筛选与HPV相关的差异基因;利用GO、KEGG Pathway方法对差异基因进行生物学功能富集分析;Western blotting检测正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela中Rap、Rap1GAP蛋白表达水平;通过平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测其增殖、侵袭及迁移能力;通过sh-E6慢病毒转染下调细胞内HPV E6表达,分为对照组(Hela细胞)、空载组(sh-NON)和sh-E6组(低表达HPV E6);下调HPV E6表达,采用平板克隆和CCK-8实验分别检测每组细胞增殖能力和细胞活力;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western blotting检测各组细胞中E6、Rap1、Rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达水平。在sh-E6组基础上过表达Rap1,Western blot检测细胞中Rap1通路及相关蛋白的表达水平;平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果测序结果显示,与正常宫颈HPV阴性比较,HPV阳性的正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中差异上调表达的基因分别有340、864和1036个;3个数据集寻找共有差异基因共24个。GO|KEGG富集分析24个差异表达基因主要富集在Rap1相关信号通路。与HCerEpic细胞相比,Hela细胞内Rap1表达升高,Rap1GAP表达降低(P<0.01);其细胞的增殖、侵袭和迁移能力增强(P<0.01);下调HPV E6表达后,与Hela组比较,sh-E6组细胞的增殖、细胞集落形成、侵袭和迁移能力降低(P<0.001);Western blotting表明,与Hela组比较,sh-E6组细胞内Rap1、CyclinD1、N-cadherin蛋白表达降低,Rap1GAP和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.001)。与sh-E6组相比,过表达Rap1组(sh-E6/OE Rap1)细胞内Rap1/Rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达被恢复(P<0.001),细胞增殖、侵袭迁移能力被恢复(P<0.01)。结论在宫颈癌发展过程中,HPV E6通过激活Rap1信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移。

高脂饮食诱导肥胖小鼠不同脂肪组织炎症反应相关基因表达及其机制

目的探讨高脂饮食诱导肥胖小鼠不同脂肪组织炎症反应相关基因表达及其机制。方法将10只小鼠随机分为正常饮食对照组(ND组)、高脂饮食模型组(HFD组)各5只,分别喂以常规饲料、高脂饲料,饲喂10周。将小鼠颈部脱臼处死,取肩胛间棕色脂肪组织(BAT)、腹股沟白色脂肪组织(iWAT)、附睾白色脂肪组织(eWAT)。将各脂肪组织进行转录组测序(seq),并对测序结果进行质量评估以及主成分分析(PCA)。筛选三种脂肪组织中的差异表达基因,并对其进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;筛选表达上调最明显的前20个炎症反应相关基因。结果HFD组较ND组体质量水平高(P<0.05)。两组脂肪组织seq质量评估结果显示错误率<0.1%,Q20>85%,Q30>80%。PCA显示两个主成分方差贡献率分别为51.81%、19.08%。iWAT中HFD组表达上调基因2548个,eWAT中HFD组表达上调基因3384个,BAT中HFD组表达上调基因1630个;iWAT中HFD组表达下调基因2082个,eWAT中HFD组表达下调基因2780个,BAT中HFD组表达下调基因1128个。在三种脂肪组织表达上调基因中,主要富集在炎症反应和免疫反应等过程;在三种脂肪组织全部表达下调基因中,主要富集在脂质代谢和小分子代谢等过程。HFD组富集通路主要为经典炎症信号通路NF-kappa B、PI3k-Akt、Toll-like receptor。结论高脂饮食诱导肥胖小鼠的三种脂肪组织均存在炎症反应相关差异表达基因,而针对炎症反应会有不同的应答机制。

可降解的Mg-1%Ca合金抑制宫颈癌细胞体外增殖、迁移及侵袭

目的研究Mg-1%Ca合金的降解性能及对宫颈癌细胞体外增殖、细胞周期及迁移、侵袭的作用。方法检测Mg-1%Ca合金在DMEM培养基中pH值及Mg^(2+)、Ca^(2+)浓度的变化。根据GB/T 16886.5标准制备浸提液,取宫颈癌细胞(SiHa/HeLa),与Mg-1%Ca合金浸提液共培养,CCK-8法检测细胞存活率,平板克隆实验检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。取人宫颈上皮永生化细胞H8,与Mg-1%Ca合金浸提液共培养,CCK-8法检测细胞存活率。结果随着浸泡时间的延长,Mg-1%Ca合金浸提液和纯Mg浸提液的pH值均逐渐升高。Mg-1%Ca合金浸提液在24、72、168 h的pH值分别为(7.95±0.04)、(8.15±0.04)和(8.24±0.06),均低于纯Mg浸提液的pH值(P<0.001)。浸提24 h时,Mg-1%Ca合金浸提液中Mg^(2+)浓度增加至(21.642±0.348)mmol/L,但低于纯Mg浸提液中Mg^(2+)浓度(P<0.001)。浸提24 h时,Mg-1%Ca合金浸提液和纯Mg浸提液中的Ca^(2+)浓度都是降低的,分别为(0.431±0.065)mmol/L和(0.403±0.055)mmol/L。Mg-1%Ca合金可明显抑制宫颈癌细胞(SiHa/HeLa)的增殖,宫颈癌细胞SiHa/HeLa存活率均<70%。Mg-1%Ca合金浸提液对H8细胞有一定抑制作用,但H8细胞存活率>70%。Mg-1%Ca合金明显减少SiHa/HeLa细胞的克隆形成数(P<0.001),增加SiHa/HeLa细胞处于G0/G1期的细胞数(P<0.01),减少SiHa/HeLa细胞迁移距离(P<0.001)和侵袭细胞数(P<0.05)。Mg-1%Ca合金浸提液与纯Mg浸提液相比,对两种宫颈癌细胞的抑制作用无明显差别。结论Mg-1%Ca合金降解速率更慢,具有良好的生物相容性。Mg-1%Ca合金可抑制宫颈癌细胞(SiHa/HeLa)的体外增殖,调控G0/G1期细胞周期阻滞,并能抑制其发生迁移和侵袭。这种抑制的机制可能与微环境中Mg^(2+)浓度和pH值升高有关。

基于IPA^@生物信息平台筛选维吾尔族宫颈癌前病变患者血浆预警蛋白

目的依托IPA@在线生物信息学平台探讨维吾尔族患者宫颈癌前病变的发生与癌变机理,寻找血浆预警蛋白。方法运用IPA@在线生物信息学软件,针对前期研究中通过蛋白质组学方法筛选出的在维吾尔族妇女癌前病变宫颈内上皮瘤样病变CINⅡ和Ⅲ级患者血浆中31个差异蛋白进行生物学功能注释、调控网络分析、典型通路分析和生物标志物筛查分析。结果 IPA@分析发现CINⅡ/Ⅲ患者血浆中的差异蛋白的生物功能主要集中在炎症反应、细胞与细胞之间信号与作用和细胞生长与增殖,涉及的通路主要是急性期反应通路、JAK/Stat通路和IL-4通路,并且筛选出2种生物标志性蛋白,它们是代谢相关蛋白(ApoAⅠ)、信号传导相关蛋白(mTOR)。结论 ApoAⅠ和mTOR可作为宫颈癌及癌前病变的候选血浆预警蛋白。