细粒棘球绦虫Hsp70基因的克隆、表达及抗体制备

【目的】克隆细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)热休克蛋白家族基因Hsp70,在原核细胞中表达、纯化Hsp70蛋白并制备其特异性抗体。【方法】从包囊中分离原头蚴,提取RNA,RT-PCR扩增EgHsp70基因的cDNA,将其构建至原核表达载体pMAL-p2x,转化大肠杆菌BL-21菌株。通过改变诱导温度、IPTG浓度和诱导时间筛选出EgHsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件。并用麦芽糖亲和层析法纯化该蛋白。纯化蛋白经皮下多点注射免疫新西兰白兔制备抗血清,ELISA和Western blotting检测血清效价和特异性。【结果】RT-PCR扩增获得EgHsp70基因的cDNA,酶切和测序结果表明EgHsp70基因已克隆入pMAL-p2x。表达条件优化实验结果筛选出Hsp70融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当A600为0.6时,以0.3 mmol.L-1 IPTG于30℃条件下诱导表达4 h。SDS-PAGE显示Hsp70融合蛋白相对分子质量约为68.6kD,经麦芽糖亲和层析法纯化获得了Hsp70融合蛋白,其表达量为2.5 mg.L-1。Western blotting检测证明制备的抗血清与EgHsp70融合蛋白、原头蚴粗提抗原、E.granulosis虫体蛋白和E.granulosis虫体表面蛋白均能特异性结合,ELISA检测表明获得的抗血清效价达到1﹕256 000。【结论】在大肠杆菌中表达并纯化获得了EgHsp70融合蛋白,并制备了高效价的兔抗EgHsp70蛋白抗血清,为研制包虫病疫苗及相关诊断试剂奠定了基础。

新疆福海县乡村级预防接种人员现状调查

目的了解新疆福海县乡村级预防接种人员现状,为提高预防接种服务质量提供整改依据。方法由乡村级接种人员填写统一的调查表,各乡卫生院审核,福海县疾病预防控制中心负责汇总分析。结果福海县乡村级预防接种人员35岁以下者占52.31%,36～45岁占26.15%,45岁以上占21.54%;其中哈萨克族占70.77%、汉族占24.62%、其他民族占4.61%;大专学历占13.85%、中专及以下学历占86.15%;兼职人员占100.00%;服务半径大于10 km的占60%;年工资1万元以下者占84.62%。结论福海县乡村级预防接种人员民汉比例失调,工作任务繁重、困难多、村级接种人员学历低、工资待遇低。

2011年新疆福海县麻疹疫苗查漏补种调查分析

目的通过对2011年新疆福海县麻疹疫苗查漏补种数据调查分析,为提升福海县的免疫规划预防接种质量提供指导依据。方法摸底调查福海县8月龄至5岁以下儿童,对含麻疹成分疫苗漏种儿童逐一登记,再统一时间进行补种。结果调查适龄儿童4 634人,摸底登记儿童593人,实际应接种儿童375人,实种371人,接种率98.93%。应需接种的375名儿童中,2009～2011年出生的儿童309人,占82.4%(309/375);2006～2008年出生的儿童66人,占17.6%(66/375)。结论摸底人员对含麻疹成分疫苗界限不清,造成摸底数大于实际接种儿童;以乡为单位,目标儿童接种率达95%以上;儿童常规免疫存在薄弱环节,牧业点儿童预防接种难度大,麻疹疫苗及时接种率未能达标。