医学留学生的分子生物学实验教学改革与实践

伴随着高等教育发展的脚步，留学生的教学已是我国医学教育发展的一个全新的、严峻的挑战课题。留学生教育的健康快速发展有助于推进高校的国际化进程，实现高校国际交流与合作的良性循环，带动高校综合竞争力和学术声望的不断提升［1］。21世纪以来，本校承担了部分发展中国家留学生的5年制医学本科教学工作，分子生物学作为医学基础课程是留学生学习的重点更是难点。

PBL结合摄像反馈在留学生分子生物学实验教学中的应用

目的探索PBL结合摄像反馈法在留学生分子生物学实验教学中的应用.方法以2013~2014级5年制医学留学生为研究对象,采取PBL结合摄像法为实验组,传统实验教学法为对照组,比较2组测试成绩、英文口语表达能力、主动学习能力等的差异.结果实验平时成绩、实验理论测试成绩、实验操作测试成绩实验组均高于对照组(P=0.001).期末理论测试成绩实验组也高于对照组(P=0.01);英文口语表达能力、主动学习能力等实验组均高于对照组(P=0.001).结论 PBL结合摄像反馈教学法在留学生分子生物学实验教学中取得了显著的教学效果.

基于医学分子生物学PBL的学生自主学习实践

培养学生"自主学习"能力是医学教学研究和改革的重要方面。本文通过医学分子生物学教学中设置问题、分小组收集信息和讨论并达成共识、制作幻灯片并汇报学习成果、教师点评的方式探讨了考查和培养学生的自主学习能力的途经,讨论了问题设置的要求和学生学习的结果,并对今后的教学改革提出了建议。

昆明医科大学本科医学生《热带医学与热带病》课程的KAP调查分析

目的 了解昆明医科大学本科学生对《热带医学与热带病》课程相关知识、态度和行为（KAP）的现状。方法 2015年9月~12月采用病例对照研究的方法,随机选取昆明医科大学2012级、2013级、2014级各专业选修热带医学的本科生共120例作为学习组,随机抽取同年级各专业未选修热带医学本科生共109例,作为对照组,进行KAP问卷调查。结果 学生对热带医学这门课程的知识掌握情况之间没有差异（P〉0.05）,学生在对热带病的处理态度和行为方面高于对照组（P〈0.05）。结论 调查对象的热带医学知识需要加强,学生应该主动了解更多的热带医学知识,开设《热带医学与热带病》有实用性及必要性。

一起饮料微生物污染的鉴定报告

目的:从一起污染的饮料中分离未知微生物并对其进行种类鉴定。方法:将分离出的微生物接种于人工培养基上培养,肉眼观察其菌落特征;挑取部分菌落用棉兰染色,镜下观察其形态;用DNA提取试剂盒提取其总DNA,并以此为模板,PCR方法扩增其ITS区基因片段,将该基因片段纯化后,由测序公司对其进行序列测定;将测序结果用BLASTn工具进行比对,找出其序列的相关菌种;最后用MEGA5.1软件对该测定序列菌种及其序列相关菌种进行进化分析。结果:肉眼菌落特征、镜下形态观察结果显示该未知微生物属真菌;ITS区测序及BLASTn比对结果显示其为黄曲霉菌,该未知菌与黄曲霉菌同源性高达94%~ 95%;进化树构建结果显示其与黄曲霉菌在同一分支上。结论:污染该饮料的未知微生物为黄曲霉菌。

利拉鲁肽调控高脂诱导的非酒精性脂肪肝病的分子机制

目的探讨大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型中利拉鲁肽对炎症反应和抗氧化能力的影响及对脂类代谢相关酶的表达调控。方法 SD大鼠70只,25只给予正常饮食,45只采用高糖饮食加高脂灌胃12周,正常组和模型组随机挑取5只大鼠处死。确定NAFLD模型成功建立后,随机分为空白对照组(n=20)、模型对照组(n=20)和利拉鲁肽治疗组(n=20)。利拉鲁肽治疗组给予利拉鲁肽60μg/(kg·d)皮下注射,模型对照组给予生理盐水1ml/(kg·d)皮下注射。利拉鲁肽治疗开始4周和8周后,各组处死大鼠各半,测定各组血浆中炎性因子、氧化因子、抗氧化因子、肝功能和脂类的变化,检测肝脏的形态学改变,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胆固醇调节元件结合转录因子-1c(SREBF-1c)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)的mRNA表达,应用免疫组织化学和Western blotting检测SREBF-1c和ACCα的蛋白质表达。结果与模型对照组比较,利拉鲁肽治疗4周和8周后,血浆中C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量降低(P<0.05);超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和总抗氧化能力(T-AOC)增加(P<0.05),肝脏组织脂肪颗粒沉积减少;肝脏组织中SREBF-1c和ACCα的mRNA和蛋白表达下调(P<0.05)。利拉鲁肽治疗8周与治疗4周比较,上述指标进一步改善。结论利拉鲁肽可以减轻NAFLD中炎症反应,提高抗氧化能力,改善肝功能;利拉鲁肽可能通过下调肝脏组织中SREBF-1c和ACCα的表达,减少脂质的生成,缓解肝脏组织中的脂肪变性,而且随治疗时间的增加,对NAFLD的防治作用更明显。

同型半胱氨酸调控脂肪组织PDK1的表达与糖代谢的关系

目的研究同型半胱氨酸对脂肪组织PDK1表达的影响,探讨PDK1是否抑制p-Ak(tThr-308),影响PI3K/Akt信号通路,降低脂肪组织对葡萄糖的摄取和利用。方法 40只6周龄小鼠(n=10只)随机分为:空腹正常对照组;进食正常对照组;空腹高同型半胱氨酸血症组和进食高同型半胱氨酸血症组。利用小鼠饮用水中加入1.5%的甲硫氨酸饲养3个月制作高同型半胱氨酸血症的动物模型。测定各组血糖和血胰岛素。利用RT-PCR检测PDK1和Akt的mRNA表达水平,Western blotting检测PDK1、p-Ak(tThr-308)和Akt的表达。结果与空腹和进食对照组相比,空腹和进食高同型半胱氨酸组小鼠血糖和血胰岛素的含量增加(P<0.05),PDK1的mRNA表达水平下调,PDK1、p-Ak(tThr-308)蛋白质表达降低(P<0.05),而Akt在mRNA和蛋白质的表达水平差异无统计学意义。结论在脂肪组织中,同型半胱氨酸可能通过调控PDK1表达的下调,影响PI3K/Akt信号通路,导致对葡萄糖的摄取能力降低。这可能是同型半胱氨酸引起糖代谢紊乱的原因之一。

嗜吞噬细胞无形体的分子检测技术研究进展

嗜吞噬细胞无形体(AP)主要引起人类经蜱叮咬传播的人粒细胞无形体病(HGA)。快速、准确的针对HGA的检测技术能够有效地控制其爆发,减少死亡病例。目前AP感染的诊断方法有临床诊断、血清学诊断、形态学诊断、分子生物学诊断等。其中AP分子检测技术特异性高、操作简便,快速,是目前对AP感染诊断的常用方法。针对AP分子检测主要方法包括巢式PCR(nested PCR)、实时定量荧光PCR(real time PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)等。三类分子检测技术各有优缺点,应根据具体情况选用适当的检测手段,提高AP感染的早期诊断准确率。

Toll样受体及其与莱姆关节炎发病关系的研究进展

莱姆病（lyme disease）是一种人兽共患传染病,由伯氏疏螺旋体（Borrelia burgdorferi）引起,通过蜱叮咬感染。莱姆关节炎在中晚期莱姆病中发生率最高,危害较大。莱姆病广泛分布于70多个国家和地区,每年约有30万人感染及发病[1-4]。莱姆病高发于美国东北部、中西部偏北地区,北欧及东亚部分地区同属高危地区[5]。

云南省某大学新生中莱姆病和恙虫病的血清流行病学调查

目的分析云南省某大学新生莱姆病和恙虫病感染情况,间接了解两种虫媒传染病在云南省的分布.方法采集来自云南滇中及滇东北2地区大学新生血样标本,以ELISA方法检测莱姆病和恙虫病IgG抗体,计算抗体阳性率.结果共检测大学新生血清标本42份,检出莱姆病IgG抗体阳性率为2.4%;恙虫病IgG抗体阳性率为4.8%.结论云南省存在莱姆病和恙虫病散发,应进一步加强对这2种虫媒传染病的监测与控制.

查菲埃立克体分子检测技术研究进展

查菲埃立克体(Ehrlichia chaffeensis,EC)主要引起人单核细胞埃立克体病(human monocytic ehrlichiosis,HME),该病无特异的临床症状而容易误诊,延误治疗可使病情加重甚至造成患者死亡,故对HME实现早期诊断很重要。该文从临床诊断、血清学诊断、病原学诊断到分子生物学诊断等方面对HME的诊断方法进行总结,并着重介绍操作简单、敏感且高效的分子生物学诊断技术。

细胞因子与恙虫病关系的研究进展

恙虫病是经恙螨叮咬后感染恙虫病东方体所致的一种自然疫源性疾病。恙虫病东方体进入机体后,专性寄生于宿主的血管内皮细胞、巨噬细胞内。其表面抗原物质会刺激机体免疫系统,从而释放各类细胞因子以清除病原体。但由于过量细胞因子释放而造成的高细胞因子血症,也会成为恙虫病病理损伤的重要原因。因此,对恙虫病患者体内TNF-α、INF-β、IL-6、IL-8、sIL-2R几种主要的细胞因子及其随病期的变化情况与临床意义作逐一概述,为恙虫病的诊断、治疗及预后等方面提供新的判断依据和帮助。

云南省某大学新生中嗜吞噬细胞无形体感染的血清流行病学调查

目的评估云南省某大学新生嗜吞噬细胞无形体的感染情况,间接了解人嗜粒细胞无形体感染在云南省的发生情况。方法采集来自云南滇中、滇东北两地区于某大学新生血样标本,用间接荧光免疫法检测Anaplasma phagocytophilum IgG抗体,计算抗体阳性率。结果共检测大学新生血清标本45份,检出嗜吞噬细胞无形体血清IgG抗体阳性7份,其中滇中4份,滇东北3份,阳性率为15.56%。结论云南省存在人感染嗜吞噬细胞无形体的情况,滇中地区学生的抗体阳性率与滇东北地区无统计学差异,应进一步加强对人嗜粒细胞无形体病的监测与控制。

A549与b.End.3细胞共培养对血脑屏障相关的Epsin1、CD309和CD144分子表达的影响

目的:研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞A549与小鼠脑血管内皮细胞b.End.3共培养对b.End.3中Epsin1以及其他相关因子表达量的影响。方法:使用b.End.3小鼠脑血管内皮细胞与非小细胞肺癌A549细胞建立体外血脑屏障模型(blood brain barrier,BBB)、血瘤屏障(blood tumor barrier,BTB)模型。实验分为两组:BBB组、BTB组。使用流式细胞仪分选BTB组中的b.End.3细胞。使用q PCR和Western Blot的方法分别检测分选出的b.End.3细胞中Epsin1、CD309、CD144、Occludin转录和表达水平的变化。结果:与A549细胞共培养后,BTB组跨膜细胞电阻值(transendothelial electrical resistance,TEER)较BBB组下降(P<0.05)。共培养后分选出的b.End.3细胞中的Epsin1和CD309、CD144的表达量增高(P<0.05),Occludin的表达量下降(P<0.05)。结论:A549共培养后体外血脑屏障的开放可能与Epsin1及相关因子的表达增高有关。

高同型半胱氨酸血症骨骼肌TRB3表达与糖代谢的关系

目的在高同型半胱氨酸血症动物模型中,研究骨骼肌组织TRB3的表达,探讨TRB3与糖代谢的关系.方法 20只小鼠随机分为正常对照组和高同型半胱氨酸血症组,每组10只.含1.5%的蛋氨酸饮水3个月制造高同型半胱氨酸血症模型.测定进食状态下血糖改变.HE染色观察骨骼肌细胞结构,Western blot检测TRB3、Akt和p-Akt(Ser-473)蛋白质的表达水平.结果高同型半胱氨酸血症组进食状态下血糖与正常对照组比较增加(P<0.05);HE染色骨骼肌细胞结构无明显异常;Western blot结果显示,高同型半胱氨酸血症组TRB3的表达增加(P<0.05),p-Akt(Ser-473)的表达减少(P<0.05).结论同型半胱氨酸可能通过诱导骨骼肌组织中TRB3的表达,抑制PI3-K/Akt信号通路,导致糖代谢紊乱.

CSF-1及其受体与早期自然流产关系的研究

目的探讨母胎界面局部细胞因子CSF-1及其受体与早期自然流产的发生的关系.方法采集2009年8月至2011年12月间来云南省第三人民医院进行人工流产及自然流产病例的绒毛及脱膜组织各30例,采用放射免疫法测定2组外周血中绒毛膜促性腺激素(HCG)含量,利用免疫组织化学和Western blot检测噬细胞集落刺激因子(CSF-1)及其受体(CSF-1R)表达情况.结果自然流产组HCG值与人工流产组相比明显下降(P<0.05).绒毛及脱膜组织中CSF-1和CSF-1R 2组均有表达,与人工流产组相比,自然流产组均增加(P<0.05).结论适量的CSF-1和CSF-1R浓度维持妊娠的继续,浓度过高则不利于妊娠,可能是自然流产的原因之一.

莱姆病致病机理研究进展

莱姆病是20世纪70年代发现的一种由硬蜱叮咬传播的自然疫源性人兽共患传染病,严重威胁人类健康,引起全球性的关注。伯氏疏螺旋体是莱姆病的病原体。目前莱姆病在很多方面的研究已经取得显著进展,但其致病机理尚不完全清楚,主要原因可能是莱姆病病原体及其成分直接作用、炎性细胞因子作用以及自身免疫因素的影响。对近年有关莱姆病致病机理的研究进展进行概述。

登革病毒感染的检测技术研究进展

登革病毒(dengue virus,DENV)是引起登革热(dengue fever,DF)的病原体,经蚊叮咬而传播疾病.DF主要流行于热带和亚热带地区.目前,DF已经发展成一个日益严重的全球性公共卫生问题.2012年,DF被列为全球最重要的蚊虫传播性疾病.快速而准确的针对DENV感染的检测技术能够有效地控制DF的爆发及减少死亡病例.目前DENV感染的检测技术主要有病毒分离培养、分子生物学诊断及血清学诊断三类,三类检测技术各有优缺点,应该根据具体情况选用适当的检测手段.

基孔肯雅病毒感染的诊断技术研究进展

基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)是引起基孔肯雅热的病原体,经蚊叮咬传播。近年来,该病毒流行于非洲和东南亚地区,并且在印度洋地区造成大规模流行。临床诊断技术的开发对控制疾病蔓延十分重要。目前,CHIKV感染的实验诊断技术主要有病毒分离培养、血清学检测和分子生物学检测3大类。本文就CHIKV感染的实验室诊断技术作一综述,以供临床参考。

同型半胱氨酸对葡萄糖代谢和骨骼肌p-Akt(Ser-473)的影响

目的在高同型半胱氨酸血症中,探讨同型半胱氨酸对葡萄糖代谢和骨骼肌组织PI3K/Akt胰岛素信号通路中p-Akt(Ser-473)的影响,揭示同型半胱氨酸诱导葡萄糖代谢异常的机理.方法 40只小鼠随机分为空腹正常对照组、空腹高同型半胱氨酸血症组、进食正常对照组和进食高同型半胱氨酸血症组,每组10只;空腹高同型半胱氨酸血症组和进食高同型半胱氨酸血症组用含1.5%的甲硫氨酸饮水3个月.3个月后,各组取血分别测定同型半胱氨酸、葡萄糖、胰岛素,计算胰岛素敏感指数;利用Western blot检测p-Akt(Ser-473)的改变.结果空腹高同型半胱氨酸血症组与空腹正常对照组、进食高同型半胱氨酸血症组与进食正常对照组比较葡萄糖和胰岛素增加(P<0.05),胰岛素敏感指数降低(P<0.05),p-Akt(Ser-473)蛋白下调(P<0.05),Akt无明显变化.结论同型半胱氨酸可诱导葡萄糖代谢异常,这可能与骨骼肌组织PI3K/Akt胰岛素信号通路的p-Akt(Ser-473)降低有关.