医学微生物学教学改革的几点思考

医学微生物学是医学生必修的专业基础课,搞好医学微生物学教学可以为培养高水平医学人才奠定坚实的基础。在分析医学微生物学教学现状的基础上,为提高教学质量进行了思考,提出从优化教学内容、丰富教学手段、善于复习总结、改进实验教学以及重视教师培训等多方面努力,激发学生学习兴趣,提升教师教学水平,以达到培育高素质医学人才之目的。

复方中药功能饼干对小鼠免疫功能调节作用的实验研究

目的:研究复方中药功能饼干对小鼠的免疫调节作用。方法:应用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和脾脏淋巴细胞转化(MTT)法观察复方中药功能饼干对小鼠免疫功能的影响。结果:复方中药功能饼干喂后2周,高、中剂量组小鼠腹腔巨噬细胞对鸡血红细胞的吞噬百分率和吞噬指数及高剂量组小鼠脾淋巴细胞转化试验均高于对照组,其差异具有显著性意义(P<0.05)。低剂量组小鼠吞噬百分率和吞噬指数及中、低剂量组小鼠脾淋巴细胞转化试验较对照组均无显著性差异(P>0.05)。结论:复方中药功能饼干能增强小鼠ConA诱导的脾淋巴细胞转化和巨噬细胞吞噬能力。

党参及茯苓对小鼠肠道菌群调节作用的实验研究

目的研究党参和茯苓(均为补益中药)对小鼠肠道菌群的影响。方法 BALB/C♂小鼠随分为7组:空白组、党参与茯苓的低、中、高剂量组,各组的受试药物灌胃浓度分别为人体推荐量的5,10,30倍,空白对照组用无菌水代替受试物。连续给药14天后,取肠道内容物,溶解涂布筛选平板,培养计数。以小鼠粪便中的双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌和肠球菌数量为检测指标,观察给药后小鼠肠道菌群的变化。结果高剂量的党参能显著提高肠道乳杆菌水平并降低大肠杆菌水平;而高剂量的茯苓能显著提高肠道双歧杆菌的水平。结论党参和茯苓对肠道菌群都有较好的调节作用。

去甲斑蝥素抑制胃癌MGC-803细胞生长并诱导其凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:噻唑蓝(MTT)法及克隆形成抑制实验观察去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(propidium iodide,PI)单染色检测细胞周期改变,膜连蛋白-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素作用MGC-803细胞后,不同浓度的去甲斑蝥素对胃癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系(P<0.05),去甲斑蝥素作用于胃癌MGC-803细胞48 h和72 h的IC_(50)浓度分别为69.92μmol/L和31.27μmol/L;与对照组相比随着去甲斑蝥素的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;细胞周期检测结果显示,随着去甲斑蝥素浓度的增加,胃癌MGC-803细胞出现明显G2/M期阻滞;不同浓度去甲斑蝥素作用后,出现明显的凋亡细胞群;Western blotting检测结果显示,去甲斑蝥素处理组细胞的Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变。Casepase-9、Caspase-3活化降解,PARP蛋白出现切割条带。结论:去甲斑蝥素能够抑制胃癌MGC-803细胞生长,使细胞周期抑制在G2/M期,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞发生凋亡。

桑叶提取物对小鼠感染甲型流感病毒FM1的预防与治疗作用研究

目的:研究桑叶提取物对甲型流感病毒感染小鼠的预防与治疗作用。方法:建立甲型流感病毒鼠肺适应株FM1的小鼠模型,采用预防和治疗2种方式灌胃给药,分别检测桑叶提取物对小鼠的肺指数、肺组织形态学及肺组织病毒载量等的改变情况。结果:治疗给药时,桑叶提取物中、低剂量能减轻流感小鼠的全身症状,显著抑制体质量减轻(P<0.05),降低肺指数(P<0.05),显著改善肺组织的病理损伤,降低肺内流感病毒的载量(P<0.05)。利巴韦林能快速有效地降低小鼠肺病毒载量,但减轻肺组织病理损伤的效果不如桑叶提取物。预防给药时,桑叶提取物中、低剂量组小鼠的各项指标与模型组无显著性差异。结论:桑叶提取物对流感病毒感染无明显预防作用,但治疗效果良好,显示出与利巴韦林不同的体内抗流感病毒机制。

参苓散调节小鼠肠道菌群作用的实验研究

目的观察参苓散对小鼠肠道菌群的影响。方法 48只雄性昆明鼠,随机分为4组,即低、中、高3个剂量组和对照组,连续给予参苓散14 d,实验前后检测肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌的数量。结果中剂量组的小鼠肠道内双歧杆菌显著增加,肠杆菌减少,乳杆菌和肠球菌无显著变化;高剂量组的小鼠肠道内的双歧杆菌和乳酸杆菌的数量显著增多,肠杆菌的数量显著降低,肠球菌无变化。结论参苓散具有调节小鼠肠道菌群及促进双歧杆菌、乳杆菌增殖的功效。

超抗原SEA对K562细胞诱导脐带血单个核细胞上CD3ε链表达的影响

目的:探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对K562细胞诱导正常人脐带血单个核细胞(MNCs)中CD3ε链基因表达的影响。方法:常规分离4例脐带血单个核细胞,分别与抗CD3单克隆抗体(mAb)、单纯K562细胞、单纯SEA以及SEA联合K562细胞共培养,诱导MNCs活化增殖,并设空白对照组。刺激培养48 h后,收集各组细胞提取mRNA并合成cDNA,以β2微球蛋白基因作为内参照,采用实时荧光定量PCR检测在各组MNCs中CD3ε链基因的表达,并根据公式2-△△C t对CD3ε链表达的差异倍数进行相对定量分析。结果:K562细胞组MNCs中CD3ε链基因表达的水平略有降低,抗CD3 mAb组、SEA组、SEA联合K562细胞组的诱导活化的MNCs中CD3ε链基因的表达均有增强,而SEA联合K562细胞组MNCs中CD3ε链基因的表达明显高于单纯SEA组(P<0.01)。结论:超抗原SEA可以增加K562细胞在体外诱导脐带血MNCs中CD3ε链基因的表达。

大蒜多糖对中波紫外线辐射后HaCaT细胞凋亡的影响

目的探讨大蒜多糖(GP)对中波紫外线(UVB)辐射后人角质形成细胞(HaCaT)凋亡的影响。方法将HaCaT细胞分成空白组,GP组,UVB组,UVB+GP组,MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果紫外线能显著诱导HaCaT细胞凋亡,GP预处理后能有效抵抗紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡(P<0.01)。结论 GP可以抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,从而发挥防护紫外线损伤的作用。

桑抗病毒研究及应用概述

桑树全株皆可药用,含有多种化学成分,药理学研究表明其生物学活性多样,临床上也有应用。本文综述了近年来桑方药及有效部位的抗病毒活性及机制的研究和应用,以期为桑药用资源的进一步开发和利用提供参考。

海洋放线菌素X2下调柯萨奇病毒B3感染ECV304细胞ICAM-1的表达

目的:观察海洋放线菌素X2对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染ECV304细胞细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的海洋放线菌素X2作用病毒后的抑制情况;采用RT-PCR和流式细胞术分别测定CVB3感染的ECV304细胞在海洋放线菌素X2作用前后不同时间点的ICAM-1的mRNA和蛋白的表达水平。结果:CVB3感染ECV304细胞后,ICAM-1蛋白表达在12 h～54 h显著高于正常ECV304细胞对照组(P<0.05);海洋放线菌素X2干预后,于12 h～54 h降低ICAM-1蛋白的表达,与CVB3感染组相比差异有统计学意义(P<0.05);海洋放线菌素X2干预后,于24 h～54 h降低ICAM-1mRNA的表达,与CVB3感染组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:海洋放线菌素X2在病毒吸附前对CVB3具有抗病毒作用,并可下调CVB3诱导的ECV304细胞ICAM-1的mRNA和蛋白的表达。

澳门地区产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型分析

【目的】了解澳门地区医院感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌的临床分布特点和基因型特征。【方法】收集2007年12月至2008年2月期间从澳门地区两家医院的临床患者中分离到的大肠埃希菌158株,用表型确定试验确定产ESBL大肠埃希菌。应用PCR方法分别扩增产酶菌株的CTX-M-3、CTX-M-9、TEM和SHV等常见的β-内酰胺酶基因,并结合临床分离菌株的分布特点对PCR扩增结果作进一步的分析。【结果】澳门地区临床分离的158株大肠埃希菌中,有54株产ESBL,产酶率为34.2%。PCR扩增结果显示,所有产酶菌株均携带TEM基因;其中有47株(87%)同时携带CTX-M-9、TEM两个基因;没有菌株携带CTX-M-3和SHV基因。产ESBL大肠埃希菌广泛分布于临床各科室,其中普外科占40.7%,内科占27.8%,心脏科占16.7%。标本分布较为集中,尿液占55.6%,分泌物或脓液标本占22.2%,血液和呼吸道标本各占11.1%。【结论】澳门地区医院感染中,产ESBL大肠埃希菌在临床各科室分布广泛,主要分离自尿液、分泌物或脓液标本;所有菌株均携带TEM基因,并有87%的菌株同时携带CTX-M-9基因。

携带脑组织特异性microRNA靶序列的重组日本脑炎病毒的构建与鉴定

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RNA转染BHK-21细胞,37℃、5%CO2孵箱培养3d后取上清盲传1代观察细胞病变,并通过RT-PCR、细胞蚀斑形成实验和病毒生长曲线等方法对恢复病毒的生物学特性进行鉴定。结果成功在BHK-21细胞中拯救获得了携带miRNA靶序列的重组病毒,与野生型病毒株具有相似的蚀斑形态和生长特性。结论通过反向遗传学技术获得了携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒,为miRNA介导的组织特异性减毒机制研究奠定了基础。

桂枝麻黄各半汤对流感病毒FM1株感染小鼠RLH信号通路的影响

目的研究桂枝麻黄各半汤对甲型流感病毒FM1株感染小鼠RLH信号通路的影响,探讨其抗病毒的作用机制。方法将8周龄的SPF级C57BL/6小鼠和敲除基因的MAVS-I^(-/-)小鼠各60只,随机分为6组,即正常对照组、病毒对照组、奥司他韦(30 mg·kg^(-1))组、银翘散(11.2 g·kg^(-1))组、桂枝麻黄各半汤(9.4 g·kg^(-1))组、新加香薷饮(5.4 g·kg^(-1))组,饲养于寒环境。另取60只8周龄C57BL/6小鼠,分组同前,饲养于正常环境。采用流式细胞术检测小鼠脾脏免疫细胞Th1/Th2、Th17/Treg的比值;HE染色观察小鼠肺组织病理变化;RT-PCR法检测FM1、RIG-I、MAVS及NF-κB p65的m RNA表达;Western Blot法检测RIG-I、MAVS及NF-κB p65的蛋白表达。结果在正常环境中和寒环境中,桂枝麻黄各半汤均可明显减轻C57BL/6小鼠的肺部炎症,明显降低C57BL/6小鼠肺指数、FM1 m RNA表达水平以及肺组织的RIG-I、MAVS、NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平;寒环境中桂枝麻黄各半汤还可以降低MAVS^(-/-)小鼠的RIG-I m RNA及蛋白表达水平;桂枝麻黄各半汤等3种中药复方均可不同程度地调节Th1/Th2和Th17/Treg比值。结论桂枝麻黄各半汤对甲型流感FM1株感染的小鼠在正常环境及寒环境均有较好的治疗作用,可能通过下调RLH信号通路的关键因子发挥抗流感作用。

海洋放线菌素X2对CVB3感染ECV304细胞VCAM-1表达的影响

目的研究柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CVB3)感染ECV304细胞后,血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesionmolecule,VCAM-1)的表达变化及海洋放线菌素X2对CVB3感染ECV304细胞VCAM-1表达的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的海洋放线菌素X2作用病毒后的抑制情况;采用RT-PCR和FCM分别测定CVB3感染的ECV304细胞在海洋放线菌素X2作用前后不同时间点的VCAM-1的mRNA和蛋白的表达水平。结果海洋放线菌素X2在病毒吸附前对CVB3的SI为63.88。正常状态下ECV304细胞基本无VCAM-1 mRNA表达,CVB3感染ECV304细胞促进VCAM-1 mRNA表达,感染12 h达到最高峰,6～54 h时VCAM-1 mRNA水平,与细胞对照组相比CVB3感染组差异有统计学意义(P<0.05)。CVB3感染ECV304细胞后,VCAM-1蛋白表达在12～48 h显著高于正常ECV304细胞对照组(P<0.05)。海洋放线菌素X2干预后,于12～54 h降低ECV304细胞VCAM-1 mRNA的水平,12～24 h降低VCAM-1蛋白的表达,与CVB3感染组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论海洋放线菌素X2在病毒吸附前对CVB3具有抗病毒作用,并可下调CVB3诱导的ECV304细胞VCAM-1的mRNA水平和蛋白的表达。

抗肿瘤靶点研究及治疗策略

抗肿瘤靶向治疗(“targeted”cancer therapies)是在特异性靶向工具的引导下,小分子药物或抗体自身对肿瘤细胞及其微环境的攻击或激活机体免疫反应。靶向治疗的飞速发展使特异性抗肿瘤治疗得以实现,朝着治疗肿瘤的终极目标“有效杀伤肿瘤且不伤害正常组织”又迈进了一大步。本文就肿瘤靶向治疗的相关内容,肿瘤相关抗原、抗体、靶向策略等近年来的发展进程进行回顾,并结合本团队的研究内容对该领域的研究做详细的阐述。

某高校学生牙刷细菌检测及食盐水消毒作用探讨

目的了解大学生牙刷细菌数量的变化以及食盐水对牙刷的消毒(除菌)作用,为大学生日常生活中清洁牙刷提供参考依据。方法募集300名大学生志愿者,使用指定牙刷按照Bass法刷牙,分别于2周、4周、6周后回收牙刷,检测牙刷在无菌蒸馏水和不同质量分数食盐水中浸泡后的细菌数量。结果随着使用时间的延长,牙刷上的细菌数显著增加,使用2周、4周、6周后分别增加5倍,300多倍和近700倍。不同质量分数食盐水浸泡10 h后,细菌有减少的趋势;其中0.6%的食盐水浸泡后,牙刷上的细菌由平均35万/g下降至1.7万/g,与处理前比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用后的牙刷细菌数量增加显著;食盐水对牙刷具有一定的清洁和除菌效果。

中草药对小鼠肠道菌群影响的实验研究

目的研究党参、茯苓、白术、白芍和陈皮五味中药制成的复方合剂对肠道菌群调节作用。方法将小鼠分为正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组灌服蒸馏水14 d,低剂量组、中剂量组和高剂量组灌服不同剂量的复方合剂14 d,检测实验前后肠道菌群数量。结果灌服后小鼠肠道菌群与灌服前比较,乳杆菌、双歧杆菌数量明显增加,肠球菌数量明显减少,肠杆菌数量差异无统计学意义。结论党参、茯苓、白术、白芍和陈皮五味中药制成的复方合剂对小鼠肠道菌群具有一定的调节作用。

流感病毒感染对小鼠肠道菌群的影响及桑叶的调节作用

目的探讨流感病毒对肠道菌群的影响以及桑叶提取物在治疗小鼠流感时对肠道菌群的调节作用。方法将36只小鼠随机分为4组,正常对照组滴鼻生理盐水,其余以流感病毒鼠肺适应株FM1滴鼻3 d,建立流感小鼠模型后,正常对照组和病毒对照组灌胃生理盐水,另2组分别以高剂量(500 mg/kg)和低剂量(100 mg/kg)灌胃桑叶提取物,连续5 d。每天检测小鼠体重,并于病毒感染前、感染后及灌胃处理后3次无菌收集小鼠粪便,培养并计数小鼠粪便中肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌。结果小鼠在感染病毒后体重明显降低,桑叶提取物治疗后体重降低的趋势有所减缓。小鼠肠道菌群在感染流感后有明显的变化,但桑叶提取物治疗后肠道菌群的恢复不明显。结论流感病毒感染能引起小鼠肠道菌群的失调,桑叶不显示调节肠道菌群的效果,表明其对流感的治疗不通过调节肠道菌群平衡来发挥作用。

肠道菌群与疾病发生及中草药调节和治疗作用的研究概述

肠道正常菌群及微生态稳定对人体极具重要性,中草药对肠道菌群具有调节作用。本文综述了人体的肠道正常菌群与疾病产生和发展的关系,结合中草药对肠道菌群调节作用的研究,探讨中药调节肠道菌群与其发挥疾病防治效果之间的相关性,以期为中草药的临床应用及药理学研究提供一定的参考依据。

荔枝核提取物L2.3对SH-SY5Y细胞的增殖抑制作用及机制

目的:探讨荔枝核提取物对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖抑制及至凋亡机制。方法:采用MTT法检测细胞活力,Hoechst 33258染色观察细胞形态改变;流式细胞术测定细胞凋亡率、细胞周期的变化及Fas的表达;活性检测试剂盒测定样品对细胞caspase活性的影响。结果:荔枝核提取物L2.3对SH-SY5Y细胞的增殖抑制活性呈时间、剂量双重依赖性,细胞内可见染色质固缩,出现凋亡小体。细胞凋亡率于处理48 h后显著增高,G0/G1及G2/M期细胞减少,S期细胞增多,Fas的表达明显增高,caspase-3、8、9的活性均时间依赖性地增高。结论:荔枝核提取物L2.3可通过诱导细胞凋亡、影响细胞周期分布而抑制SH-SY5Y细胞增殖,caspase-3、caspase-8、caspase-9及Fas蛋白可能参与了L2.3诱导SH-SY5Y细胞凋亡的通路。