高表达UBE2S通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制

目的探究UBE2S在肝癌微环境不同细胞类型的特异性表达及对肝癌细胞干性的影响。方法使用TCGA数据库分析肝癌中UBE2S转录水平及其启动子甲基化水平差异,使用CPTAC数据库分析UBE2S蛋白水平差异。使用TISCH单细胞测序数据挖掘UBE2S在不同细胞类型中的表达,并分析细胞通讯的强度以及细胞群各自的关键转录因子。免疫组化验证UBE2S在肝癌组织中的表达;多色免疫荧光检测UBE2S在肝癌细胞以及T细胞的表达情况。利用shRNA敲低肝癌细胞HCC-LM3中的UBE2S,分为shCtrl(对照组)、shUBE2S-1(敲低组1)、shUBE2S-2(敲低组2)3个组,利用克隆形成实验、悬浮成球实验检测UBE2S敲低对HCC-LM3干性影响。结果UBE2S在TCGA数据库中非配对肿瘤组织中高表达(P<0.001),配对肿瘤组织中也高表达(P<0.001),随着肿瘤分级增高,转录水平逐渐增高(P<0.001);在CPTAC数据库中肝癌组织UBE2S蛋白水平表达也增高(P<0.001);肝癌中UBE2S启动子甲基化水平降低(P<0.001);TP53突变组UBE2S转录水平更高(P<0.001)。单细胞测序结果显示,UBE2S在T细胞等细胞群高表达;内皮与上皮及成纤维细胞之间的细胞交互强度较高,SMAD1等转录因子可能是Tprolif细胞关键转录因子。与正常组织相比,UBE2S在肝癌组织高表达;且在肝癌细胞和T细胞中均有较高表达。克隆形成实验显示:与shCtrl组相比,敲低UBE2S能减少肝癌细胞克隆形成数目(shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.05);悬浮成球实验显示:与shCtrl组相比,敲低UBE2S能减少肝癌细胞肿瘤球形成数目(shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.01)。结论UBE2S在肝癌组织T细胞中高表达,与预后不良相关,且其能促进肝癌细胞干细胞特性。

实验性Beagle犬肥胖症并2型糖尿病模型的建立

目的:为肥胖症和2型糖尿病的手术和内镜介入治疗研究建立一种大型动物实验模型.方法:选用10只健康♂成年Beagle犬,随机分成两组,对照组5只全程(16wk)给予标准饲料喂养,模型组5只全程给予高脂高热量饲料喂养,并于第8周给予小剂量链脲佐菌素(STZ)静脉注射.定时检测动物体质量、体长、空腹血糖、静脉葡萄糖实验(IVGTT)、血脂等与肥胖症及2型糖尿病相关临床指标.结果:在第8周,模型组平均体质量是16.9kg±0.8kg,较对照组体质量(14.8kg±1.03kg)有显著升高(P<0.01),Lee指数与对照组比较也有显著差异(P<0.05);模型组血清胰岛素、C-肽较对照组明显上升(P<0.01).STZ注射后1wk,模型组空腹血糖明显高于对照组(P<0.05),IVGTT-2h血糖比注射前增高(143mg/dL±7.4mg/dLvs127mg/dL±4.2mg/dL,P<0.05),血清胰岛素、C-肽分泌比注射前明显下降(P<0.01).STZ注射后8wk,模型组空腹血糖显著高于对照组(P<0.01),IVGTT-2h血糖较注射前显著增高(323mg/dL±12.1mg/dLvs127mg/dL±4.2mg/dL,P<0.01).本实验模型组Beagle犬成模率为100%,实验期间Beagle犬未见死亡.结论:联合高脂高热量喂养和小剂量STZ注射可在Beagle犬上成功建立肥胖症并2型糖尿病动物模型,此模型接近人类2型糖尿病的发病过程和代谢特征,可用于肥胖症和2型糖尿病的手术和内镜介入治疗的研究.

食管空肠覆膜支架转流术治疗2型糖尿病的实验研究

目的观察内镜下(联合开腹手术)食管空肠覆膜支架转流术对肥胖症并2型糖尿病(T2DM)模型犬的治疗效果。方法对肥胖症并T2DM模型犬(实验组,n=5)实施内镜下(联合开腹手术)食管空肠覆膜支架转流术,分别于术前和术后4、8、12周时测定空腹血糖和胰岛素,行静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),采用稳态模型评估β细胞功能(HOMA-β)和胰岛素抵抗(HOMA-IR)。以仅行胃镜检查和剖腹探查术的正常Beagle犬作为对照组(n=5)。结果实验组术后4周时的空腹血糖、IVGTT-2 h血糖、空腹胰岛素和IVGTT-2 h胰岛素即已显著低于术前水平(P<0.01),术后12周时,实验组空腹血糖浓度与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与术前比较,术后实验组HOMA-IR逐渐下降(P<0.01),HOMA-β则缓慢上升(P<0.01,P<0.05),至术后12周时,实验组HOMA-IR和HOMA-β与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对肥胖症并T2DM模型犬实施内镜下(联合开腹手术)食管空肠覆膜支架转流术,可模拟并改良经典的Roux-en-Y胃转流术,治疗T2DM安全有效。

4种黑曲霉基因组DNA提取方法的比较

目的筛选适合提取曲霉DNA的方法。方法比较2个菌落培养时间段(3 d内和10 d左右)提取DNA质量的差异;运用氯化苄法、石英砂+CTAB法、Biospin法和微波法分别提取黑曲霉基因组DNA,然后用直接电泳、浓度测定、PCR扩增等方法比较所提DNA的浓度和质量。结果培养3 d内的菌落提取的DNA纯度较高,无需纯化即可用于后续实验;4种方法制备的DNA均可用于PCR等后续实验,其中以石英砂+CTAB法提取的DNA纯度好,产率最高。结论石英砂+CTAB法是一种适用于曲霉DNA提取的简便方法。

食管空肠支架转流术治疗2型糖尿病的机制初探

目的观察内镜下行食管空肠覆膜支架转流术对2型糖尿病(T2DM)模型犬的治疗效果并探讨其机制。方法肥胖症并T2DM模型Beagle犬5只作为手术组,行内镜下食管空肠覆膜支架转流术;正常Beagle犬5只作为对照组,行胃镜观察和剖腹探查术。检测两组术前及术后4、8、12周空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、静脉葡萄糖试验(IVGTT)2h血糖、IVGTT-2h胰岛素等糖尿病相关指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛β细胞功能(HOMA-β),并检测抑胃肽(GIP)和胰高糖素样肽-1(GLP-1)等胃肠激素水平。结果与手术前比较,手术组FPG、FINS、IVGTT-2h血糖和IVGTT-2h胰岛素均于术后4周出现显著下降(P<0.01),至术后12周接近对照组水平(P>0.05);术后4周HOMA-IR值明显下降,HOMA-β值显著升高(P<0.01),至术后12周均接近对照组水平(P>0.05);术后4周GIP显著下降(P<0.01),GLP-1水平显著升高(P<0.05),至术后8周接近对照组水平(P>0.05)。结论食管空肠覆膜支架转流术治疗T2DM安全有效,其机制可能与胃肠激素的变化有关。

孤立性肺结节CT影像的计算机视觉分析

目的:探讨电子计算机视觉分析对孤立性肺结节的诊断价值。方法:89例经手术病理证实的肺部结节电子计算机断层扫描(CT)图像经过形态学滤波以及二次图像分割,进行标准哈夫(Hough)函数变换,以提取的计算机视觉特征数据来研究孤立性肺结节的影像诊断。结果:恶性结节的最大极径(MaxRho)为(141.79±8.332),良性结节的MaxRho为(83.27±18.35),两者有统计学差异(t=2.339,P=0.02)。恶性结节的峰值为(232.33±26.73),良性结节的峰值为(93.60±22.34),两者有统计学的明显差异(t=4.433,P=0.005)。肺恶性结节的欧拉数为(9.87±2.57),良性结节为(4.18±1.32),两者有统计学的明显差异(t=4.523,P=0.003)。结论:经受试者工作特征(ROC)曲线分析,计算机视觉分析对孤立性肺结节的鉴别具有较高的诊断价值。

兔骨髓基质干细胞诱导分化为软骨细胞的体外实验研究

目的:在体外分离获得兔骨髓基质干细胞(bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells,BMSCs)的基础上探索诱导该细胞向软骨细胞方向分化的转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)的适宜浓度。方法:第3代BMSCs分别用TGF-β15ng/mL、10ng/mL和20ng/mL诱导2周,通过倒置相差显微镜、MTT法、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学等方法,观察细胞的生物学特性。结果:骨髓中分离获得的BMSCs在体外增殖旺盛,TGF-β1诱导后细胞生长明显减缓。与对照组相比,经过诱导2周后的BMSCs在48h时5ng/mLTGF-β1组的MTT光密度值差异无显著性(P>0.05),而10ng/mL组和20ng/mL组差异有显著性(P<0.05),但在72h时3个诱导组与对照组比较差异均有显著性(P<0.05),而3个诱导组间差异无显著性(P>0.05)。5ng/mLTGF-β1体外诱导BMSCs2周后,细胞甲苯胺蓝异染明显,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性,表现为软骨细胞生物学特性。结论:5ng/mLTGF-β1诱导BMSCs向软骨细胞方向分化是比较经济和可行的方法。

改良PCR-RFLP方法快速鉴别常见致病念珠菌

目的:建立快速准确鉴别常见致病念珠菌菌落的PCR-限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)方法。方法:结合直接菌落PCR检测技术,使用通用引物扩增6种念珠菌(包括白念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌和季也蒙念珠菌)ITS1-ITS2区。分别用HhaⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ、MspⅠ和Hpy F10Ⅵ等5种内切酶对PCR产物进行酶切,建立以菌落PCR为基础的RFLP方法,然后对30株临床株进行PCR-RFLP图谱分析。结果:应用MspⅠ进行酶切反应,6种念珠菌的酶切带型有明显差异,易于鉴别。结论:通过直接菌落PCR检测技术,使用MspⅠ进行酶切,可以经1次反应,简便快速鉴别出常见的6种致病念珠菌,为临床念珠菌感染的快速准确诊断赢得时间。

食管空肠覆膜支架转流术治疗肥胖症的动物模型

目的通过Beagle犬肥胖症模型行内镜下食管空肠覆膜支架转流术,观察其治疗肥胖症的效果。方法造模成功的肥胖症Beagle犬(实验组)和正常Beagle犬(对照组)各5只,分别行内镜下(联合开腹手术)食管空肠覆膜支架转流术以及胃镜观察和剖腹探查术。分别于术前及术后4周、8周、12周测定Beagle犬体重变化指标[体重、腹围、肥胖评定指数(Lee指数)],观察手术治疗效果。结果全部Beagle犬均成功施行手术。实验组术后进食量明显减少,但无严重并发症,无1只死亡。实验组术前及术后4周和8周的体重水平均显著高于对照组同时间点(P值分别<0.01、0.05)。自术后4周起,实验组体重显著下降,均显著低于同组术前(P值均<0.01)。至术后12周,实验组体重已降至正常水平,与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。实验组于术前及术后4周和8周的腹围均显著高于对照组同时间点(P值分别<0.01、0.05)。自术后4周起,实验组腹围显著下降,均显著低于同组术前(P值均<0.01)。术后12周,两组间腹围水平的差异无统计学意义(P>0.05)。实验组术前和术后4周的Lee指数均显著高于对照组同时间点(P值分别<0.01、0.05)。自术后4周起,实验组Lee指数显著下降,均显著低于同组术前(P值均<0.01)。术后8、12周,两组间Lee指数的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论食管空肠覆膜支架转流术可模拟并改良经典的Roux-en-Y胃转流术,安全有效地治疗肥胖症。

胶质瘤耐药细胞系中11种ABC转运子的表达

目的:在胶质瘤的治疗中,亚硝基脲类药物如卡氮芥是常用的化疗药物。但由于耐药性的产生,患者预后通常不良。在耐药机制的研究中,ABC转运子家族因其具有将药物泵出细胞外的特性而备受关注。本研究旨在探讨胶质瘤细胞中卡氮芥耐药与11种ABC转运子的关系。方法:以SWOZ2细胞作为卡氮芥敏感的细胞系,以卡氮芥耐药的SWOZ1细胞作为原发性耐药细胞系,同时诱导出卡氮芥耐药的SWOZ2细胞系作为获得性耐药细胞系,通过CCK-8法测定细胞的生长曲线及卡氮芥对各细胞系的IC50和耐药指数,同时通过荧光定量PCR法检测耐药细胞与敏感细胞中11种ABC转运子mRNA表达的差异。结果:CCK-8法结果表明,与SWOZ2细胞相比,SWOZ1对卡氮芥的耐药性是SWOZ2的4.7倍,SWOZ2的卡氮芥耐药细胞系(命名为SWOZ2/B)对卡氯芥的耐药性是SWOZ2的6.5倍。采用相对定量的荧光定量PCR法检测1 1种ABC转运子在各细胞系中的表达,结果表明只有ABCG1在2株耐药细胞系中均表达上调,分别在SWOZ1中上调了4.1倍、在SWOZ2/B中上调了4.4倍。结论:ABCG1在脑胶质瘤细胞卡氯芥耐药中可能发挥重要作用。

鼻咽癌组织中ABCC2的表达与顺铂化疗敏感性的关系

目的探讨在鼻咽癌组织中ABCC2的表达与顺铂化疗敏感性之间的关系。方法收集临床资料完整的鼻咽癌标本,根据对化疗的情况分为高敏感组和低敏感组,通过免疫组化SP法检测ABCC2在鼻咽癌组织中的表达,统计分析ABCC2的表达与化疗效果、转移等方面的相关性。结果共收集84例标本,其中高敏感组50例,低敏感组34例;ABCC2在低敏感组中的表达显著高于高敏感组(P<0.01),并且在顺铂+5-氟脲嘧啶化疗方案中,ABCC2在低敏感组中的的表达高于高敏感组(P<0.05);在转移组中ABCC2的表达高于未转移组(P<0.05)。结论在鼻咽癌中ABCC2的表达与DDP化疗效果、转移有关,提示可以考虑用ABCC2来预测鼻咽癌对DDP为基础的化疗的敏感性及预后。

子宫内膜异位症中基质蛋白水解酶的异常表达

目的探讨基质蛋白水解酶在子宫内膜异位症(endometriosis,EM)发病中的作用。方法应用免疫组织化学及图像分析方法测定MMP-2,9和组织蛋白酶D在正常子宫内膜、EM在位及异位内膜中的含量。结果正常子宫内膜和EM在位内膜腺上皮的MMP-2,9和组织蛋白酶D随月经周期呈规律性变化,分泌期显著高于增生期;EM在位内膜腺上皮MMP-2,9和组织蛋白酶D的表达与正常子宫内膜无明显差异;卵巢子宫内膜异位囊肿异位腺上皮MMP-9的表达,与同组EM在位内膜差异无显著性。但卵巢子宫内膜异位囊肿异位腺上皮MMP-2和组织蛋白酶D的表达显著高于EM在位内膜。结论MMP-2和组织蛋白酶D的表达异常与EM的发病有关。

围产期缺氧缺血性脑病发病机制与治疗进展

围产期脑缺氧缺血是脑瘫、智力发育迟缓及癫痫的主要原因。据估计,大约2‰-4‰的足月新生儿出生时或出生前遭受窒息,其中约15％-20％因缺氧缺血性脑病(Hypoxic-Ischemic Encephalopathy,HIE)而死于新生儿期。

益心舒对急性心肌梗死小鼠的保护作用及机制研究

目的:探究益心舒(YXS)对急性心肌梗死(MI)小鼠的心脏保护作用及其相关机制。方法:联合TCMSP与Metascape数据库进行生物信息学分析,探寻YXS可能的作用靶点。将60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组:假手术组(sham组)、模型组(MI组)和YXS预处理组(YXS+MI组),每组各20只。YXS+MI组给予YXS(60 mg·kg^(−1)·d^(−1))灌胃,连续14 d,sham组和MI组给予等体积生理盐水灌胃。通过结扎冠状动脉左前降支建立MI模型,术后1 d用超声多普勒检测小鼠心功能;通过TTC染色检测MI面积;通过HE染色和CD45免疫组化染色分析梗死部位炎症细胞的浸润情况;采用透射电镜观察心肌超微结构和线粒体损伤;TUNEL染色检测凋亡细胞比例;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl2的蛋白水平;流式细胞术检测髓源性炎症细胞的浸润情况。结果:与sham组比较,MI组小鼠左心收缩功能受损,射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)也显著下降(P<0.01),心肌组织炎症细胞浸润增多,心肌超微结构受到破坏,凋亡细胞比例显著增加(P<0.01),Bax蛋白含量显著增高(P<0.01),Bcl2蛋白显著降低(P<0.01),流式结果显示髓源性炎症细胞浸润显著增加(P<0.01)。与MI组比较,YXS+MI组EF和FS显著上升(P<0.05),心肌组织炎症细胞浸润减少,心肌显微结构损伤减轻,凋亡细胞比例显著降低,Bax蛋白表达减少(P<0.05),而Bcl2蛋白表达增多(P<0.01),髓源性炎症细胞浸润显著减少(P<0.05)。结论:YXS预处理能够减轻小鼠急性MI后的心肌损伤,减少心肌细胞凋亡并降低髓源性炎症细胞的浸润。

早期腹腔置管灌洗透析治疗急性重症胰腺炎临床研究

目的观察早期腹腔置管灌洗透析治疗急性重症胰腺炎(SAP)的疗效,评价其优点。方法收集2009年1月至2011年12月暨南大学第二附属医院消化科连续收治的64例急性重症胰腺炎患者,随机分成腹腔置管灌洗透析组(试验组,33例)和传统治疗组(对照组,31例),比较两组腹痛腹胀缓解时间、治愈率、病死率、住院天数、医疗费用及并发症发生率等指标。结果试验组仅2例死亡(2/33),病死率6.1%,与传统治疗组[病死率19.3%(6/31)]比较差异有统计学意义(P<0.01),另外在治愈率、症状缓解时间、住院天数、医疗费用和并发症等方面均优于对照组(P<0.05)。结论早期腹腔置管灌洗透析是治疗SAP的重要措施,可显著提高疗效,降低病死率。

菌落PCR技术快速鉴别丝状真菌的实验研究

目的探讨菌落PCR在检测病原性丝状真菌方面的应用价值。方法初步建立用于丝状真菌的菌落PCR检测技术，用19种丝状真菌标准株进行验证，所有菌落PCR扩增产物进行测序，并选取8种菌株的菌落PCR产物和酶切结果与常规PCR进行比较，检测其准确性和可靠性。结果19株菌中有16株（84．2％）菌落PCR成功扩增内转录间隔（ITS）区，ITS区基因序列分析鉴定菌种正确，与NCBI数据库中相同菌种的相似度为96％～100％；与常规PCR进行比较的8株菌中，除构巢曲霉菌落PCR扩增结果为阴性外，其他菌种菌落PCR产物及酶切条带与常规PCR基本一致。结论与常规PCR相比，菌落PCR检测丝状真菌操作简单，省时省力，鉴定菌种具有较高的准确性和可靠性，可以用于丝状真菌的快速鉴定。

在糖尿病危险因素分析中人工神经网络的应用

目的 研究用神经网络(NN)分析疾病危险因素。方法 以糖尿病流行病学调查资料为基础,用BP网作为拟合模型,网络的结构为22-6-1,分析糖尿病各种可能危险因素的平均影响值(MIV),按MIV值的绝对值大小排出因子顺位,并与logistic回归模型的分析结果相比较,用对数线性模型分析因子间的联合作用。结果 NN多因素分析,糖尿病危险因子顺位为脉搏、糖尿病家族史、居住年限、肾病史、腰臀比、性别、高脂血症史、冠心病史、高血压病史、收缩压、收入、饮酒、年龄、舒张压、文化程度、体重指数、其他病史、职业性体力活动、吸烟、职业、脑血管病史、肝病史;而多因素logistic回归分析中只有7个变量入选最终模型,因子顺位为脉搏、糖尿病家族史、肾病史、腰臀比、高血压病史、职业性体力活动及年龄;对数线性模型分析发现二者的差别可由因子间的相互作用解释一部分。结论 NN完全能够胜任疾病危险因素的分析任务,可拟合出比传统模型更复杂的变量间关系。

侵袭性丝状真菌感染的流行病学趋势

随着感染真菌高危人群的增多,丝状真菌引起的侵袭性感染亦日益增多.虽然烟曲霉是最常见的病原菌,但非烟曲曲霉（如土曲霉）以及非曲霉丝状真菌（如镰刀霉属,赛多孢霉属及接合菌）也已经成为重要的感染因素.这些菌种对两性霉素B或其他常用的抗真菌药物天然耐药或不敏感,在临床上常导致较高的病死率.概述侵袭性丝状真菌感染的流行病学研究现状,旨在强调早期病原学诊断和选择敏感抗真菌药物的临床意义.