转化医学的创新人才培养模式在本科药理学课程中的应用

转化医学的创新人才培养模式,是医学教育的重要扩展,亦是培养基础—临床医学复合型创新人才的主要途径。文章就近五年来本教学团队将此培养模式应用于临床医学专业本科生药理学教学改革实施内容和教学效果进行了综合分析,探讨其在培养学生的创新意识、临床思维能力、科研素质,建立转化医学思维以及提升教师的业务素质等方面所发挥的作用。

基于大学生创新性实验计划的药理学探索性实验教学模式改革

药理学探索性实验与国家大学生创新性实验计划的目的一致,是"大学生科技创新工程"的重要扩展。文章就5年来我系对临床医学专业本科生开设的探索性实验教学改革的具体内容、组织实施、评价体系及教学效果进行分析,探讨药理学探索性实验在培养医学生发现、分析和解决问题的能力和提升医学生的综合素质方面所发挥的作用。

肾病综合征患者肾活检组织的透射电镜病理学研究

目的:探讨电镜检查在肾病综合征(NS)肾活检病理诊断中的作用。方法:对403例NS患者的肾活检组织进行透射电镜检查,分析电镜结果对最终诊断的意义。结果:"电镜对诊断起决定性作用"144例(35.7%),"电镜对诊断具有重要价值"77例(19.1%),"电镜对诊断非必需"182例(45.2%)。NS组中"电镜有诊断价值"("决定性作用"+"重要价值")的比例高于非NS组(NS∶非NS=54.8%∶32.2%,P<0.01)。"电镜有诊断价值"的比例因NS的病因、年龄和性别的不同存在组间差异,P<0.01(原发性NS∶继发性NS=77.4%∶7.5%;年龄<20岁组∶20岁～40岁组∶≥60岁组=74.4%∶52.1%∶45.8%;男∶女=68.0%∶42.2%)。结论:电镜检查对NS的正确病理诊断具有重要的意义。NS肾活检确诊对电镜的依赖程度受患者性别、年龄及病因等因素的影响。

β-淀粉样蛋白与老年痴呆症发生发展关系研究进展

老年痴呆症足一种常见的进行性神经系统退行性疾病，主要发生于中老年人群，并且其发病率在逐年升高，对AD发病机制的探讨和研究变得尤为重要。在探讨的过程中，出现了很多发病假说，本文主要围绕β-淀粉样蛋白假说介绍其发病机理和最新的研究进展。

低氧对人鼻咽癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物系统表达的影响

目的研究低氧微环境对鼻咽癌细胞系CNE-2Z尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)系统表达的影响。方法以混合气体(5%CO2,95%N2,O2<0.1%)置换法处理24 h,建立CNE-2Z细胞体外低氧培养模型。RT-PCR检测纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、u-PA、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)在CNE-2Z细胞中mRNA的表达;酶联吸附法(ELISA)测定PAI-1和u-PA蛋白表达;细胞免疫化学方法检测u-PAR蛋白表达。结果低氧处理后,CNE-2Z细胞u-PA系统中PAI-1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05);细胞裂解液中u-PA蛋白含量降低(P<0.001),但u-PA mRNA含量无显著变化(P>0.05);而对u-PAR mRNA和蛋白表达均无显著影响(P>0.05)。结论低氧能影响人鼻咽癌细胞CNE-2Z u-PA系统的表达,主要表现为上调PAI-1的表达,并可能通过促进u-PA/u-PAR复合体内吞降解的机制降低u-PA蛋白表达,但对u-PAR的表达不产生显著影响。低氧可能通过影响u-PA系统的表达而改变CNE-2Z细胞的侵袭转移能力。

远志皂苷元对新生大鼠皮质神经元的营养作用

目的研究远志皂苷元(senegenin)对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法原代培养新生24 h内SD大鼠皮质神经元,采用0.4%B27+DMEM/F12培养基制备营养缺乏模型。远志皂苷元0.5,1和2μmol.L-1及阳性对照组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)10μg.L-1。倒置显微镜下观察各组皮质神经元的形态及平均突起生长情况;免疫荧光染色法观察远志皂苷元的营养作用,检测神经元平均突起长度;另外在营养缺乏培养条件下,通过MTT法检测神经元的存活情况。结果分别加入药物作用3d后,远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1均可以促进神经元突起生长,从溶媒对照组(152±46)μm分别增加至186±51,188±34及(193±43)μm,其中远志皂苷元2μmol.L-1最为显著(P<0.01),稍弱于bFGF组(203±40)μm。营养缺乏培养条件下细胞存活率显著下降,从正常培养条件下(100.0±5.4)%降至(90.8±4.6)%(P<0.01)。远志皂苷元0.5,1及2μmol.L-1可明显改善营养缺乏引起的细胞死亡,细胞存活率分别为(109.7±3.2)%,(111.3±1.6)%及(112.9±4.8)%,且有一定的浓度依赖性(r=0.784,P<0.01)。结论远志皂苷元可以促进神经元的存活,并可促进皮质神经元突起生长,具有神经营养作用。

茶氨酸对小鼠学习记忆能力的影响

采用跳台法及复杂水迷宫法,观察茶氨酸对小鼠学习记忆能力的影响。结果表明,一定剂量的茶氨酸可缩短正常小鼠在复杂水迷宫内抵达终点的时间,减少错误次数;可延长记忆获得障碍小鼠在跳台中首次错误的出现时间,减少错误次数。结论:茶氨酸具有提高学习和记忆能力的功能。

去痴灵对AD模型小鼠学习记忆及脑内突触体素表达的影响

目的观察去痴灵对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆以及脑内突触体素(synaptophysin,SYN)表达的影响。方法选用昆明种小鼠,右侧脑室注射β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)制备AD动物模型。造模1w后,治疗组分别灌胃低、中、高剂量(3.05、6.10、12.20g·kg-1·d-1)去痴灵,以石杉碱甲为阳性对照药,连续28d。给药结束后,对各组小鼠进行Morris水迷宫测试、脑组织SYN含量测定以及海马CA1区病理结构观察。结果与模型组比较,去痴灵各剂量组均明显缩短水迷宫逃避潜伏期(P<0.05),中、高剂量组跨越平台次数显著增加(P<0.05);各治疗组AchE阳性纤维密度明显增加(P<0.05),脑内SYN含量明显升高(P<0.05),突触结构改善明显;各治疗组上述指标组间比较差异不显著(P>0.05)。结论去痴灵可明显改善Aβ所致的小鼠记忆障碍及突触丧失,其脑内突触再生,突触体素含量增加可能是去痴灵改善AD记忆的重要途径之一。

丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞氯通道的激活作用

目的研究丹参酮ⅡA对低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)氯通道的激活作用并分析该通道的生理学和药理学特性。方法采用膜片钳全细胞记录技术记录丹参酮ⅡA激活的CNE-2Z细胞氯电流,细胞外高张刺激或灌流氯离子通道阻断剂,观察并分析电流的特性。结果细胞外灌流1nmol.L-1的丹参酮ⅡA激活CNE-2Z细胞产生一个具有明显外向优势的电流,该电流没有明显的电压依赖性和时间依赖性的失活,电流的翻转电位为(-5.9±0.2)mV,接近氯离子平衡电位。渗透性容积缩小可以完全抑制该电流,氯通道阻断剂NPPB可以部分抑制该电流。结论丹参酮ⅡA激活鼻咽癌细胞膜上的氯通道,诱导氯电流,该电流具有容积敏感性。

黄芪甲苷拮抗马兜铃酸Ⅰ所致的急性肾小管损伤

目的:观察黄芪甲苷对马兜铃酸Ⅰ所致的急性肾小管损伤的影响。方法:(1)体外实验:四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察黄芪甲苷对马兜铃酸Ⅰ所致人近曲小管上皮细胞(HK-2)存活率降低的拮抗作用;(2)动物体内实验:马兜铃酸Ⅰ腹腔注射6 d建立昆明小鼠急性肾损伤模型,同时用50 mg.kg-1.d-1黄芪甲苷灌胃进行干预治疗。7 d后检测尿蛋白、尿γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平的变化和肾脏组织形态学变化。结果:(1)黄芪甲苷能增加马兜铃酸Ⅰ处理的HK-2细胞存活率,并呈剂量依赖趋势;(2)黄芪甲苷干预组小鼠尿蛋白、尿γ-GT、SCr、和BUN的水平均低于马兜铃酸肾损伤组;近曲小管坏死和裸基底膜面积也较马兜铃酸肾损伤组明显改善。结论:黄芪甲苷可以拮抗马兜铃酸Ⅰ诱导的急性肾小管损伤。

DSF-Cu通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡

目的探测双硫仑(disulfiram,DSF)螯合氯化铜(DSF-Cu)通过影响线粒体功能和细胞骨架诱导人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡。方法采用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成以及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的改变。AFM探测细胞表面形貌和超微结构、细胞高度、宽度及粗糙度的变化。激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)观察细胞骨架F-actin的分布和重组。结果细胞周期检测显示DSF-Cu将CNE-2Z细胞周期阻滞于G2/M期。Annexin-V/PI检测细胞凋亡显示随药物浓度增加,与对照组相比,实验组早凋率和晚凋率、坏死率细胞均明显增加。进一步检测凋亡相关信号发现DSF-Cu可促进CNE-2Z细胞内活性氧水平的增加及诱导MMP下降。AFM成像表明,与对照组相比,随着药物浓度增大,细胞逐渐变小,胞质浓缩,高度增加,膜表面粗糙度降低,变得平整光滑;细胞伪足由对照组的丰富密集,逐渐变短、萎缩,甚至完全破坏。LSCM进一步观察发现DSF-Cu引起F-actin荧光强度减弱,结构重排,严重影响微丝的功能。结论 DSF-Cu可诱导CNE-2Z细胞依赖线粒体的凋亡途径,利用AFM在单细胞水平上分析DSF-Cu对细胞膜的毒性作用,为鼻咽癌的治疗提供新的思路。

神经退行性疾病发病机制研究进展

神经退行性疾病是由神经元和(或)其髓鞘的丧失所致〔1,2〕,随着时间的推移而恶化,出现功能障碍。其可分为急性神经退行性疾病和慢性神经退行性疾病,前者主要包括脑缺血(CI)、脑损伤(BI)、癫痫;后者包括阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、不同类型脊髓小脑共济失调(SCA)、Pick病等〔3,4〕。

原儿茶酸对新生大鼠皮质神经元存活及突起生长的影响

目的:研究原儿茶酸(protocatechuic acid,PCA)对新生大鼠皮质神经元存活及突起生长的影响。方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,通过细胞形态学观察、神经元细胞活力检测、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)渗漏量的测定和有突起神经元数目及平均突起长度定量分析,观察不同剂量的原儿茶酸对神经元的营养作用。结果:与溶媒对照组比较,原儿茶酸低、中、高剂量(16、32、64μmol/L)组神经元活力增强,LDH渗漏量减少,有突起的神经元数目增多,神经元突起增长,神经网络更发达,并有一定的量效关系。结论:原儿茶酸能促进大鼠皮质神经元的存活及突起生长。

广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白生成的抑制作用

目的探讨广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白的影响。方法体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病(AD)β淀粉样前体蛋白(APP)基因及突变型早老素1(PS1)基因的CHO细胞系M146L,使之高效产生β淀粉样蛋白42(Aβ42),建立Aβ42过度表达的细胞模型。加入待筛选的药物广东海风藤多糖,用四唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的广东海风藤多糖(0.3125、0.625、1.25μg/ml)对M146L细胞的毒性作用,应用酶联免疫法(ELISA)观察细胞分泌的Aβ42的变化。结果不同浓度的广东海风藤多糖对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用。0.625、1.25μg/ml的广东海风藤多糖对M146L细胞分泌Aβ42有抑制作用,呈剂量依赖性。结论一定剂量的广东海风藤多糖对M146L细胞分泌的Aβ42有明显的抑制作用,其机制有待进一步研究。

原儿茶酸对M146L细胞APP mRNA表达的抑制作用

目的:探讨原儿茶酸对M146L细胞APP mRNA表达的影响,寻找潜在的具有抑制Aβ分泌的中药单体,以达到治疗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的目的。方法:体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病β淀粉样蛋白前体(amyloidβ-protein precursor,APP)基因及突变型早老素1(prsenilin-1,PS1)基因的CHO(Chinese hamsterovary cells)细胞系(M146L),使之高效产生β淀粉样蛋白42(amyloidβ-protein,Aβ42),建立Aβ42过度表达的细胞模型。加入待筛选的药物原儿茶酸,用MTT比色法检测不同浓度的原儿茶酸(0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L)对M146L细胞的毒性作用,应用RT-PCR法检测原儿茶酸对M146L细胞APP mRNA表达的影响。结果:浓度0.25、0.5、1.0mmol/L的原儿茶酸对M146L细胞存活率无明显影响,不具有细胞毒性作用,对M146L细胞APP mRNA表达有抑制作用,并呈剂量依赖性。结论:一定剂量的原儿茶酸对M146L细胞APP mRNA表达有明显的抑制作用,其机制有待进一步研究。

大黄素甲醚对体外新生大鼠皮质神经元的营养作用

目的研究大黄素甲醚对新生大鼠皮质神经元的神经营养作用。方法体外以0.4%B27+DMEM/F12培养出生24h内的大鼠皮层神经元。采用NSE免疫细胞化学染色法进行神经元鉴定。分为溶媒对照组,大黄素甲醚(0.5、1、2、4μmol/L)组和碱性成纤维细胞生长因子bFGF(10 ng/mL)组。显微镜观察各组皮质神经元的形态,利用软件统计神经元平均突起长度;MTT法检测神经元的存活情况;RT-PCR检测MAP-2表达量。加入Trk受体抑制剂或腺苷受体抑制剂单独作用或与大黄素甲醚相互作用,检测突起长度变化。结果与溶媒对照组相比,培养3d后的大黄素甲醚1、2、4μmol/L剂量组均可延长神经元的存活时间,促进神经元突起生长,增加MAP-2 mRNA的表达量。加入Trk受体抑制剂能抑制大黄素甲醚对神经元的影响,而加入腺苷受体抑制剂则无影响。结论大黄素甲醚对新生大鼠皮层神经元具有神经营养作用。

五味子醇甲对β-淀粉样蛋白损伤PC12细胞的预保护及治疗作用

目的:研究五味子醇甲对β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12细胞)的预保护及治疗作用。方法:体外培养PC12细胞,建立Aβ引起的细胞损伤模型;采用细胞形态学观察突起长度及神经网络的变化,细胞形态学定量测定有突起的细胞数目,MTT法测定细胞活性。结果:细胞形态学、细胞形态学定量和细胞活性测定结果表明,与Aβ模型组比较,五味子醇甲低、中、高剂量(1、3、9μg/mL)组PC12细胞神经突起较长,神经网络破坏的程度较轻,有突起细胞数目增多,细胞活性增高。结论:五味子醇甲具有拮抗Aβ神经毒性的作用,对Aβ损伤PC12细胞具有预保护及治疗作用。

三种阿尔茨海默病小鼠模型的建立和比较

目的建立并比较3种阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠模型的各自特点。方法 90只昆明小鼠随机分组,分别采用侧脑室Aβ25-35注射、侧脑室AlCl3注射、海马物理损伤的方法复制出3种不同的小鼠AD模型,通过Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,组织切片观察海马的形态学改变,Aβ1-40免疫组化染色观察海马CA1区老年斑形成情况。结果侧脑室注射AlCl3组和海马物理损伤组小鼠学习记忆能力比对照组明显降低(P<0.05,P<0.01),物理损伤组小鼠海马神经元丢失明显,Aβ1-40免疫组化染色阴性;侧脑室注射AlCl3组小鼠海马CA1区偶见神经元排列稀疏,在神经元胞体和突起周围可见Aβ1-40免疫组化反应阳性的棕黄色斑块;侧脑室注射Aβ25-35组小鼠学习记忆能力、海马CA1区形态均与对照组无明显差异,海马区可观察到Aβ1-40免疫组化反应阳性的细小斑块。结论上述三种模型均为AD研究常用,但各自模拟AD的侧重点不同,技术要求、成本价格、造模时间、持续时间等也不尽相同,研究中需灵活选择。

复方丹参注射液抗脂多糖诱导的兔弥漫性血管内凝血

目的:研究复方丹参注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥漫性血管内凝血(DIC)的作用。方法:用LPS诱导兔DIC模型。凝固法测定纤维蛋白原含量,全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;全自动血浆分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)以及血尿素氮(BUN);发色底物法测定蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性。观察复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC的拮抗作用。结果:兔耳缘静脉持续滴注LPS,观察到:APTT和PT显著延长;血小板计数和纤维蛋白原含量明显减少;ALT和BUN显著升高;蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低。给予复方丹参注射液后,APTT和PT的延长明显缩短;血小板计数和纤维蛋白原的含量均明显恢复;ALT和BUN显著下降;蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性显著改善。结论:复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。