雷公藤多甙防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

用兔同种异体角膜移植模型，观察了雷公藤多甙及联合环孢霉素A对植片存活时间和移植抗原诱导的迟发型超敏反应的影响。结果显示：与对照组相比，雷公藤多甙组、环孢霉素组和两种药物联合组植片存活时间显著延长，移植抗原诱导的迟发型超敏反应也显著受到抑制；其中联合组的作用又大于两种药物单独应用组。结果提示：雷公藤多甙具有显著延长角膜移植存活和防止免疫排斥反应发生的作用；与环胞霉素A具有一定的协同作用，为进一步应用于临床提供了实验依据。

山茱萸总甙滴眼液防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 :观察山茱萸总甙 (COG)滴眼液局部应用对角膜移植免疫排斥反应的影响。方法 :建立封闭群大鼠角膜移植模型 ,用裂隙灯显微镜记录及比较各组角膜排斥反应发生时间 ;并进行病理学和扫描电镜检查。结果 :病理学检查B、C组 15d时的角膜植片淋巴细胞浸润及新生血管明显少于A组。免疫组化显示 :ICAM - 1的表达在 15d时B、C组明显少于A组。结论 :COG滴眼液能有效地防治角膜移植免疫排斥反应。

NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34+细胞数和外周血淋巴细胞中CD3+细胞、CD19+细胞及供鼠来源的H-2Kb+细胞表达的百分率,并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较。结果表明:在致死剂量TBI预处理的移植中,输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较,存活率显著增高(60天存活率为70%vs0.0%);白细胞数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高[(86.68±4.45)%vs(4·68±0·32)%]。移植后28天输注NK细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[(33.69±3.36)%vs(50.40±5·06)%,p<0.01],移植后60天两组比较差异无显著性(p>0.05)。在非致死剂量TBI预处理的移植中,移植后30天,异基因骨髓移植组H-2Kb+细胞表达率明显下降,移植后60天已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80%以上的H-2b+细胞表达。结论:在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

角膜移植免疫赦免机制的研究现状

与其它器官移植相比,角膜移植不易发生免疫排斥反应。这种低易感性称为角膜移植的免疫赦免性。然而,赦免是相对的,对于角膜新生血管化、炎症背景或二次移植的高危受体仍具有较高的排斥率。因此,进一步阐明其赦免机制对于制定防治角膜移植排斥反应的策略具有重要意义。本文旨在综述维持角膜移植免疫赦免的有关机制并讨论各要素之间的相互关系。

前房相关免疫偏离对碱烧伤眼角膜移植的影响

目的观察诱导供体特异性的前房相关免疫偏离(ACAID)是否有助于角膜植片在碱烧伤高危眼中的存活。方法用1mol/L的NaOH烧灼新西兰白兔单眼角膜中央建立高危眼模型,然后将动物随机分为诱导组和对照组,1个月后进行角膜移植。诱导组在角膜移植前10d前房植入供体肌肉诱导供体特异性ACAID,对照组未处理。观察诱导组与对照组相比角膜植片存活时间是否延长。结果与对照组相比,诱导ACAID组角膜植片平均存活时间延长,两组植片存活率的差异具有显著统计学意义。结论诱导供体特异性ACAID有助于碱烧伤高危眼角膜植片的存活。

前房接种角膜抗原和角膜移植物诱导的前房相关免疫偏离

目的观察角膜抗原和角膜移植片诱导前房相关免疫偏离（ＡＣＡＩＤ）的可能性。方法分别将角膜抗原和带有完整内皮层的角膜移植片接种于新西兰兔眼结膜下和前房。７天后，使用添加完全弗氏佐剂（ＣＦＡ）的角膜抗原或植片供体脾细胞免疫动物。１周后，评估抗原特异性迟发型超敏反应（ＤＴＨ）的诱导情况。结果结膜下接种抗原和移植片的动物均发生了抗原特异性ＤＴＨ。相反，前房接种抗原和移植片的动物未显示ＤＴＨ。结论由角膜抗原和角膜移植片诱导的ＡＣＡＩＤ可能参与了角膜移植片存活的维持。

转化生长因子-β防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

转化生长因子-β（TGF）是一具有免疫调节活性的多肽分子，包括抑制T细胞和B细胞的分化以及灭活巨噬细胞功能。本研究建立兔同种异体偏中心穿透性角膜移植和异位角膜移植模型，观察了TGF-β对角膜移植排斥反应的影响。发现使用TGF-β具有延长移植片存活和抑制供体特异性迟发型超敏反应的作用。结果提示TGF-β具有作为免疫抑制剂抑制角膜移植排斥反应的能力。

角膜移植免疫赦免机制的实验研究

在兔眼建立同种异体穿透性角膜移植模型。通过术后不同的处理方式，将动物分为角膜移植排斥组和长期存活组。然后观察两组动物对原供体皮肤移植片的存活和原供体淋巴细胞诱导迟发型超敏反应的影响。结果长期存活组供体特异性移植皮肤的存活时间显著较长，对供体特异性淋巴细胞诱导的迟发型超敏反应有较显著抑制作用。结论长期存活的角膜移植受体针对移植抗原产生了前房相关免疫偏离，由其诱导的抑制性T细胞亚群对于移植物的长期存活和防止排斥反应发生起一定的作用。

Jagged1在树突状细胞介导淋巴细胞诱导皮肤移植免疫耐受中的作用

目的:探讨Jagged1在树突状细胞(DC)介导淋巴细胞诱导同种异基因皮肤移植免疫耐受中的作用。方法:C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体行皮肤移植术,受体小鼠分为对照组,Jagged1+DAPT处理组和Jagged1处理组。取供体小鼠淋巴细胞加入经rmIL-4和rmGM-CSF处理9 d的供体骨髓细胞中,当日和隔日分别加入Jagged1和DAPT。2 d后取淋巴细胞,于皮肤移植第0天、第2天和第4天,经尾静脉注入受体小鼠。观察皮肤移植物存活时间和移植物病理变化,并检测受体小鼠混合淋巴细胞反应和迟发型超敏反应。结果:Jagged1处理组的皮肤移植物平均存活83.6 d,显著长于其它各组(P<0.01);Jagged1处理组移植皮片内浸润的炎细胞数量明显减少;在混合淋巴细胞反应中,Jagged1处理组小鼠对供体小鼠呈现低反应性(P<0.01),而对第三方无关供体KM小鼠表现强烈的增殖反应,Jagged1处理组小鼠在迟发型超敏反应中也表现出显著的低反应性(P<0.01)。结论:输注Jagged1联合DC处理的淋巴细胞诱导受体获得供体抗原特异性的免疫耐受。

小鼠松果体同基因异体胸腺内移植对免疫衰老作用的研究

目的探讨小鼠松果体同基因异体胸腺内移植对免疫衰老的作用。方法将幼龄小鼠松果体移植至老龄小鼠胸腺内,术后切片观察确定手术可靠性。采用实时定量PCR方法对术后受体小鼠胸腺初始T细胞标记物(sjTRECs)进行绝对定量,以评价免疫中枢器官胸腺的生成和输出功能;采用实时定量逆转录PCR方法对术后受体小鼠的几种胸腺状态和功能相关基因的表达进行相对定量,以直接评价胸腺微环境。结果切片观察到移植的松果体在小鼠胸腺内存活良好;手术组小鼠的胸腺和脾脏淋巴细胞内的sjTRECs水平高于伪手术组(P<0.01);与伪手术组的小鼠相比,手术组的小鼠胸腺相关基因表达变化比值为:LMO2:0.78±0.08、Foxn1:5.27±1.58,IL-7:3.46±1.84。结论松果体移植后老年小鼠胸腺的初始T细胞生成和输出功能有显著的提高,胸腺微环境分泌因子的基因表达显著增加,而负调控因子的表达相对下降,回复了衰老胸腺的功能,因而小鼠松果体移植对于以胸腺退化为先导的免疫衰老有逆转的作用。

自然杀伤细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响(英文)

背景:近几年,自然杀伤细胞与异基因骨髓移植的关系备受关注。目的:探讨自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。方法:以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射的预处理条件下进行异基因骨髓移植,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)自然杀伤细胞。结果与结论:在致死剂量全身照射的移植中,输注自然杀伤细胞与不输注自然杀伤细胞的移植组比较,存活率显著增高;白细胞计数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞计数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高。移植后28d,输注自然杀伤细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注自然杀伤细胞组,60d两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。在非致死剂量全身照射的移植中,移植30d,异基因骨髓组H-2Kb+细胞表达百分率明显下降,60d已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度自然杀伤细胞的两组在移植后60d仍能检测到80%以上的H-2Kb+细胞表达。提示,在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性自然杀伤细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

小鼠眼内移植性黑色素瘤诱导免疫偏离的表达

目的 观察小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤是否具有诱导免疫偏离的能力。方法 将雄性昆明小鼠 60只随机分为实验组及其相应的对照组共 5组。分别于实验组小鼠的前房或玻璃体腔接种黑色素瘤B16F10细胞 ,然后观察测量和比较其抗原特异性迟发型超敏反应 (DTH)的程度。结果 ( 1)小鼠前房和玻璃体腔移植性黑色素瘤均可进行性生长。 ( 2 )各组小鼠右耳DTH反应的肿胀值为前房组 ( 3 4± 3 5 ) μm ,玻璃体腔组 ( 3 6± 96) μm ,前房对照组 ( 194± 99) μm ,玻璃体腔对照组 ( 186± 5 5 ) μm以及空白对照组 ( 165± 118) μm。实验组与其相应对照组的差异具有显著性意义 (前房组t =-5 2 0 9,P =0 0 0 0 ;玻璃体腔组t =-3 871,P =0 0 0 2 )。 ( 3 )病理观察实验组“二免”后右耳未见炎性细胞浸润 ,而对照组则相反。结论 同种异体的昆明小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤均具有诱导其相关免疫偏离的能力。

正常房水在活体对角膜移植免疫排斥反应的抑制作用

目的：观察正常房水对角膜移植免疫排斥反应的作用。方法：在兔眼建立偏中心穿透性角膜移植模型，术后结膜下注射正常牛眼房水，观察植片存活时间。结果：与对照组相比，治疗组角膜移植对存活时间显著延长（P＜0.02）。结论：正常房水在活体内具有抑制角膜移植免疫排斥反应的作用。

角膜移植存活受体的细胞免疫特征

目的：探索角膜移植存活受体的免疫机制。方法：在兔眼建立同种异体穿透性角膜移植模型，将动物分为角膜移植排斥组和存活组，然后分别在两组动物观察对原供体皮肤移植片的存活和原供体淋巴细胞诱导的迟发型超敏反应的影响。结果：与角膜移植排斥组相比，存活组不但对原供体皮肤移植片产生了延长效应，而且对原供体淋巴细胞诱导的ＤＴＨ也产生了显著抑制作用。结论：存活的角膜移植受体针对移植抗原产生了前房相关的免疫偏离。

双氢青蒿素对小鼠T细胞的免疫抑制作用

目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖情况;利用流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况;用Fluo-4/AM荧光钙离子探针技术检测细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的变化;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布;运用流式细胞术(FCM)结合三色荧光染色技术检测CD4+CD25highTreg早期活化抗原CD69表达情况。结果:CFDA-SE染色结果显示,DHA能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性;DHA对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25的表达有促进作用,而对CD71的表达有抑制作用,均呈剂量依赖性;DHA单独作用不能引起T细胞[Ca2+]i的升高,在ConA的刺激下能引起[Ca2+]i浓度升高;PI染色流式分析结果显示,DHA阻滞细胞于G0/G1期,阻止细胞进入S期和G2/M期;DHA能够下调CD4+CD25highTreg细胞CD69的表达。结论:DHA对小鼠淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

小鼠眼内移植三种B16黑色素瘤细胞系的比较研究

目的 :比较B16F0、B16F1、B16F10 3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于该肿瘤细胞系来源的C5 7BL/6小鼠前房内的进展情况。方法 :将此三种黑色素瘤细胞系培养后的活细胞悬液移植于C5 7BL/6小鼠前房内 ,观察并比较其眼球溃破时间、淋巴结和肺的转移及生存期。结果 :F10组移植肿瘤眼眼球溃破时间早于另两组 ,而F0组与F1组间无差异。在鼠前房移植肿瘤细胞后的 18d ,F1组及F10组鼠出现移植肿瘤眼同侧的颈部淋巴结转移 ,而F0组未出现类似情况 ;在鼠前房移植肿瘤细胞后的 2 8d ,3组均出现肺转移。F0组小鼠生存时间长于另两组 ,而F1组与F10组间无差异。结论 :3种黑色素瘤细胞系的细胞移植于小鼠前房内后进展不同 。

脱水淫羊藿素对小鼠巨噬细胞免疫功能的影响

目的:研究脱水淫羊藿素(AHI)在体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞免疫功能的影响。方法:分离制备小鼠骨髓来源巨噬细胞;CCK-8法检测不同终浓度的AHI对巨噬细胞的毒性;采用Griess试剂盒检测AHI对巨噬细胞产生NO的影响;流式细胞术(FCM)检测AHI对巨噬细胞吞噬E.coli颗粒的影响;利用FCM结合双色免疫荧光染色技术检测AHI对巨噬细胞早期活化标志CD69的表达情况;使用流式液相蛋白定量检测技术(CBA)检测AHI对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为2.5、5、10μmol/L的AHI对活化的小鼠巨噬细胞均具有明显的免疫抑制作用,特别是5μmol/L AHI能明显抑制经LPS刺激的巨噬细胞早期活化,释放NO,吞噬E.coli颗粒,以及分泌IL-6、MCP-1、TNF和IL-12p70四种细胞因子。结论:AHI对LPS诱导的小鼠巨噬细胞的活化具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

淋巴细胞免疫治疗对小鼠自然流产模型母胎界面CD80^+表达及妊娠结局的影响

目的:评价CBA/J×DBA/2小鼠配对组合作为反复自然流产模型的生殖力特点,及其与母胎交界CD80表达间的关系,并研究淋巴细胞免疫治疗(lymphocyte immunotherapy,LIT)对CD80表达水平的影响。方法:对CBA/J×DBA/2小鼠的生殖力特点进行为期120d的观察,并与生殖力正常的4种对照组进行比较。另计算15对CBA/J×DBA/2小鼠孕13d的胚胎吸收率,并用CD80-FITC和CD45-PE双色流式细胞术检测CD80细胞在母胎交界面的构成比。为了明确CD80^+细胞的身份,检测了CD3、DX5(NK细胞)和MHC-Ⅱ在CD80细胞群中的表达水平。此外,检测LIT组与未治疗组CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率和CD80细胞的阳性率。结果:CBA/J×DBA/2小鼠的流产特点是为孕10d左右的反复流产。CBA/J×DBA/2小鼠孕13d的胚胎吸收率显著高于BALB/c×DBA/2小鼠(30.8％±16.6％vs.7.7％±6.7％,P<O.01)。与此相应,CBA/J×DBA/2小鼠母胎交界面CD80^+细胞检出率显著高于对照组(11.7％±5.8％vs.3.9％±1.8％,P<O.01)。LIT可有效降低CBA/J×DBA/2小鼠的胚胎吸收率,且胚胎吸收率的下降与母胎交界面CD80^+细胞检出率的下降相关。结论:CBA/J×DBA/2小鼠模型具有围着床期反复自然流产的特点。早期A丕胎吸收与较高的CD80^+细胞检出率相关,提示CD80^+细胞可能是围着床期反复流产的重?

碱烧伤对眼前房免疫赦免状态的削弱和破坏

目的观察碱烧伤后眼免疫赦免状态的改变。方法使用０．５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ在兔眼建立碱烧伤模型。通过胸腺细胞刺激反应检测碱烧伤后不同时间房水的免疫抑制水平。另外，观察了碱烧伤对前房相关免疫偏离（ＡＣＡＩＤ）的支持能力。结果碱烧伤后眼房水的正常免疫抑制效应显著下降，即使在碱烧伤后２个月。烧伤眼接种抗原后ＡＣＡＩＤ诱导失败。结论碱烧伤后角膜移植免疫排斥反应的高发率除与植床的高度血管化和炎症背景外。