以教育经济学的视角探讨高校实验动物中心的发展

运用教育经济学的理论引领高校实验动物中心的改革发展模式会更加促进高等教育的发展。本文通过分析目前我国实验动物科学发展的现状,结合高校实验动物中心的发展趋势,运用教育经济学的相关理论对高校实验动物中心工作提出一些看法和思考,即:构建人力资本培育模式、加强成本的控制与管理,走实验动物的标准化、规模化、产业化、股份制之路。

高校专业实验室的科学化管理及开放与合作实践探讨

高校实验室是大学生和研究生能力培养和开展科学实验的重要场所,对培养专业人才及推动科技创新具有重要的意义。高校实验室的管理运行状态,开放与合作模式直接影响其作用发挥。本文基于桂林医学院科学实验中心的管理模式、以及与桂林理工大学专业实验室的开放与合作现状,分析了高校专业实验室的科学化管理和开放与合作实践,为充分发挥高校实验室功能及培养高校专业人才提供了参考。

SiRNA-Survivin增强鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

目的研究Survivin表达抑制对鼻咽癌放射敏感性的影响,探讨Survivin基因为靶的分子干预在鼻咽癌放疗中作用。方法采用脂质体将Survivin特异性siRNA转染鼻咽癌5-8F细胞系,半定量RT-PCR、流式细胞仪检测Survivin基因表达;Survivin特异性siRNA转染5-8F细胞,培养24h后,用6GY的放射线处理细胞,继续培养24h后,收集细胞。流式细胞仪、镜下计数检测细胞增殖、凋亡与细胞周期。结果Survivin特异性的siRNA能有效地阻断5-8F细胞系中Survivin基因表达。特异性SiRNA加放射组,细胞抑制率(33.7±1.5%)显著高于特异性SiRNA组([23.8±4.3)%,(P<0.05)]和随机序列的siRNA加放射组([15.5±1.7)%,(P<0.01)]。特异性SiRNA加放射组,细胞凋亡率(24.67±0.50)显著高于特异性SiRNA组([20.30±0.44),(P<0.05)]和随机序列的siRNA加放射组([6.58±0.38),(P<0.01)]。特异性siRNA加放射组,S/G1比率(2.76±0.186)显著高于特异性siRNA组([1.91±0.067),(P<0.01)]与随机序列的siRNA加放射组([0.585±0.066),(P<0.01)]。结论有效干预Survivin基因表达能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,增强鼻咽癌的放疗效果。

表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调存活素表达诱导鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡的实验研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡诱导作用以及这个过程中存活素(survivin)的表达变化特点。方法应用噻唑蓝(MTT)法计算不同浓度EGCG作用于CNE-2鼻咽癌细胞后不同时间点的生长抑制率,并通过细胞荧光显微镜观察其凋亡情况,同时应用RT-PCR法检测这个过程中survivin mRNA的表达变化。结果EGCG诱导CNE-2细胞凋亡,对其生长具有明显的抑制作用,并且存在时间和剂量依赖关系,同时伴有survivin mRNA的表达下调。结论EGCG能诱导CNE-2细胞凋亡,明显抑制其生长,这种诱导凋亡的能力通过下调survivin mRNA的表达实现。

高校开放实验室在研究生培养中的思考

我校科学实验中心是1个开放实验室,实行主管院长领导下的主任负责制,现有专职管理与技术人员13人。为了改善科学实验中心的实验条件与环境,近年来学校加大资金和人力投入,整合和购进一批大型精密仪器设备,建立了分子生物学、细胞生物学、流式分析、显微成像分析、基因分析、

2021年桂林市秀峰区1~69岁居民乙肝和丙肝血清流行病学调查

目的了解现阶段桂林市秀峰区人群乙型病毒性肝炎(HBV)和丙型病毒性肝炎(HCV)流行和血清免疫状况,评估肝炎防治工作及成效,为制定新的防控策略提供理论基础。方法通过二阶段整群随机抽样的方法抽取秀峰区1~69岁人群707名进行乙肝和丙肝的血清流行病学调查。采集调查对象静脉血3~5ml,使用ELISA法对样本进行HBsAg、HBsAb、HBcAb及HCV-Ab检测。结果调查对象HBsAg总阳性率为7.50%,抗-HBs总阳性率为62.38%,抗-HBc总阳性率为53.47%,各年龄组之间HBsAg、抗-HBs和抗-HBc阳性率的差异具有统计学意义(P<0.05)。共检测出HCV阳性4例,男女各2例,年龄分布为40~49岁1例,50~59岁3例。结论秀峰区人群HBsAg及抗-HBc阳性率较往年有所提升,抗-HCV阳性率低于我国人群一般水平。应加强乙肝疫苗接种,完善对肝炎病毒传染源和传播途径的监管。

基于网络药理学和体外实验探讨复方苦参注射液抗非小细胞肺癌的作用机制研究

目的基于网络药理学及体外实验探讨复方苦参注射液(CKI)抗非小细胞肺癌(NSCLC)的分子机制。方法通过网络公开数据库及查阅文献,分别获得CKI和NSCLC的靶点。筛选两者共有靶点后,构建靶点蛋白互作网络,进而找到CKI抗NSCLC的关键靶点。利用David数据库对关键靶点进行GO和KEGG信号通路分析,通过R软件对结果进行可视化。通过qPCR技术对富集到与NSCLC相关的信号通路进行体外实验验证。结果共收集到CKI相关靶点372个,NSCLC相关靶点426个。生物信息学分析共富集到93个生物过程(BP)以及30条信号通路,其中缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(AMPK)信号通路、磷脂酰肌醇3'-激酶(PI3KAkt)信号通路可能与CKI抗NSCLC相关。体外实验表明,经CKI治疗后,ERBB2、MTOR、IGF1R及VEGFA基因相对表达量显著降低。结论CKI可能通过抑制ERBB2、MTOR、IGF1R及VEGFA基因相对表达,进而调控HIF-1、AMPK、PI3K-Akt信号通路发挥其抗NSCLC的作用。

肝细胞癌预后、诊断和免疫细胞浸润相关关键基因及其潜在治疗药物的生物信息学分析

目的:利用生物信息学分析方法筛选与肝细胞癌(HCC)患者预后、诊断和免疫细胞浸润相关的关键基因,并分析其潜在治疗药物。方法:从基因表达汇编(GEO)数据库和癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载HCC基因表达谱数据及相应的HCC患者临床信息。采用R软件limma包筛选HCC差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,利用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,使用Cytoscape软件对PPI网络进行可视化并筛选关键基因。通过Kaplan-Meier生存曲线和LASSO回归算法鉴定HCC预后相关关键基因,并利用外部数据集对其表达进行验证和诊断效能分析。采用CIBERSORT算法评估预后相关的关键基因表达与HCC免疫细胞浸润的关系。利用MiRNet和Network Analyst数据库分别构建微小RNA(miRNA)-关键基因mRNA和转录因子(TFs)-关键基因mRNA分子调控网络。利用CMap数据库筛选潜在治疗HCC的小分子药物。结果:共筛选出146个DEGs,其中表达上调基因30个,表达下调基因116个。GO功能和KEGG信号通路富集分析,DEGs明显富集在类固醇、烯化合物和激素代谢等生物过程(BP)及视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素P450(CYP450)、补体和凝血级联反应等信号通路。PPI网络分析筛选得到14个关键基因,其中甲酰氨基转移酶环化脱氨酶(FTCD)、分泌型磷蛋白2(SPP2)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、补体C6(C6)和CYP450家族成员2C9(CYP2C9)与HCC患者预后、临床病理分期和组织学分级有明显相关性,在HCC诊断中具有较高的诊断效能,与HCC的免疫细胞浸润有密切关联。Hsa-mir-182-5p、同源框CUT样蛋白1(CUX1)、早期生长反应1(EGR1)、SMAD家族成员4(SMAD4)和肿瘤蛋白P53(TP53)是靶向上述预后相关关键基因的重要调控因子。DL-硫沙芬(DL-thiorphan)、异丙嗪(promethazine)和芹菜素(apigenin)可能对HCC有治疗作用。结论:FTCD、SPP2、TAT、C6和CYP2C9可能是HCC诊断、预后判断和治疗的潜在靶点,预测得到的3种小分子药物DL-thiorphan,promethazine和apigenin可为HCC治疗药物的研发提供参考。

肾癌相关miRNAs及靶基因对肾癌预后的评估价值

目的基于美国癌症基因组图谱(TCGA)构建肾癌miRNAs预后风险模型评分公式,分析这个评分公式评估miRNAs及其靶基因作为肾癌预后分子标志物的潜在临床价值。方法基于TCGA肾癌miRNAs与mRNA测序数据,采用单因素、Lasso和多因素Cox回归分析,构建肾癌miRNAs预后风险模型;通过对靶基因进行GO、KEGG富集分析,筛选相关miRNAs;在临床样本中验证预后风险模型中筛选出的miRNAs及其靶基因的表达。结果基于TCGA数据库,在肾癌与其癌旁样本转录组数据中共找到94个差异miRNAs和1226个差异mRNAs,独立预后分析筛选得到7个miRNAs。GO与KEGG富集分析结果提示,7个miRNAs的功能与PI3K-Akt信号通路、钙离子信号通路、MAPK信号通路有关。采集肾癌临床样本,应用qPCR分析,结果显示,5个miRNAs在肾癌临床样本中的表达模式与TCGA数据库中的表达模式一致,miRNAs的8个靶基因表达模式与其在TCGA数据库中的表达趋势一致。免疫组化结果显示,HPGD在肾癌中低表达。结论构建的肾癌miRNAs预后模型能有效筛选肾癌预后相关miRNAs,这些miRNAs的研究对揭示肾癌发生与发展机制及评估肾癌预后具有重要意义。

鞘脂及其代谢产物在肿瘤发生发展中的作用

鞘脂广泛存在于细胞膜,参与细胞信号传导、细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡等生物过程。鞘脂及其代谢产物在肿瘤发生发展中扮演着重要角色,包括促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,抑制肿瘤细胞凋亡和促进免疫逃逸等。近年来,鞘脂在多种肿瘤中的作用被陆续发现。目前,鞘脂及其代谢产物已成为肿瘤治疗中的研究热点,该文将主要阐述鞘脂及其代谢产物在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结直肠癌等肿瘤发生发展中的作用和应用前景。

EGCG对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、凋亡及survivin、VEGF表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及生存素(survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:体外培养鼻咽癌细胞,以不同质量浓度EGCG处理,采用MTT法检测细胞增殖抑制作用,Hoechst33258染色观察凋亡细胞并计算细胞凋亡率,流式细胞仪检测细胞周期变化,RT-PCR检测survivin和VEGF的表达变化。结果:EGCG处理后,CNE-2细胞增殖明显受到抑制,呈时间和剂量依赖性;CNE-2细胞凋亡率显著升高;CNE-2细胞周期阻滞于G1/G0,表现为浓度依赖性;survivin和VEGF的表达明显下调,随EGCG浓度的增加有下降趋势。结论:EGCG能抑制鼻咽癌细胞增殖、促进其凋亡;机制可能与EGCG下调survivn和VEGF的表达有关。

EGCG抑制NF-κB的表达增强鼻咽癌裸鼠移植瘤对放疗的敏感性

观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-Gallate,EGCG)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏效应,并探讨其与核转录因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的关系。方法:取低分化鼻咽癌CNE2细胞接种于雄性裸鼠皮下,共接种20只。待肿瘤结节约4～6mm时,随机分为生理盐水组、EGCG组[30mg/(kg·w)]、放疗组、EGCG联合放疗组,共四组。不同因素治疗3周后处死动物,迅速剥离瘤体称重,量体积,计算抑瘤率。RT-PCR检测瘤体组织中NF-κB的表达水平。结果:EGCG联合放疗组能显著地抑制肿瘤的生长(P<0.01);EGCG联合放疗组NF-κB的表达水平较放疗组明显下降(P<0.01)。结论:EGCG能增强CNE2细胞裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其机制可能与抑制NF-ΚB的表达水平有关。

PDGF-α受体反义寡核苷酸对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,HRPE)细胞增殖和凋亡的作用。方法:使用阳离子脂质体lipofectamineTM2000将靶向PDGFR-α基因的ASODN转染至细胞株HRPE细胞,MTT法检测对HRPE细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞;流式细胞仪检测HRPE细胞的周期和凋亡率。结果:PDGFR-αASODN转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:沉默PDGFR-α基因表达可显著抑制HRPE细胞的增殖,并能诱导其凋亡。

莪术醇诱导人肝癌HepG2细胞衰老及其机制研究

为进一步探讨莪术醇的诱导细胞衰老的机制,该研究采用荧光定量PCR技术对莪术醇处理后细胞中81个细胞衰老相关基因差异表达谱进行分析,结果发现TP53及其下游基因p16Ink4a、p21Waf1/Cip1和p27Kip1等的表达水平显著升高,伴随ABL1、ALDH1A3、CHEK2、HRAS、PTEN等多个衰老信号通路启动与效应关联基因的转录显著增强,而CyclinA2、IGFBP3、SIRT1以及TERT等细胞周期进程与衰老信号通路的负性调控基因的表达水平则显著降低。Western印迹检测结果显示,p53及其下游周期素依赖性蛋白激酶抑制物(CKI)分子p21WAF1和p16INK4水平升高,CyclinA2水平降低,与PCR结果一致,并伴野生型p53-诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)水平显著增高,提示莪术醇可能通过激活p53信号通路诱导HepG2细胞衰老。该研究进一步发现莪术醇能够诱导HepG2细胞发生衰老表型改变,伴G0/G1期周期阻滞。

EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。

EGCG对鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤放疗的增敏作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌裸鼠移植瘤放疗的增敏作用及可能机制。方法将低分化鼻咽癌CNE-2细胞株接种于20只4～6周龄雄性BALA/C裸鼠皮下,肿瘤长至4～6mm时随机分为对照组、EGCG组、放疗组、EGCG+放疗组。分别采用生理盐水、EGCG、放疗、EGCG+放疗等干预。21天取出肿瘤,计算肿瘤抑制率;HE染色观察肿瘤细胞形态变化;RT-PCR检测瘤组织Caspase-3mRNA表达。结果与对照组相比,其他三组肿瘤抑制率均明显升高,EGCG+放疗组显著高于EGCG组及放疗组(P<0.05);对照组肿瘤细胞生长旺盛,EGCG组、放疗组、EGCG+放疗组可见大量凋亡及坏死细胞,其中以EGCG联合放疗组最明显。Caspase-3mRNA表达均明显升高,而以EGCG+放疗组最为明显(P<0.05)。结论 EGCG能增强鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其机制可能与上调Caspase-3mRNA的表达有关。

应用反义寡核苷酸沉默PDGFR-α表达对RPE细胞增生和凋亡的影响

背景视网膜色素上皮（RPE）细胞能分泌血小板源性生长因子（PDGF），又具有PDGF受体（PDGFR），已有研究表明PDGF对增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的形成起着关键性作用。目的应用反义寡核苷酸（ASODN）技术抑制血小板源性生长因子受体-α（PDGFR-α）基因的表达，观察其对RPE细胞增生和凋亡的影响。方法将人RPE细胞株在含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养基中进行培养，取对数生长期细胞调节细胞密度为5×10^5个／孔，接种于96孔板，待细胞生长至80％～90％融合时进行转染。空白对照组不加PDGFR—dASODN及阳离子脂质体Lipofectamine 2000，1．0μmol／LLipo—ASODN组、2．0μmol／LLipo—ASODN组使用阳离子脂质体Lipofectamine2000将靶向PDGFR—a基因的ASODN转染至RPE细胞株。细胞转染48h后，MTT法检测各组细胞的吸光度（4）值并以A490表示，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测PDGFR—dmRNA在RPE细胞中表达的变化；hoechst33258荧光染色观察培养细胞的凋亡情况；流式细胞仪检测RPE细胞的细胞周期和凋亡率。结果空白对照组、1．0μmol／LLipo—ASODN组及2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞的A490值分别为1．45±0．12、1．07±0．06、0．65±0．05，差异有统计学意义（F=97．72，P=0．00），1．0μmol／LLipo—ASODN组和2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞A490值明显低于空白对照组，差异均有统计学意义（P=0．00、0．00）；2．0μmol／L Lipo—ASODN组RPE细胞A490值明显低于1．0μmol／LLipo—ASODN组，差异有统计学意义（P=0．00）。Hoechst33258荧光染色显示，转染PDGFR—αASODN后RPE细胞凋亡数量多于空白对照组。流式细胞仪检测表明，转染PDGFR—αASODN后RPE细胞阻滞于G0／G1期（F=206．70。P=0．00），1．0μmol／LLipo—ASODN组和2．0μmol／LLipo—ASODN组RPE细胞凋亡率均明显高于空白对照组（37．8±1．3vs10．5±0．1，61．2±1．9∥s10．5±0．1）（F=1808．90，P=0．00）。PDGFR—α在RPE细胞中的表达随PDGFR—dASODN浓度的升高有降低的趋势。结论利用ASODN技术沉默PDGFR—α基因表达可以显著抑制PVR过程中RPE细胞的增生，并能诱导其凋亡，不同浓度PDGFR—OLASODN转染后能下调PDGFR—dmRNA的表达，PDGFR-α基因的ASODN靶向技术为PVR的基因治疗提供了实验依据。

UPLC-QQQMS测定咳特灵中小叶榕干浸膏12种成分

本文建立了超高效液相-串联四极杆质谱多反应监测模式法,同时测定小叶榕干浸膏12种成分的含量。小叶榕干浸膏提取物用体积分数为10%的乙腈溶液超声提取,提取液用安捷伦ZORBAX HSS T3色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)分离,甲醇-0.1%甲酸(体积比)梯度洗脱,电喷雾电离源多反应模式监测。所建立的方法对小叶榕干浸膏12种成分的定量限均小于1.694μg/L,在定量范围内离子的色谱面积与成分质量浓度呈线性关系,相关系数均大于0.99,加样回收率为82.2%~109.5%,日内及日间精密度RSD分别为1.0%~6.0%和1.5%~5.1%。检测结果表明小叶榕干浸膏中黄酮类化合物异牡荆素、荭草素、异荭草素、芦丁含量均较高,酚类化合物奎宁酸、没食子酸含量较高。该法为进一步研究和修订咳特灵制剂的质量标准提供了科学依据。

Stathmin沉默抑制鼻咽癌5-8F细胞的恶性表型

目的探讨stathmin沉默对鼻咽癌5-8F细胞株的生物学作用。方法实验设空白对照组(未转染载体的5-8F细胞),阴性对照组(转入pGenesil-1.1-HK质粒表达载体),stathmin沉默组(转入pGenesil-1.1-STM质粒表达载体),siRNA重组表达载体采用脂质体转入鼻咽癌5-8F细胞,然后进行G418筛选,挑取单克隆扩大培养,获得稳定转染的5-8F细胞株。采用MTT实验、流式细胞仪分析细胞的增殖和周期;裸鼠移植瘤实验分析细胞的成瘤性。结果 Stathmin沉默组5-8F细胞增殖受抑制,其抑制率(33.67±2.52)%明显高于阴性对照的(8.13±0.60)%和空白对照组的0,差异有统计学意义(P<0.05);Stathmin沉默组细胞阻滞于G2期,G2期细胞为(15.77±0.55)%,高于阴性对照组的(11.32±0.79)%和空白对照组的(10.90±0.92)%(P<0.05);Stathmin沉默组裸鼠移植瘤质量为(0.32±0.21)g,低于阴性对照组的(1.10±0.40)g和空白对照组的(1.52±0.30)g(P<0.05)。结论 Stathmin沉默能抑制鼻咽癌5-8F细胞的恶性生物学表型。

莪术醇对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭能力的影响

目的探讨莪术醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖能力、侵袭能力的影响。方法利用MTT实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖能力;应用基质胶侵袭小室实验检测乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力;采用real-time PCR法检测经不同浓度的莪术醇药物干预的MDA-MB-231细胞,观察羟基末端结合蛋白1(CtBP1)在不同组中表达的变化。结果不同浓度的莪术醇(100、50、25、12.5μg/mL)处理下,细胞数量呈差异性、阶梯状下降,浓度为100μg/mL的细胞数量减少最为明显,差异有统计学意义(P<0.05)。同时细胞侵袭能力按药物浓度递减而减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR的结果显示,莪术醇可显著下调MDA-MB-231中CtBP1的表达(P=0.000)。结论莪术醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,对其侵袭能力亦有较强影响,药物浓度越高抑制增殖、侵袭、下调CtBP1表达的效果越明显。