动物药学专业《兽药生产技术》课程教学探索

《兽药生产技术》是动物药学专业的一门专业核心课程,也是一门实践性很强的学科。通过理论课程、实验课程和课程实习的学习,使学生掌握兽药剂型、制剂设计、制备工艺及质量控制等基本理论、基本知识和基本技能,本课程教学内容包含了教材的编写、教学内容设计以及强化实践教学,旨在为培养高素质、满足兽药产业急需的动物药学专门人才奠定基础。

病毒与宿主蛋白互作研究技术进展

蛋白质间的相互作用在预测靶蛋白功能、了解病毒感染宿主的机制和研发新型抗病毒药物方面发挥着重要作用。大多数蛋白质以复合物形式来实现其功能。近年来,已经研发了多种基于生物物理、生物化学或遗传学的方法来辅助蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)的研究,丰富了PPI数据,为研究蛋白互作提供了重要依据。每种检测方法在敏感性和特异性方面都有自身的优点和局限性。论文围绕几种经典的蛋白互作研究方法,包括表面等离子体共振、免疫共沉淀、谷胱甘肽转移酶沉淀试验和酵母双杂交等,概述其原理,分析其优点、局限性及在病毒学领域的最新应用,以期为研究人员选择合适的PPI研究技术提供参考。

结核分枝杆菌Rv1048c基因异源表达菌株的构建及其对小鼠巨噬细胞存活率的影响研究

目的对结核分枝杆菌H37Rv菌株中功能未知基因Rv1048c进行生物信息学分析,构建重组表达菌株MS_Rv1048c,并研究其对小鼠巨噬细胞存活率的影响。方法软件在线分析Rv1048c的氨基酸序列及其编码蛋白的基本性质,利用PCR扩增Rv1048c目的片段,构建重组质粒pMV261-Rv1048c,转入耻垢分枝杆菌,构建重组菌株MS_Rv1048c与空载菌MS_vec。分析该基因对菌株生长的影响;通过CCK-8、总胆固醇测定和油红(O)染色的方法,初步探究重组菌株感染巨噬细胞后对其活性的影响。结果Rv1048c基因全长1116 bp,蛋白由371个氨基酸构成,分子式是C_(1778)H_(2821)N_(521)O_(525)S_(10),预测该蛋白是一种定位在细胞外的含有多个磷酸化位点的、不稳定的亲水性蛋白。本试验首次成功构建未知基因Rv1048c的异源表达载体,生长曲线测定发现该基因使菌株生长缓慢,细胞实验发现基因增强了重组菌株对细胞的侵袭能力。结论Rv1048c可能具有结核分枝杆菌独有的生长特性,并降低在菌株侵染下的细胞的存活率。分析Rv1048c未知基因和构建异源表达菌株,有助于后续对结核分枝杆菌Rv1048c基因功能的探究,为进一步解析结核分枝杆菌的致病机制奠定了基础。

牛病毒性腹泻病毒蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)属于黄病毒科、瘟病毒属,同属病毒还有经典猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)以及羊边界病毒(Border disease virus,BDV)^([1])。该病毒为单股正链RNA病毒,基因组12.3 kb~12.5 kb,有囊膜,病毒粒子近似圆形,直径40 nm~60 nm,表面有明显的纤突,由一个大约编码4000个氨基酸的开放阅读框(Open reading frame,ORF)以及5’和3’两个非编码区(5’UTR和3’UTR)组成^([2])。BVDV 5’UTR序列高度保守约由380个核苷酸组成,其可通过自身结构的折叠形成特殊的二级结构,与宿主细胞内控制翻译起始和延伸的相关蛋白结合,从而通过与胞内相关因子的作用调控BVDV的转录及翻译;BVDV 3’UTR约由230个核苷酸组成,保守性也较高。有研究表明,BVDV 3’UTR和5’UTR共同控制病毒的翻译与复制^([3])。BVDV可分为BVDVⅠ型和BVDVⅡ型两种基因型,也可分为致细胞病变型(Cytopathic,Cp型)和非致细胞病变型(Non-cytopathic,Ncp型)两种生物型^([4-5])。共编码4个结构蛋白(囊膜蛋白Erns、E1、E2和核衣壳蛋白C)和7~8个非结构蛋白(N^(pro)、P7、NS23或NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)^([6])。

CRISPR/Cas系统及其在结核分枝杆菌研究中的应用

簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白(Cas)系统是一种针对入侵核酸的可遗传性原核适应性免疫系统。CRISPR/Cas系统可以产生高度特异性的基因双链断裂,并通过非同源末端连接(NHEJ)或者同源重组(HR)进行修复,如今已经成为许多生物方便有效的基因组编辑工具。结核分枝杆菌因其基因操作的复杂性,其基因组研究存在诸多困难,因此,CRISPR/Cas系统的出现对结核分枝杆菌的研究具有里程碑式意义。本文围绕CRISPR/Cas系统在结核分枝杆菌中的应用,综述了国内外最新的研究进展,为结核分枝杆菌研究方法的选择提供参考。

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白研究进展

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是引起牛病毒性腹泻-黏膜病(BVD-MD)的病原,感染后可造成牛腹泻、流产、繁殖障碍、持续感染等症状,且急性BVD致死率较高,对我国乃至世界养牛业造成了严重影响。目前,国内外对BVDV的研究主要聚焦在其结构蛋白方面,对于在BVDV复制、转录、翻译中起重要作用的非结构蛋白的研究较少,缺乏对BVDV非结构蛋白的功能进行系统的总结。论文对BVDV非结构蛋白功能方面近年来的研究进展进行了汇总,以期对今后牛病毒性腹泻黏膜病的致病机制、诊断及预防提供参考。

外泌体在动物病毒感染中作用研究进展

外泌体是最小的细胞外囊泡,作为一种重要的细胞间通讯载体,广泛存在于体液中。外泌体本身可以携带复杂的核酸和蛋白质,越来越多的研究表明其在病毒感染中起着重要作用。因此,病毒利用外泌体产生感染的作用机制受到了国内外学者的广泛关注。作者通过对近年来外泌体在病毒感染中相关作用的研究进行总结,以期为外泌体在抗病毒方面的研究提供参考。

感染期和休眠期结核分枝杆菌脂肪酸来源和利用差异的研究进展

结核病是严重威胁人畜健康的重大传染病之一,而作为病原的结核分枝杆菌在长期的化学药物治疗中已经出现广泛耐药的情况,不同耐药程度的结核分枝杆菌的差异研究也是一个难题。在严峻的形势下,寻找新的治疗方法已成为研究重点。脂肪酸作为结核分枝杆菌胞内存活的必需物质,同时也是细胞壁重要组成部分及毒力之一,其特性逐渐成为新的研究点之一。目前,并未见相关不同时期脂肪酸来源和利用差异的综合论述。因此,对处于感染期和休眠期的结核分枝杆菌的特点,以及不同时期的脂肪酸来源和利用的差异进行阐述,期待从其中找到新的结核病治疗靶点。

酵母双杂交筛选与牛病毒性腹泻病毒NS4B互作的宿主蛋白

为探究NS4B蛋白在牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染和复制过程中的作用,利用酵母双杂交(yeast two hybrid,Y2H)技术筛选与BVDV NS4B蛋白互作的宿主细胞蛋白质。以构建的BVDV NS4B重组质粒pGBKT7-NS4B作为诱饵质粒,采用酵母双杂交技术,与牛肾细胞MDBK-cDNA文库进行杂交。将获得的阳性克隆菌落经质粒抽提、测序分析和免疫共沉淀试验,确定可与NS4B互作的宿主细胞蛋白。结果表明,成功构建了诱饵质粒pGBKT7-NS4B,该质粒可在酵母菌中表达NS4B蛋白。采用酵母双杂交技术从牛肾细胞基因组文库获得14个阳性克隆,阳性克隆经测序、互补试验、免疫共沉淀验证后明确可与BVDV NS4B蛋白互作的宿主蛋白为SYNGR2和RABACI。上述研究为进一步研究BVDV NS4B蛋白在BVDV感染和复制中的作用机制奠定了理论基础。