甘草苷调节丙酮酸激酶M2改善过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞功能障碍

目的:探讨甘草苷(LIQ)调节丙酮酸激酶M2(PKM2)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)功能障碍的影响。方法:使用H_(2)O_(2)诱导HUVECs损伤模型,将细胞分为对照组(常规培养的HUVECs)、H_(2)O_(2)组(400μmol/L H_(2)O_(2)诱导的HUVECs模型)、H_(2)O_(2)+LIQ组(400μmol/L H_(2)O_(2)+1μmol/L LIQ)、H_(2)O_(2)+LIQ+紫草素(PKM2抑制剂)组(400μmol/L H_(2)O_(2)+1μmol/L LIQ+1μmol/L紫草素)。使用qRT-PCR检测PKM2 mRNA水平,荧光探针检测活性氧(ROS)水平,Western Blotting检测Nrf2、HO-1、PKM2、p-PKM2、Bcl-2、Bax及TNF-α、IL-1β蛋白表达变化。结果:与H_(2)O_(2)组相比,LIQ干预显著上调PKM2 mRNA水平、PKM2及p-PKM2的蛋白水平,抑制了ROS水平及TNF-α、IL-1β蛋白表达水平,Bcl-2/Bax比例显著增加。与H_(2)O_(2)+LIQ组相比,使用紫草素显著逆转了上述指标变化趋势(P<0.01)。结论:LIQ可上调PKM2表达,改善H_(2)O_(2)诱导的HUVECs细胞功能障碍。

甘草苷上调丙酮酸激酶M2表达促进人脐静脉内皮细胞损伤后血管新生

目的:探讨甘草苷(LIQ)上调丙酮酸激酶M2(PKM2)表达对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管新生的影响及可能机制。方法:使用H_(2)O_(2)诱导HUVECs损伤,将细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+LIQ组、H_(2)O_(2)+LIQ+Shikonin(PKM2抑制剂)组、H_(2)O_(2)+LIQ+Stattic(STAT3抑制剂)组。采用细胞划痕及管腔形成实验检测细胞迁移、成管能力,Western Blot检测血管新生关键蛋白VEGF、FGF2的表达,以及PKM2、磷酸化PKM2(p-PKM2)和PKM2下游激酶STAT3、p-STAT3的蛋白表达。结果:与H_(2)O_(2)组相比,LIQ处理显著提高了细胞迁移、成管能力,并增加VEGF、FGF2和PKM2、p-PKM2的表达水平;LIQ上调PKM2表达,显著增加了STAT3、p-STAT3表达水平。与H_(2)O_(2)+LIQ组相比,抑制PKM2或STAT3后细胞迁移、成管能力显著下降,VEGF、FGF2、STAT3及p-STAT3蛋白升高趋势被逆转。结论:LIQ可通过上调PKM2表达激活STAT3信号通路促进H_(2)O_(2)诱导的HUVECs血管新生。

miR-19b通过调节线粒体功能抑制H_(2)O_(2)诱导H9c2心肌细胞凋亡

目的:研究microRNA(miR)-19b抑制H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞凋亡并探讨其机制。方法:使用过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导H9c2心肌细胞损伤模型,将H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞分别转染miR-19b模拟物、抑制剂及其阴性对照。大鼠H9c2心肌细胞株分为6组,对照(Control)组,H_(2)O_(2)组,H_(2)O_(2)+miR-19b mimic阴性对照(NC)组,H_(2)O_(2)+miR-19b mimic组,H_(2)O_(2)+miR-19b inhibitor组,H_(2)O_(2)+miR-19b inhibitor NC组。采用活性氧(ROS)试剂盒检测细胞氧化应激水平,JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,试剂盒检测细胞色素c与线粒体共定位,Western Blot法检测Bax、Bcl-2和Cleaved caspase3和线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)及视神经萎缩蛋白1(OPA1)表达水平。结果:与Control组相比,H_(2)O_(2)组心肌细胞ROS(红色荧光强度)水平明显升高,MMP(JC-1绿红荧光强度比值)显著降低,细胞色素c(绿色荧光强度)释放明显增加,细胞促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Bax、Drp1蛋白的表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2、Mfn2、OPA1蛋白的表达均下调(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+miR-19b mimic NC组相比,miR-19b转染可显著减少ROS的生成,稳定MMP,抑制细胞色素c释放,降低Cleaved caspase-3、Bax、Drp1表达水平,Bcl-2、Mfn2、OPA1的表达显著上升(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+miR-19b inhibitor NC组相比,转染miR-19b抑制剂可阻断miR-19b对H_(2)O_(2)诱导H9c2心肌细胞的保护作用,表现为ROS生成增加,MMP降低,细胞色素c释放增加,Cleaved caspase-3、Bax、Drp1的表达增加,Bcl-2、Mfn2、OPA1的表达下降(P<0.05)。结论:miR-19b高表达可显著抑制H9c2细胞的氧化应激损伤,其可能与改善线粒体动力学、维持心肌细胞线粒体的动态稳定性以及调节凋亡相关蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。

蛋白质翻译后修饰与心肌重构的研究进展

心肌重构是指心脏为适应各种负荷增加,心脏在结构及功能上发生适应性代偿作用,负荷长期持续最终失代偿引起心力衰竭。蛋白质翻译后修饰(PTM),包括磷酸化、泛素化、糖基化等,在心肌重构中起着重要作用。在这篇综述中,我们总结了PTM在心血管疾病及心肌重构的发生发展中的作用。

T3通过激活PI3K/AKT信号通路减轻心肌细胞缺氧复氧损伤

目的:探讨三碘甲状腺原氨酸(T3)预处理对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤是否具有保护作用及其机制。方法:分离并培养1~3 d昆明乳鼠原代心肌细胞,随机分为5组:对照组(control组)、缺氧复氧组(H/R组)、H/R+T3组、H/R+T3+磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)抑制剂LY294002组(H/R+T3+LY294002组)、H/R+LY294002组。采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞技术检测心肌细胞凋亡水平,JC-1染色法检测心肌细胞线粒体膜电位(MMP),Western Blot法检测心肌细胞凋亡相关蛋白及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,H/R组心肌细胞凋亡率明显升高,MMP(JC-1绿红荧光强度比值)显著降低,细胞中促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Bax的表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(均P<0. 05)。与H/R组相比,T3可以显著降低心肌细胞凋亡率,稳定MMP,降低Cleaved caspase-3、Bax表达水平,还可使磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和Bcl-2的表达显著上升,差异有统计学意义(均P<0. 05)。与H/R+T3组相比,加用PI3K/AKT抑制剂LY294002可阻断T3对AKT的磷酸化作用,心肌细胞凋亡率明显升高,MMP降低,Cleaved caspase-3、Bax的表达增加,p-PI3K、p-AKT和Bcl-2的表达下降,差异有统计学意义(均P<0. 05)。与H/R组相比,H/R+LY294002组心肌细胞中凋亡率升高,MMP下降,凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Bax的表达量升高,细胞中pPI3K和p-AKT的表达量下降(均P<0. 05)。结论:T3预处理对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与稳定线粒体膜电位、激活PI3K/AKT信号通路以及调节凋亡相关蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关。