鼻胃管营养与空肠营养在神经重症患者中的疗效比较

目的探索鼻胃管营养和空肠营养对神经重症患者住院期间并发症及病死率的影响。方法回顾性分析2020年6月~2022年6月武汉市第四医院重症医学科收治的因神经重症住院患者的临床资料。根据肠内营养方式分为鼻胃管营养组和空肠营养组,采用倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)均衡两组基线资料,比较两组患者住院期间并发症、病死率、住院费用和平均住院时长的差异。结果PSM后,两组基线资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。鼻胃管营养组和空肠营养组的神经重症患者并发症发生率、病死率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。进一步单因素和多因素Logistic回归分析结果显示,年龄(OR=1.036,P=0.017),急性生理和慢性健康状况Ⅱ评分(APACHEⅡ评分,OR=1.147,P<0.001)和血尿素氮水平(OR=1.135,P=0.001)可能是影响该类患者预后的关键因素。结论肠内营养方式对于神经重症患者住院期间并发症发生率和病死率无显著影响,老年患者、较高的APACHEⅡ评分以及血尿素氮水平是神经重症患者住院期间死亡的独立危险因素。

Mfn2通过Ras-Raf-ERK1/2信号通路抑制ARDS肺纤维化及其机制

目的探讨线粒体融合蛋白(Mfn)2通过细胞外信号调节激酶(Ras-Raf-ERK)1/2信号通路抑制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),给予脂多糖(LPS)刺激建立ARDS细胞模型,构建腺病毒重组体Adv-Mfn21-264-GFP、Adv-Mfn2265-757-GFP、Adv-Mfn21-757-GFP,分别转染HELF,使其分别过表达Mfn2的N端GTP酶结构域(aa1-264)、C端跨膜区(aa265-757)及Mfn2的全长氨基酸残基(aa1-757),将细胞分为:Control组、Adv-vector组、LPS组、Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组;噻唑蓝(MTT)法观察各组HELF细胞增殖情况,并检测细胞内胶原蛋白的表达情况,Western印迹及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Ras信号通路Ras、Raf-1及ERK1/2的表达。结果Control组与Adv-vector组细胞增殖水平无明显差异(P>0.05);与Control组比较,LPS组第2、3、4、5、6天细胞增殖水平均明显增加(P<0.01);转染不同Mfn2基因片段后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组肺成纤维细胞增生受到抑制,细胞增殖水平明显下降(P<0.01);且LPS组较Control组细胞内胶原蛋白含量明显增加,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组较LPS组细胞内胶原蛋白含量明显减少(均P<0.01);Western印迹及RT-PCR检测结果显示,与Control组比较,LPS组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显增加,而转染不同Mfn2基因片段腺病毒后,与LPS组比较,Adv-Mfn21-264-GFP组、Adv-Mfn2265-757-GFP组、Adv-Mfn21-757-GFP组Ras、Raf-1、ERK1/2蛋白及基因表达明显下调(均P<0.05)。结论Mfn2可能通过N端GTP酶结构域、C端跨膜区调控Ras-Raf-ERK1/2信号通路影响成纤维细胞异常增殖抑制ARDS肺纤维化。

洋川芎内酯I通过调控Nrf2表达对脂多糖诱导的星形胶质细胞活化及功能的影响

目的探讨洋川芎内酯I对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞的活化及功能的影响及其机制。方法以不同浓度洋川芎内酯I(20、50、100μmol/L)及核因子E2相关因子2(Nrf2)特异性通道阻滞剂ML385(10μmol/L)干预LPS(1μg/mL)诱导的星形胶质细胞。采用CCK-8法检测星形胶质细胞活性,免疫荧光法检测细胞GFAP表达,Western blot法检测细胞神经胶质酸性蛋白(GFAP)、Nrf2、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,Grisse法检测培养上清液中一氧化氮(NO)水平,比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平。结果与对照组比较,LPS组星形胶质细胞活性升高(P<0.01),GFAP荧光强度增加,GFAP、iNOS蛋白表达及MDA、NO水平升高(P<0.01),Nrf2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.01);与LPS组比较,LPS+洋川芎内酯I各浓度组细胞活性降低(P<0.01),MDA、NO水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性升高(P<0.01),LPS+洋川芎内酯I 50μmol/L组GFAP荧光强度减弱,GFAP、iNOS蛋白表达降低(P<0.01),Nrf2蛋白表达升高(P<0.01),LPS+ML385组细胞活性升高(P<0.01),GFAP荧光强度增加,GFAP、iNOS蛋白表达及MDA、NO水平升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.05);与LPS+洋川芎内酯I组比较,LPS+洋川芎内酯I+ML385组细胞活性升高(P<0.01),GFAP荧光强度增加,GFAP、iNOS蛋白表达及MDA、NO水平升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2蛋白表达和SOD活性降低(P<0.01)。结论洋川芎内酯I可抑制LPS刺激引起的星形胶质细胞过度活化,上调Nrf2表达,减少星形胶质细胞氧化应激产物的分泌,从而起到调控星形胶质细胞功能的作用。

miR-17通过调控自噬影响TGF-β1诱导的肺纤维化

目的探讨miR-17对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的体外肺纤维化细胞模型自噬和纤维化的影响机制。方法重组人TGF-β1蛋白诱导人胚肺成纤维细胞HFL1,构建肺纤维化细胞模型,CCK-8检测细胞活力,ELISA试剂盒检测细胞上清中羟脯氨酸(Hyp)含量,鉴定造模成功与否。将细胞分成对照组、模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、miR-17inhibitor组和miR-17inhibitor+3-MA组。CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62和纤维化标志物α-SMA、CollagenⅠ蛋白的表达。结果TGF-β1诱导后HFL1细胞活力升高(P<0.01),细胞上清中Hyp含量升高(P<0.01),体外肺纤维化细胞模型构建成功。与对照组相比,模型组细胞活力显著升高(P<0.01),细胞凋亡率显著降低(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著升高(均P<0.01);与模型组相比,miR-17inhibitor组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(均P<0.01);与3-MA组相比,miR-17inhibitor+3-MA组细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.01),p62、α-SMA和CollagenⅠ蛋白表达水平显著降低(均P<0.01)。结论抑制miR-17可通过激活自噬抑制TGF-β1诱导的肺纤维化。

Cyclin D1、P27在小鼠ARDS肺纤维化中的表达及意义

目的 探讨细胞周期相关蛋白Cyclin D1、P27在脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤及肺纤维化中的动态表达规律及作用。方法 56只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为Control组、LPS组,每组28只,LPS组小鼠腹腔注射LPS(5 mg/kg, 0.2 mL/kg),Control组腹腔注射等量生理盐水,连续给药5 d。每组按时点分为4个亚组(T1、T3、T7、T14),分别于给药后1、3、7、14 d从两组中随机抽取7只,取肺组织,苏木精-伊红(HE)染色后在倒置显微镜下观察肺组织病理学改变;检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量及Ⅰ型胶原水平;采用Western blot及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测肺组织中Cyclin D1、P27蛋白及mRNA表达水平;并采用Spearman分析对Cyclin D1、P27 mRNA表达水平与小鼠肺纤维化程度进行相关分析。结果 HE染色可见,与Control组比较,LPS组第3、7、14 d肺部炎症逐步加重,伴弥漫性炎性细胞浸润及出血,肺部结构破坏明显,肺纤维化程度逐渐加重;第3、7、14 d肺组织纤维化评分明显增加(均P<0.01);LPS组第3、7、14 d HYP含量及Ⅰ型胶原水平较Control组显著增加(均P<0.01)。与Control组比较,LPS组3、7、14 d肺组织中Cyclin D1蛋白及mRNA的表达水平明显升高,而P27蛋白及mRNA的表达明显降低(均P<0.05);LPS组Cyclin D1 mRNA表达水平与肺纤维化程度呈正相关(r=0.930,P<0.01),P27 mRNA表达与纤维化评分呈负相关(r=-0.881,P<0.01)。结论 脂多糖致小鼠急性肺损伤过程中细胞周期相关蛋白Cyclin D1、P27异常表达,其表达水平与肺纤维化程度相关。

替米沙坦对高糖刺激下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体的影响及其机制探讨

目的观察替米沙坦对高糖刺激下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体1/2(AdipoR1/2)表达的影响并探讨其机制。方法体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E),同步化后分为6组:正常对照组(5. 5 mmol/L葡萄糖培养基培养,24h),高渗对照组(5. 5 mmol/L葡萄糖培养基+19. 5 mmol/L甘露醇处理,24h),高糖组(25 mmol/L葡萄糖培养基培养,分别作用12、24、48、72h),高糖+替米沙坦组[25 mmol/L葡萄糖+(1、10、100 nmol/L)替米沙坦处理,刺激24h],高糖+替米沙坦+GW9662组(预先用5 000 nmol/L PPARγ阻断剂GW9662处理30 min,再加入25 mmol/L葡萄糖和100 nmol/L替米沙坦刺激24h),高糖+GW9662组(预先用5 000nmol/L PPARγ阻断剂GW9662处理30 min,再用25 mmol/L葡萄糖刺激24h)。采用RT-PCR分别检测AdipoR1/2和PPAR-γmRNA的表达,采用Western blot法检测AdipoR1/2和PPAR-γ蛋白表达。结果在高糖刺激情况下,随着刺激时间的延长,AdipoR1/2和PPAR-γmRNA的表达均有先增高后降低的趋势,高糖刺激24h时升高达到最高点,和正常对照组相比有统计学意义(P <0. 05);替米沙坦可明显提高AdipoR1/2和PPAR-γ的mRNA和蛋白表达(P <0. 05),其增强作用均在替米沙坦浓度为100 nmol/L时达到最大值(P <0. 05),在替米沙坦处理的同时加入选择性不可逆性PPAR-γ阻断剂GW9662可显著降低AdipoR1/2和PPAR-γ的mRNA和蛋白表达(P <0. 05)。结论高糖环境下,替米沙坦可促进大鼠近端肾小管上皮细胞AdipoR1/2的表达,其作用可能是通过激活PPAR-γ途径来介导的。

PTP1B基因缺失在脓毒症胰岛素抵抗大鼠中的作用及可能机制

目的探讨敲除蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)基因对脓毒症所致胰岛素抵抗大鼠的干预作用及可能机制。方法将20只敲除PTP1B基因的大鼠分为PTP1B(-/-)假手术组和PTP1B(-/-)脓毒症组各10只,将20只野生型大鼠分为野生型假手术组和野生型脓毒症组各10只。PTP1B(-/-)脓毒症组和野生型脓毒症组均建立脓毒症胰岛素抵抗大鼠模型,其他两组仅进行假手术。于术后12 h检测各组大鼠的稳态模型评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数,于手术后24 h测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、肝脏组织蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平[磷酸化Akt(p-Akt)/Akt]以及葡萄糖转运蛋白2(GLUT-2)向肝细胞膜转移情况。结果野生型脓毒症组、PTP1B(-/-)脓毒症组的HOMA-IR指数、血清TNF-α水平分别高于野生型假手术组、PTP1B(-/-)假手术组,而p-Akt/Akt和GLUT-2在肝细胞膜中的表达分别低于野生型假手术组、PTP1B(-/-)假手术组(均P<0.05)。PTP1B(-/-)脓毒症组大鼠的HOMA-IR指数、血清TNF-α水平低于野生型脓毒症组,而Akt磷酸化水平以及GLUT-2在肝细胞膜中的表达均高于野生型脓毒症组(均P<0.05)。结论在大鼠中敲除PTP1B基因可以改善脓毒症所致胰岛素抵抗,其机制可能是减轻细胞外的炎症因子水平从而缓解对胰岛素受体的竞争效应,以及改变细胞内的胰岛素信号转导通路。

过表达线粒体融合蛋白2对ARDS肺纤维化的抑制作用及其机制研究

目的探讨过表达线粒体融合蛋白2(Mfn2)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺纤维化的抑制作用及其机制。方法离体培养人胚肺成纤维细胞(HELF),待细胞生长贴壁率达80%以上进行消化传代,选取状态良好的细胞进行实验。给予5 mg/L脂多糖(LPS)刺激制备ARDS细胞模型(LPS组);并将75 mol/L携带线粒体融合蛋白2腺病毒载体(Adv-Mfn2)转染到HELF中(Adv-Mfn2+LPS组);同时设空白对照组(完全培养基培养)和空载腺病毒载体(Adv-vector)+LPS组作为对照。采用磺基罗丹明B(SRB)法观察各组细胞培养0、12、24、36、48 h的增殖情况;Hoechst 33342染色后,共聚焦显微镜下观察细胞形态学改变;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测抗凋亡基因Bcl-2和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Bcl-2和caspase-3的基因表达。结果经LPS刺激12~48 h,LPS组细胞增殖率随时间延长而逐渐增加,而且明显高于空白对照组〔12 h:(10.75±1.51)%比(0.73±1.22)%,24 h:(20.09±1.71)%比(1.15±1.12)%,36 h:(20.58±1.55)%比(1.20±1.12)%,48 h:(21.30±1.51)%比(1.23±1.10)%,均P<0.01〕;LPS组与Adv-vector+LPS组各时间点细胞增殖率比较差异则均无统计学意义;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后12、24、36、48 h的细胞增殖率分别为(8.93±1.14)%、(10.52±1.24)%、(10.72±1.30)%、(10.91±1.20)%,均较LPS组明显降低(均P<0.05)。共聚焦显微镜下显示,空白对照组细胞核大小不一,部分细胞核碎裂或核固缩,形成凋亡小体;LPS组和Adv-vector+LPS组细胞核呈圆形或椭圆形,大小均匀,仅出现个别凋亡细胞;而Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2后,凋亡细胞较LPS组增多。Western blotting和RT-qPCR检测结果显示,给予LPS刺激后,LPS组Bcl-2表达较空白对照组明显上调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.68±0.01比0.29±0.01,Bcl-2 mRNA(2-ΔΔCT):2.23±0.34比1.00±0.00,均P<0.01〕,而caspase-3的表达较空白对照组明显下调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.37±0.02比0.66±0.02,caspase-3 mRNA(2-ΔΔCT):0.31±0.05比1.00±0.00,均P<0.01〕;与LPS组比较,Adv-Mfn2+LPS组过表达Mfn2蛋白后,Bcl-2表达明显下调〔Bcl-2蛋白(Bcl-2/GAPDH):0.46±0.01比0.68±0.01,Bcl-2 mRNA(2-ΔΔCT):1.45±0.14比2.23±0.34,均P<0.01〕,caspase-3表达明显上调〔caspase-3蛋白(caspase-3/GAPDH):0.54±0.02比0.37±0.02,caspase-3 mRNA(2-ΔΔCT):0.88±0.10比0.31±0.05,均P<0.01〕。结论Mfn2蛋白参与ARDS肺纤维化,可能与线粒体介导的抑制细胞增殖途径有关。

线粒体融合蛋白2在急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化中的表达

目的:探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)在脂多糖(LPS)致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化过程中的表达规律。方法:48只雄性SD大鼠随机分为Control组、LPS组,每组根据给药后的时间点(1 d、3 d、7 d、14 d)分为4个亚组(T1、T3、T7、T14)。取大鼠肺组织,HE染色光镜下观察肺组织病理变化,并检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量;肺组织切片常规免疫组化染色,检测肺组织中Mfn2的表达;Western Blot及Real time-PCR分别检测Mfn2蛋白、mRNA的表达情况。结果:HE染色显微镜下观察可见LPS组大鼠肺组织出现肺间质纤维化,肺泡结构紊乱;肺组织HYP含量测定显示,LPS组造模后3 d、7 d、14 d HYP含量与Control组比较明显增加(均P<0.05)。免疫组化显示,Control组肺组织中存在Mfn2表达,大鼠气管内滴注LPS 3 d后肺组织Mfn2表达即开始减少;Western Blot及RTPCR检测结果显示,与Control组比较,LPS组造模后3 d、7 d、14 d肺组织中Mfn2蛋白及基因表达均明显下调(均P<0.05)。结论:气管内滴注LPS可诱导大鼠出现急性肺损伤及肺纤维化,在损伤的肺组织中Mfn2表达明显减少,提示Mfn2与内毒素所致大鼠急性肺损伤及肺纤维化密切相关。

维持性血液透析患者脂联素与左室肥厚的相关性

目的:探讨血清脂联素(APN)、高分子量脂联素(HMW-APN)、高分子量脂联素/脂联素(HMW-APN/APN)在维持性血液透析(MHD)患者中的含量变化及其与左室肥厚的相关性。方法:收集健康对照组30例,慢性肾衰竭未透析患者41例(A组),非糖尿病肾病的MHD患者(B组)31例,糖尿病肾病的MHD患者(C组)33例,抽取静脉血检测;完成超声心动图检查,测量左室质量指数(LVMI)。结果:MHD患者及A组APN、HMW-APN、HMW-APN/APN水平及LVMI均高于健康对照组(P<0.05),MHD患者HMW-APN/APN低于A组(P<0.05),B组HMW-APN/APN高于C组,但差异无统计学意义。行相关性分析发现,MHD患者HMW-APN/APN与体质量指数、甘油三酯、C反应蛋白、LVMI成负相关,与空腹血糖无明显相关性。结论:MHD患者HMW-APN/APN与左室肥厚存在明显相关性,有助于预测心血管事件的发生发展。

呼吸康复训练治疗出血性脑卒中相关性肺炎的疗效观察

目的观察呼吸康复训练治疗重症监护病房(ICU)内出血性脑卒中相关性肺炎(SAP)的临床疗效。方法采用随机数字表法将60例自发性脑出血所致SAP患者分为观察组及对照组,每组30例。2组患者均给予控制血压、减轻脑水肿、抗感染、营养支持及吞咽功能训练等干预;观察组患者在上述基础上辅以呼吸康复训练。于治疗前、治疗7d及14d时检测2组患者白细胞计数(WBC)、血降钙素原(PCT)水平及肺功能;并于治疗7d及14d时评定2组患者临床疗效;同时记录对比2组患者住院期间抗生素持续使用时间、ICU住院时间及病死率等。结果治疗7d时观察组治疗有效率(83.3%)、肺功能数据、WBC[(9.25±2.54)×10^9个·L^-1]及PCT[(0.52±0.36)ng/ml]水平均明显优于对照组(均P<0.05);住院期间观察组患者抗生素持续使用时间[(10.3±2.9)d]、ICU住院时间[(10.4±3.2)d]均较对照组明显缩短(P<0.05);2组患者入院28d期间死亡例数组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在常规干预基础上辅以呼吸康复训练能明显提高脑出血所致SAP患者临床疗效,缩短抗生素疗程及ICU住院时间,该疗法值得临床推广、应用。

感冒药加量、多种混吃风险大

今年45岁的张先生体型较胖,因感冒发烧后在药店买了三种感冒退烧药。因想好得更快,再加上自己较胖,便自行将口服剂量加倍。原本只能一次吃两颗的感冒药,张先生每次吃4颗。在吃过西药后不到两小时,又加服一种治感冒的中成药。就这么吃了三天。第四天早晨起床时,张先生突然意识不清,家人立即拨打120将他送到了医院。