槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用MTT比色法检测不同终浓度的槲皮素对MGC803细胞增殖的影响及其细胞毒活性。应用TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)染色法检测槲皮素诱导MGC803细胞凋亡的作用。用免疫组化法测定P16、P53和Cmyc的表达率。结果:在40～100μmol/L范围内,槲皮素可显著抑制MGC803细胞增殖(P<0.01),且呈剂量、时间依赖性。TUNEL染色显示,槲皮素诱导48h后,MGC803细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化检测表明,用药组P53及Cmyc蛋白的表达下降,P16蛋白的表达率增强,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:槲皮素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调P53及Cmyc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关。

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。

槲皮素对胃癌MGC-803细胞VEGF-C及VEGFR-3表达水平的影响

目的:研究槲皮素抑制胃癌MGC-803细胞淋巴转移的作用。方法:实验分为对照组和40μmol/L槲皮素处理组两组。采用免疫组化和RT-PCR方法,检测槲皮素对VEGF-C及其受体VEGFR-3表达水平的作用。结果:槲皮素处理48h后VEGF-C和VEGFR-3表达水平均有下调,与对照组相比有统计学意义(P<0.01)。结论:槲皮素可下调胃癌MGC-803细胞VEGF-C、VEGFR-3的表达。

不同酶切体系对胶回收纯化DNA浓度的影响

目的通过建立不同的酶切体系,找寻酶切效果好、胶回收试剂盒纯化DNA得率高的实验设计。方法使用XhoⅠ单酶切重组质粒pcDNA3-P2X4,酶切体系的体积分别为:150μl、160μl、170μl、180μl;酶切体系组成为:dddH2O(补足体积)、BufferR(应用浓度是酶切体积的10%)、质粒DNA(无论所得质粒浓度如何,琼脂糖凝胶电泳胶回收的DNA上样量统一为23μg),XhoⅠ10μl(6μl、4μl两次加入);反应温度为:37℃;酶切的时间为2～3h。结果酶切体系越大,所需要的酶切时间越短、酶切效果越好、酶切条带越接近Marker标准条带(通过电泳拍照观察所得),但是胶回收纯化后DNA的浓度却越低:150μl体系DNA的浓度=308.96±8.71μg/ml,160μl体系DNA的浓度=286.62±8.37μg/ml,170μl体系DNA的浓度=245.80±15.64μg/ml,180μl体系DNA的浓度=198.00±16.54μg/ml(方差分析,P<0.05,n=5)。结论将酶切的体系放大,杂质将相对稀释,不需增加酶的用量就能取得较好的酶切效果;提取质粒的浓度和纯度也决定着酶切效果。

胃癌的基因治疗进展

基因治疗是近年来治疗肿瘤的新方法,因治疗策略的不同而发展为2个分支:一是分子肿瘤治疗,包括肿瘤抑制基因治疗、自杀基因治疗、反义基因治疗、抑制肿瘤血管形成的治疗、免疫基因治疗;二是virotherapy。简要综述了肿瘤基因治疗的各种方法及其在胃癌治疗中的应用和发展前景。

光损伤后人视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子A及其受体的表达

目的观察光损伤后人视网膜色素上皮（RPE）细胞血管内皮生长因子A（VEGF-A）及其受体可溶性fm样酪氨酸激酶受体（sFh-1）和包含激酶植入区域受体（KDR）的表达。方法体外培养人RPE细胞，取第8～12代生长良好的传代细胞用于实验。将同代细胞随机分为对照组和光损伤组。以18w冷白色荧光灯作为光源，自制光照器。采用双层高压消毒锡纸包裹对照组细胞，与光损伤组细胞一同置于自制光照器下，控制光照强度在（2200±300）Lux，持续光照12h建立光损伤模型。于光损伤后0、6、12、24h终止培养，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测VEGF-A、sFlt-1及KDR的mRNA及蛋白表达。结果光损伤组VEGF—AmRNA及蛋白表达在光损伤后6h时明显增加，12h时达到高峰，明显高于对照组（t=2．74，2．93；P％0．05），随后降低。sFlt-1的mRNA及蛋白表达在光损伤后12h达到高峰，明显高于对照组（t=4．32，P〈0．01）；24h时明显低于对照组（t=2．41，P〈0．05）。KDR的mRNA及蛋白表达在光损伤后6、12h时较对照组无明显变化（t=1．84，P〉0．05），24h时高于对照组（t=2．89，P％0．05）。结论光损伤后6、12h时，RPE细胞VEGF-A及sFh-1的表达明显增高，KDR的表达相对稳定。光损伤后24h时，RPE细胞VEGF-A及sFlt-1的表达降低，KDR的表达增高。