LRP15基因的表达谱分析及其在白血病细胞中的表达

为检测LRP15基因在肿瘤细胞以及处于不同发育阶段造血细胞的表达状况 ,探讨其在肿瘤发生、发展以及在白血病分型预后中可能具有的作用 ,利用NCBI提供的SAGE文库及NCI提供的正常组织及肿瘤细胞基因表达数据库 ,分析比较了LRP15基因在多种肿瘤组织、细胞系和正常组织中的表达谱 ;采用RT PCR方法检测了该基因在正常血细胞及原代白血病细胞中的表达状况。结果显示 ,LRP15在人类多种正常组织及肿瘤细胞中有表达 ;在幼稚细胞中表达阳性率高于成熟细胞 (P <0 .0 1) ,在急性髓细胞白血病中M1、M2 和M3 表达的阳性率高于其它亚型 (P <0 .0 1) ;难治组LRP15表达的阳性率有高于初治组的趋势。结论 ,LRP15基因与急性白血病及其它多种肿瘤的发生、发展密切相关 ,对急性白血病的临床分型具有重要的意义 ,可能对判断急性白血病的预后具有一定价值。

LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系

为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动 子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态, 并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态.并诱导该基 因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区 高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一 定的价值。

新的白血病相关基因LRP15真核表达载体构建及在K562细胞中的表达

目的 构建LRP15基因开放阅读框架(ORF)序列的真核表达载体,并观察其在K562细胞中的表达情况。方法 采用RT-PCR方法自1例白血病患者中克隆LRP15cDNA片段,将目的基因LRP1定克隆入pGEM-T载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定。将鉴定过的DNA片段插入真核质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA-LRP15。脂质体介导法将其转染K562细胞,72h以RT-PCR方法检测转染细胞中LRP15基因的表达情况。结果 酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人LRP15基因ORF序列;转染实验表明LRP15基因能在K562细胞中表达。结论 成功构建LRP15基因真核表达载体,并在K562细胞中获得表达,为进一步研究LRP15基因的功能奠定了基础。

更昔洛韦对TK基因转染的淋巴瘤细胞的抑制作用

目的 探讨GCV对TK基因转染的淋巴瘤细胞生长的抑制作用。方法 利用缺陷型逆转录病毒介导的TK基因(RV-HSV-TK)转染淋巴瘤细胞,细胞增殖实验(MTT法),研究GCV对转染TK基因阳性淋巴瘤细胞株杀伤作用。结果 转染了TK基因的淋巴瘤细胞的生长曲线与未转染TK基因的细胞无差异。0.1～50μg/ml的GCV对转染阳性细胞有明显的毒性作用,杀伤效应与时间成正比。Hut-tk细胞对Hut细胞具有旁观者效应。结论RV-HSV-TK系统对淋巴瘤细胞有较高的转染效率,转染了TK基因的淋巴瘤细胞对GCV敏感。

新基因LRP15参与紫外线诱导的DNA损伤的修复作用

目的探讨LRP15基因在K562细胞中对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用,以进一步研究该基因的功能。方法利用真核表达质粒pcDNA3.1构建LRP15基因开放阅读框架(ORF)序列的正义及反义重组质粒;两种质粒经阳性脂质体介导法分别转染K562细胞,G418筛选阳性克隆;采用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术观察两组细胞对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用的差异。结果PCR鉴定证实,正义及反义重组质粒中LRP15基因ORF序列均按预定方向正确插入;SCGE实验表明,经紫外线照射后两组细胞的DNA基础损伤无明显差异(P=0.156)。但经45及90min修复后实验组细胞的DNA迁移长度明显小于对照细胞(P<0.001)。结论成功构建LRP15基因的正义及反义真核表达质粒;LRP15基因对紫外线诱导的DNA损伤具有修复作用,可能是一个DNA修复基因。