乙型肝炎病毒与肝细胞癌关系的分子病理研究进展

乙型肝炎病毒与肝细胞癌关系的分子病理研究进展程继东，梁英锐流行病学资料早已证实乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的持续感染与肝细胞癌的发生有密切关系［１，２］。在实验研究方面，虽然已有许多人做了大量的工作，但迄今尚无直接的实验证据。ＨＢＶ与肝癌关系的研究已成为肿...

NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用 。

人乳头状瘤病毒18E6E7和TPA协同诱发人胚食管上皮细胞恶性转化的研究

为了研究病毒和促癌物在食管癌形成中的作用，用带有人乳头状瘤病毒１８型Ｅ６Ｅ７片段的载体腺病毒（简称ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ）感染人胚食管上皮细胞，然后加ＴＰＡ协同作用，观察细胞转化。将人胚食管切碎，与ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７ＡＡＶ同孵育２小时，在加有１０％小牛血清的１９９培养液培养和传代，形成永生化细胞株，即人胚食管上皮细胞汕头株（ＳＨＥＥ）。实验分两组：一组ＳＨＥＥ细胞在传代至第５和１３代时，两次在培养基中加入ＴＰＡ（１２Ｏｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ１３ａｃｅｔａｔｅ）５ｎｇ／ｍｌ，每次诱导２周，所获得的细胞株称为人胚食管上皮癌细胞汕头株１号（ＳＨＥＥＣ１）；另一组ＳＨＥＥ细胞培养条件相同，未加ＴＰＡ，为对照组。细胞转化的形态表型由光学显微镜、电子显微镜和荧光显微镜检查；ＤＮＡ含量和细胞周期用流式细胞仪检测；用３５ｍｍ软琼脂培养皿接种１０３细胞（第２０代），每组５碟，计算集落形成率；裸鼠皮下接种１０６细胞检测致瘤性；用荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）和ＰＣＲ检测ＨＰＶ１８Ｅ６Ｅ７。结果表明：细胞ＤＮＡ合成和增殖指数（ＰＩｘ），ＳＨＥＥＣ１组（４５％）高于ＳＨＥＥ组（３４％）；高倍体细胞数，ＳＨＥ?

广东南澳岛恶性肿瘤发病及居民饮食习惯的现况调查

[目的]分析广东省潮汕地区南澳岛1995-2003年恶性肿瘤发病状况及其变化趋势和居民饮食习惯特点。[方法]根据南澳岛肿瘤发病登记系统的资料,收集核实数据,建立数据库,计算肿瘤粗发病率、标化发病率,并分析肿瘤性别分布。用SPSS 10.0作统计处理,应用x2检验作时间趋势分析。另外,通过问卷调查,了解南澳岛土著居民(678名) 和梅州客家人群(435名)的饮食和生活习惯,并且委托中国疾病控制中心检测了两地人群毛发样本(随机抽取南澳岛居民93名,梅州客家对照人群25名)22种微量元素含量(ICP法)。[结果]1995-2003年,南澳岛恶性肿瘤发病1 286例, 其中男性874例,女性412例,年平均粗发病率为203.11/10万。主要恶性肿瘤粗发病率顺序为(1/10万):食管癌(71.07), 贲门癌(34.59),肝癌(26.38),肺癌(24.95),胃癌(16.90),鼻咽癌(4.74),乳腺癌(3.79),大肠癌(2.68),膀胱癌(2.05), 胰腺癌(1.74)。在此9年间,恶性肿瘤发病率表现出上升趋势,其中以肝癌、肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、大肠癌发病率上升比较显著;食管癌、贲门癌发病率仍处于高发状态,食管癌发病450人,贲门癌219人,两者合计占恶性肿瘤发病总人数的52.02%,居首位。南澳人群中平均每月烟、酒消耗量均大干梅州客家人群,同时毛发中铜(Cu)、镁(Mg)、钠(Na)、锌(Zn)、钾(K)、铅(Ph)、锶(Sr)、钴(Co)、铬(Cr)、镍(Ni)、汞(Hg)等微量元素含量也明显高于梅州客家人群。[结论] 1995-2003年南澳岛恶性肿瘤仍呈高发状态,表明在南澳岛可能存在较稳定的致癌因素,生活及环境因素可能对肿瘤发病有一定影响。

NGAL的结构与功能研究进展

NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin）是一种新的lipocalin,其结构与功能的研究进展为人瞩目。目前认为 ＮＧＡＬ具有运输疏水性小分子，调节明胶酶B(gelatinase B或matrixmetalloproteinase-9,ＭＭＰ－９）活性等功能，并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展，特别是肿瘤的浸润转移等过程。最近，ＮＧＡＬ蛋白的空间结构已被研究清楚。这对于促进ＮＧＡＬ生物学作用或功能的研究，特别是对其新的生物学作用或功能的探索，比如与肿瘤的关系（ＮＧＡＬ可能是一种新的癌基因或促癌基因）将具有十分重要的意义。对此作者进行了综合评述。

冻融人树突状细胞基因疫苗体外抗肿瘤免疫效应

目的:观察人外周血和人脐血来源的冻融树突状细胞(dendritic cell,DC)基因疫苗的形态、表型及体外诱导的CTL抗肿瘤活性。方法:细胞因子扩增人外周血和脐血DC,分别将EBV-LMP2、HPV16E6基因转染2种来源的冻融DC制备疫苗。动态形态学观察和流式细胞术检测疫苗表面分子表达,体外诱导并测定CTL活性。结果:人外周血和脐血冻融DC疫苗均高表达CD80、CD86和CD83,低表达CD14,高表达CD1a,体外均能诱导高效的CTL活性(P=0·001),并与新鲜DC疫苗差异无统计学意义,P=0·138。结论:负载肿瘤相关病毒抗原基因的冻融DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征,且能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答。

肿瘤相关蛋白NGAL的生物学特征

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是一种肿瘤相关的糖蛋白。在乳腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌和食管癌等许多恶性肿瘤中异常表达,与癌细胞的侵袭、运动和转移等生物学行为密切相关。本文将对其生物学功能及其与肿瘤发生的关系进行阐述。

miR-21与肿瘤

MicroRNA(miRNA)是一类具有调控功能的小分子非编码RNA,主要参与基因转录后水平的调控,对生物体的生长、发育、衰老和死亡等生命过程都有着重要的作用。近年来,大量研究结果表明,许多miRNA可作为原癌基因或者抑癌基因,在肿瘤的发生和发展中扮演着重要的角色,其中miR_21最受人重视。大量实验证明在多种肿瘤细胞中,miR_21的表达均出现显著异常,揭示miR_21作为一个致癌miRNA,在多种肿瘤的发生和发展中起着重要的作用。本文综述了miR_21在肿瘤细胞中调控的靶基因及其功能,以及miR_21自身的表达调控机制研究进展,这将为miR_21在肿瘤的诊断、治疗和预后判断中的应用提供重要资料。

同位素亲和标签(ICAT)系列技术及其在蛋白质组研究中的应用

近年来 ,大量的研究结果表明双向电泳技术由于不能对分子量极高或极低、等电点极酸或极碱和含量低的蛋白质以及膜蛋白质等进行有效分离 ,因此已不能适应目前蛋白质组研究深入发展的需要。同位素亲和标签(isotope-codedaffinitytag,ICAT)技术是最近发展起来的一种用于蛋白质分离分析的新技术 ,由于采用了一种全新的化学试剂 -ICAT试剂 ,同时结合了液相色谱和串联质谱 ,因此不但明显弥补了双向电泳技术的上述不足 ,同时还使高通量、自动化蛋白质组分析更趋简单、准确和快速 ,代表着目前蛋白质组分析技术的主要发展方向。最近针对磷酸化蛋白分析以及与固相技术相结合ICAT技术本身又取得了许多有意义的进展 ,已形成ICAT系列技术。

两种食管鳞癌细胞系增殖和侵袭能力的比较研究

目的:研究两种来源不同的食管鳞癌细胞系EC109和KYSE510分裂增殖能力和侵袭能力的差异。方法:利用MTT实验和侵袭实验,在体外分别检测EC109和KYSE510细胞的分裂增殖能力和侵袭能力;采用裸鼠皮下接种实验和爪垫皮下接种淋巴结转移模型,比较两种细胞在体内的成瘤能力、局部侵袭能力和区域淋巴结转移能力的差异;免疫印迹检测上皮-间充质细胞转换标志蛋白E-cadherin、γ-cadherin和Vimentin在两种细胞中的表达水平。结果:体外实验表明,EC109细胞的分裂增殖和侵袭能力均明显较KYSE510细胞的强(P<0.05);皮下接种和爪垫皮下接种淋巴结转移实验显示EC109细胞的成瘤能力、局部侵袭能力和淋巴结转移能力均较KYSE510细胞的高;免疫印迹检测发现,E-cadherin和γ-cadherin在EC109细胞中的表达水平较KYSE510细胞中的表达低,而Vimentin在EC109细胞中的表达则较KYSE510细胞中的表达高,提示EC109细胞发生上皮-间充质细胞转换的程度较KYSE510的高。结论:EC109细胞的增殖和侵袭能力均较KYSE510细胞的强,上皮-间充质细胞转换可能是导致这种差异的原因之一。

人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤模型建立及其应用研究

将人食管癌手术标本直接移植于裸小鼠，建立了人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤（Eca910709），其光镜和电镜形态与原发瘤相似。移植瘤中检测到人Alu序列，证明其来源于人体。应用Eca910709，用平阳霉素（BLMA5）对其进行治疗，按15mg／kg腹腔注射给药，经重复实验，抑瘤率为58％-70％（P＜0．01），说明BLMA5对Eca910709有明显的抑瘤作用。经三个疗程治疗，Eca910709即对BLMA5产生耐药，表现在抑瘤从70％（P＜0．01）递减为34％（P＜0．05）和6％（P＞0.05）。给药剂量增加至30mg/kg，BLMA5对已耐药的Eca910709再次显示一定的抑瘤作用（抑瘤率为44％，P＜0．01）。

核基质及其研究方法

真核细胞核内除染色质、核膜与核仁外,还有一个以非组蛋白为主的核基质三维网架结构体系。近年来,核基质的研究在医学、分子生物学等方面取得了许多突破性的进展,具有广阔的前景,已引起人们的广泛关注。本文综述了目前世界上常用的核基质制备方法,全面系统地阐述了它们的优缺点,这将为有关核基质的研究提供借鉴。

NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究

以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152～- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子.

乙型肝炎病毒和黄曲霉素协同在裸鼠体内诱发人胎肝细胞癌变的研究

为了研究乙型肝炎 (乙肝 )病毒 (HBV)和黄曲霉素 (AFB1)在肝癌发生过程中的作用 ,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下 ,以后每周注射AFB1,能诱发裸鼠成瘤。实验分为 4组 :A组为HBV +AFB1组 ,即用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,同时注射ABF1;B组为HBV+ 组 ,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,不注射AFB1;C组为AFB1+ 组 ,用不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,注射AFB1;D组为对照组 ,用不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,也不注射AFB1。结果 :A组成瘤率为 2 7 3% (6 / 2 2 ) ,B组 0 % ,C组 13 3%(2 / 15 ) ,D组 0 % ,所有肿瘤病理诊断均为肝细胞癌。用EMA单抗检测 ,证实为人来源细胞。PCR和DNA狭缝印迹显示 :HBVX和HBVS基因阳性 ,证明HBV基因已到瘤细胞中。实验首次用人乙肝病毒协同AFB1在裸鼠体内诱发成功人肝细胞癌 ,证明了HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用。同时 。

鼻咽假复层纤毛柱状上皮核的形态定量学研究

作者采用图象分析仪检测88例鼻咽小淋巴细胞及其中21例鼻咽假复层纤毛柱状上皮、8例异型增生柱状上皮胞核的多个形态定量学参数。经分析比较后认为:(1)假复层纤毛柱状上皮胞核的面积较小淋巴细胞胞核增大一倍左右,而核形状较偏离圆形;(2)假复层纤毛柱状上皮中、表层胞核与基层核比较,其核面积、核圆度增大,而核椭圆形状因子、核规则形状因子没有差异,即各层胞核形状基本一致,各层中大多数胞核(80％以上)的长径与基底膜垂直。上述形态定量学特征为研究发生于鼻咽假复层纤毛柱状上皮的癌前病变提供了正常客观指标。

肝癌细胞H_(22)与树突状细胞杂交瘤苗的实验研究

目的:将肝癌H22细胞与树突状细胞(DC)相融合,研制杂交瘤苗,并观察瘤苗的生长特性、致瘤性及免疫活性.方法:将DC与肝癌H22细胞融合制备H22-DC融合细胞,磁式分选器分选融合细胞;观察融合细胞的生长特性和体内致瘤性;从Balb/C小鼠皮下接种融合细胞,实验设肿瘤等三组对照,每组各5只小鼠.MTT比色法检测小鼠脾CTL活性.结果:融合细胞在体外能分裂增生,但明显低于肿瘤细胞,无体内致瘤陛;活融合细胞免疫的小鼠,其脾CTL杀伤H22细胞的活性明显高于对照组小鼠(P<0.01).结论:融合细胞能诱导出特异性的CTL活性,可望成为肝癌免疫治疗的新途径.

肿瘤自身抗体在食管癌诊断中的作用

常用的食管癌血清标志对于食管癌的早期诊断敏感性低、特异性差。近5年来,在食管癌研究领域,有关肿瘤相关抗原自身抗体方面的研究取得了较大进展,为最终找到有助于食管癌早期诊断的有效生物标志提供了新的途径。为此,本文在介绍肿瘤自身抗体产生的分子机制的基础上,就自身抗体在食管癌早期诊断中的应用情况以及对自身抗体的鉴定方法也进行了综述。

晚期转移性乳腺癌血浆MMP-2、MMP-9检测与化疗疗效相关性研究

目的 探讨血浆基质金属蛋白酶活性与晚期转移性乳腺癌化疗疗效的相关性。方法 选择经病理或细胞学确诊的晚期转移性乳腺癌患者,分别于化疗前后收集患者血浆(1.8mL空腹全血加0.2%mL枸橼酸钠),离心后放置于-70℃冰箱冻存备查。用酶谱法测定肿瘤患者血浆MMP-2及MMP-9的活性,用凝胶图象处理系统分析;以白色条带的净光密度值相对定量样品中酶的活性。结果 MMP-2、MMP-9在晚期乳腺癌治疗前后的活性水平测定具有统计学意义。(P<0.05)。结论 晚期乳腺癌患者血浆MMP-2、MMP-9活性与病情进展和疗效有一定相关性,而检测方法简单经济,具有一定的临床指导价值。

幽门螺杆菌与胃癌关系的临床研究

作者对82例胃癌标本进行了幽门螺杆菌（HP）检测和病理分析，结果显示胃窦癌、胃体癌和贲门癌的HP感染率分别为76．47％、69．23％和36．36％。胃窦癌和胃体癌中HP阳性病例与HP阴性比较，病人年龄较大，伴有萎缩性胃炎和肠化生者明显较多。作者认为，胃窦癌和胃体癌的发生与HP感染有明显相关性，但贲门癌的发生与HP感染关系不明显。