新型冠状病毒非结构蛋白1重要变异对其与核糖体40S亚单位结合能力的影响

目的 探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白1(NSP1)重要变异对其与核糖体40S亚单位结合能力的影响.方法 基于生物信息学方法,选取可能影响与核糖体40S亚单位结合能力的NSP1氨基酸突变位点(D152A、E155A、F157S、T170S和R171L),PSIPRED在线工具分析突变体的二级结构,mCSM-NA预测其与核糖体的结合能力,DynaMut webserver分析突变对蛋白稳定性的影响;构建NSP1突变体,转染HEK-293T细胞,利用免疫共沉淀检测NSP1突变体与核糖体40S亚单位的结合能力,SUnSET实验评价突变体对蛋白合成率的影响;双荧光素酶报告基因实验、ELISA和RT-PCR方法进一步评价NSP1蛋白关键位点突变对IFN-β表达的影响.结果 生物信息预测5种突变体均可改变蛋白二级结构,其中F157S和R171L可降低NSP1与核糖体40S的结合能力.实验表明F157S和R171L突变显著减弱了 NSP1与核糖体40S的结合能力,增加了细胞总蛋白合成、IFN-β荧光素酶活性、细胞内IFN-β mRNA的表达及上清中IFN-β表达量(P<0.05).结论 NSP1 F157S和R171L突变显著减弱了 NSP1与核糖体40S的结合能力,增强了 IFN-1的反应,提示NSP1蛋白在免疫调节中起重要作用.