丹参酮类成分治疗心脑血管疾病药理活性研究进展

丹参为唇形科植物丹参的干燥根和根茎,其化学成分根据极性差异可分为水溶性丹酚酸类成分和脂溶性丹参酮类成分。现代药理学研究表明,丹参酮类成分具有抗心肌缺血、抗动脉粥样硬化、抗凋亡、抗炎、抗氧化、脑保护等多种药理活性,在心脑血管疾病方面有较广泛的应用。针对丹参酮类成分治疗心脑血管疾病的药理活性和相关作用机制进行较为系统的综述,以期为丹参酮类成分的临床研究以及进一步开发利用提供科学依据。

补阳还五汤防治脑缺血再灌注损伤的研究进展

补阳还五汤是益气活血的代表方,其根据气虚血瘀理论而立,具有补气行血、活血化瘀的作用,广泛应用于缺血性脑卒中的临床防治。梗死组织周边缺血半暗带的恢复再通是缺血性脑卒中的首选治疗方法,然而脑血流再灌注会引起一系列的病理过程,这被称为脑缺血再灌注损伤(CIRI)。研究显示,CIRI主要通过脑神经元兴奋性氨基酸毒性增强、钙超载、氧自由基损伤、炎症反应、细胞凋亡等途径造成神经细胞损伤。补阳还五汤可以通过抑制兴奋性氨基酸毒性、减轻钙超载、抑制氧自由基损伤、减轻炎症反应、抑制细胞凋亡等防治CIRI。本文研究近年来发表的补阳还五汤防治CIRI的相关文献,现将其研究进展进行综述。

黄芪甲苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响

目的探究黄芪甲苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响。方法采用改良线栓法模拟局灶性脑缺血/再灌注损伤。选取健康清洁级♂SD大鼠40只,随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、黄芪甲苷组和溶剂对照组。除假手术组外,其他各组缺血2 h、再灌注24 h。黄芪甲苷组于再灌注的同时腹腔注射黄芪甲苷20 mg·kg^(-1),溶剂对照组腹腔注射相同体积的溶剂。根据Zea Longa评分标准对各组大鼠进行神经功能学的评分,挑选模型成功的大鼠;TTC法检测脑梗死体积;尼氏染色法观察大鼠大脑皮质区细胞形态学的变化;透射电子显微镜观察大脑皮质区细胞超微结构的变化。结果假手术组未见神经功能缺损症状,脑梗死体积为零。与假手术组比较,其他各组均有一定的神经功能缺损症状、不同程度的神经细胞损伤,脑梗死体积增加(P<0.05);与脑缺血/再灌注组比较,黄芪甲苷组可明显改善神经功能缺损症状、减轻神经细胞损伤、减小脑梗死体积(P<0.05),而溶剂对照组无明显变化(P>0.05)。结论黄芪甲苷可减轻大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤,对神经细胞发挥保护性作用。

黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响

目的观察黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组进行缺氧缺糖3h后再复氧复糖12 h,并于复氧复糖的同时加入黄芪甲苷。用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果正常对照组PC12细胞贴壁生长,呈多角形,突起明显,突起之间交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性较强。与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组细胞变圆或肿胀,突起回缩或消失,细胞膜破损,胞体折光性差,细胞活性明显下降(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪甲苷组细胞生长状态见好转,突起较为明显,胞体折光性较好,细胞活性升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数下降(P<0.05)。黄芪甲苷溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比无明显差异(P>0.05)。结论黄芪甲苷可减轻缺氧缺糖/复氧复糖引起的PC12细胞损伤,提高细胞活性,抑制细胞凋亡。

神经干细胞提取与培养方法的比较研究

目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果 (1)胎龄14 d胎鼠较新生24 h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。(2)采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。(3)以1.0×109·L^(-1)密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。(4)悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。(5)半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。(6)原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。(7)14 d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14 d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×10~9·L^(-1)1的密度接种于25 cm^2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3 d加液1~1.5m L,每6~7 d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P <0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P <0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P <0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P <0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。

黄芪甲苷对缺血缺氧性脑血管内皮损伤作用的研究进展

黄芪甲苷是中药黄芪的主要活性单体,具有免疫调节、抗炎、抗凋亡、神经保护、血管重构等多种药理作用,临床上常用于治疗缺血性脑血管疾病。大多数脑血管疾病都是由于血管内皮损伤、通透性增加所致,因此积极控制损伤因素,保护血管内皮功能,改善损伤引起的血管屏障的破坏,对脑血管疾病的防治有重要作用。综合近期的研究,就血管内皮的损伤机制及黄芪甲苷对其保护作用进行综述,以期进行进一步研究,并为其在临床脑血管疾病中的应用提供指导。

神经干细胞提取及培养方法的体会

神经干细胞提取及体外培养的方法有多种,但采用不同方法所得到的神经干细胞的活力与稳定性均不同。通过对提取和体外培养SD胎鼠大脑皮质神经干细胞的过程进行思考,总结出神经干细胞的提取步骤、提取要点、培养基的选择依据、接种密度的选择、培养方法、换液方法、传代时机、传代方法,最终获得大量活力和稳定性均较高的神经干细胞,并将其应用于相关方面的基础研究。

缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤的动态观察

目的探讨缺氧缺糖/复氧复糖不同时间点小鼠海马神经元细胞系HT22细胞损伤情况。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为6组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R) 0 h组(OGD/R 0 h)、缺氧缺糖/复氧复糖12 h组(OGD/R 12 h)、缺氧缺糖/复氧复糖24 h组(OGD/R 24 h)、缺氧缺糖/复氧复糖48 h组(OGD/R 48 h)、缺氧缺糖/复氧复糖72 h组(OGD/R 72 h)。除正常对照组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。倒置显微镜下观察细胞形态,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,Bax、Bcl-2免疫荧光染色检测细胞凋亡情况。结果正常组HT22细胞呈两极或多极,突起明显,突起之间相互交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性强,OGD/R各组细胞胞体轴突减少,细胞皱缩,胞质凝聚。与正常组比较,OGD/R各组细胞存活率均显著降低(P<0.05),OGD/R 12 h至OGD/R 24 h达到最低(P<0.05);OGD/R 12 h及OGD/R 24 h组LDH显著升高(P<0.05),OGD/R 0 h、48 h、72 h组均有升高趋势。除OGD/R 0 h组和OGD/R 72 h组外,OGD/R各组Bax/Bcl-2比值均较正常组显著升高(P<0.05),峰值出现于OGD/R 24 h。结论缺氧缺糖/复氧复糖细胞损伤是一个复杂的动态过程,随着复氧复糖时间的延长,细胞损伤不断加重,24 h达到顶峰,随后细胞损伤情况逐渐缓解。

缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化与细胞凋亡的关系

目的:观察缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化及其与细胞凋亡的关系,探讨自噬对PC12细胞的保护作用。方法:取对数生长期的PC12细胞,随机分为正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组进行缺氧缺糖3 h后再复氧复糖12 h,自噬抑制剂组和自噬激活剂组于复氧复糖的同时分别给予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和自噬激活剂雷帕霉素。用透射电子显微镜和单丹磺酰尸胺荧光染色检测自噬小体的变化,Annexin V-FITC/PI流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡的情况。结果:与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组的自噬小体增多(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数升高(P<0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,自噬抑制剂组的自噬小体明显减少(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数显著升高(P<0.05),而自噬激活剂组自噬小体变大,数量明显增多(P<0.05),并偶见自噬溶酶体,细胞凋亡率和凋亡指数显著下降(P<0.05)。结论:缺氧缺糖/复氧复糖可以诱导PC12细胞发生自噬,且细胞自噬可以抑制细胞凋亡,发挥神经保护作用。

黄芪甲苷生物活性及神经保护作用研究进展

黄芪甲苷作为中药黄芪的有效单体成分,受到越来越多的关注和研究。经检索国内、外文献和查阅相关书籍发现,黄芪甲苷具有多种生物活性,其研究范围涉及肝、心、肺、肾、脑、胃、肠、血管等多个器官与组织,并可通过抑制炎症反应、氧化应激反应、神经细胞凋亡等途径,发挥神经保护作用。黄芪甲苷生物作用显著,应用范围广泛,有望开发成为临床药物治疗多种疾病。

从升阳通玄论治糖尿病周围神经病变

河间学派与易水学派在承袭《黄帝内经》理论体系的基础上,通过理论创新与方药创新,弥补了《黄帝内经》气化思想的不足,完善了其理法方药运用体系。通过深入研习,我们提出气化的最佳状态,即平人的3个标准:足、畅、衡;明确指出玄府气化理论体现了天人一体的整体观,既可用于指导外感,亦可用于指导内伤类疾病的治疗。以糖尿病周围神经病变(DPN)为例,笔者认为其基本病机是玄府气化失司,因此提出了针对性治疗大法即升阳通玄法。在升阳通玄法指导下,将易水学派两大名方升阳散火汤与元戎四物汤(桃红四物汤)结合,创立了达玄饮,并在升阳通玄理论指导下对方义进行了重新解读,充分展现了燕赵医学的特色与优势。

DDIT4对脑缺血再灌注损伤中自噬的调控作用

脑卒中（stroke）是危害人类健康与生命的常见病和多发病,是造成我国居民死亡的首位原因^（[1]）,其中缺血性脑卒中（ischemia stroke）的发病率及致死致残率更是居高不下,约占全部脑血管病的60%～80%。

补阳还五汤通过Notch信号通路修复缺血性脑损伤的研究进展

补阳还五汤在改善缺血性脑损伤后脑梗死、减少致残率方面发挥着重要作用,并且取得了显著的临床疗效。此外,补阳还五汤还能促进脑缺血后脑内神经干细胞(NSCs)的增殖、迁移和分化。在缺血性脑损伤后,Notch信号通路被激活,活化的信号通路在调控NSCs的增殖与分化、炎症反应、缺血区血管生成等方面起着重要作用。研究发现补阳还五汤可以通过Notch信号通路调节NSCs的增殖和分化,从而达到神经保护的作用。现将NSCs的增殖与分化作为补阳还五汤和Notch信号通路的结合点,探讨补阳还五汤通过Notch信号通路来发挥对缺血性脑损伤的修复作用。

雷帕霉素通过抑制细胞焦亡缓解缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞损伤

目的观察自噬激活剂——雷帕霉素对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞焦亡的影响。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组、模型组、溶剂对照组、雷帕霉素组,除正常组外,其余各组细胞均进行缺氧缺糖6 h、复氧复糖24 h处理。倒置显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活性,LDH法检测细胞损伤情况,免疫荧光染色法观察细胞内NLRP3阳性表达,Western blot法检测细胞内NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达。结果正常组细胞胞体饱满、折光性强,细胞突触较多且相互间连接成网状;模型组及溶剂对照组细胞皱缩、变圆,大量脱落、漂浮,细胞间连接大幅减少;雷帕霉素组细胞损伤情况较模型组显著缓解。与正常组比较,模型组细胞活力显著降低,LDH漏出率、NIRP3阳性率、细胞内NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,雷帕霉素组细胞活力显著升高,LDH漏出率、NIRP3阳性率、细胞内NLRP3、Cleaved Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.01)。溶剂对照组与模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论雷帕霉素可能通过抑制细胞焦亡发挥对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞的保护作用。

补阳还五汤促进神经干细胞治疗脑缺血损伤的研究进展

补阳还五汤是具有补气活血通络功效的名方,对缺血性脑损伤后中风后遗症的好转和致残率的减少有着重要的作用。而近年,由于成功地在体外培养了神经干细胞,致使治疗脑损伤应用神经干细胞移植术成为可能。神经干细胞的移植可整合宿主细胞、取代受损细胞、重建神经环路,产生营养因子使休眠的受体细胞发挥代偿,并且移植的神经干细胞可以透过血脑屏障分化成与宿主细胞相同的细胞整合到原神经网中。当前神经干细胞移植作为基因治疗技术已经在动物试验中取得一定进展,说明此策略对缺血性脑病的治疗有着广阔的前景。

细胞自噬的分子调控机制研究进展

细胞自噬是目前生物医学广泛研究的热点之一,它是一种由溶酶体介导的细胞内成分自我降解的过程,是真核生物中一种普遍的生命现象。在真核细胞中,自噬处在一个较低的水平上,起到持家的作用,例如降解胞内受损的细胞器及无功能蛋白,以此作为细胞内能量的来源,维持细胞内环境的稳态。

补阳还五汤对脑缺血/再灌注大鼠神经干细胞移植后神经功能的保护作用

目的探讨补阳还五汤对脑缺血/再灌注大鼠神经干细胞移植后神经功能的保护作用。方法采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型。用药组于造模麻醉清醒后灌胃补阳还五汤(14.8 g·kg^-1·d^-1)。神经干细胞于造模24 h后移植到大鼠脑组织。Zea Longa神经功能行为学评分观察神经功能缺损情况;TTC染色检测脑梗死体积;尼氏染色检测尼氏体累积光密度值;免疫组织化学染色检测Bcl-2和Bax的表达。结果与假手术组相比,模型组出现神经功能缺损,脑梗死明显,尼氏体累积光密度值降低,Bcl-2/Bax降低(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤组、移植组、补阳还五汤+移植组神经功能缺损减轻,脑梗死体积缩小,尼氏体累积光密度值增高,Bcl-2/Bax增高(P<0.05);与移植组相比,补阳还五汤+移植组神经功能缺损减轻,脑梗死体积缩小,尼氏体累积光密度值增高,Bcl-2/Bax增高(P<0.05)。结论补阳还五汤可以增强神经干细胞移植对脑缺血/再灌注大鼠的神经保护作用。

毛蕊异黄酮通过调控细胞色素C/凋亡酶激活因子1凋亡信号通路减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨毛蕊异黄酮对脑缺血/再灌注损伤的影响及其作用机制。方法将SPF级雄性SD大鼠40只随机分为假手术组(sham)、模型组(model)、毛蕊异黄酮组(calycosin,20 mg/kg)和尼莫地平组(nimodipine,0.7 mg/kg,阳性对照药组),采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,在体模拟脑缺血/再灌注损伤环境。Zea Longa评分法检测脑缺血/再灌注大鼠神经功能缺损情况;盐酸2,3,5-三苯基四氮(TTC)染色检测脑梗死体积;HE染色检测神经细胞病理形态学改变;尼氏染色观察尼氏小体变化;TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡关键蛋白细胞色素C(Cyt C)、凋亡酶激活因子1(Apaf-1)、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果与sham组相比,model组神经功能缺损症状明显(P<0.05),脑梗死体积明显增大(P<0.05),倒置光学显微镜下观察发现神经细胞出现胞体收缩,胞核深染、固缩,细胞生长状态较差,尼氏小体明显减少或消失(P<0.05),凋亡神经细胞明显增多(P<0.05),凋亡关键蛋白Cyt C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3表达均明显升高(P<0.05);与model组相比,calycosin组和nimodipine组大鼠神经功能缺损症状明显减轻(P<0.05),脑梗死体积明显缩小(P<0.05),光学显微镜下观察发现,神经细胞损伤明显减轻,尼氏小体表达明显增多(P<0.05),凋亡神经细胞明显减少(P<0.05),凋亡关键蛋白Cyt C、Apaf-1、Caspase-9和Caspase-3的表达明显降低(P<0.05)。结论毛蕊异黄酮可明显抑制神经细胞凋亡,减轻脑缺血/再灌注损伤,其作用机制与毛蕊异黄酮有效调控Cyt C/Apaf-1凋亡信号通路相关。

Notch信号通路对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经再生的影响

目的探讨抑制Notch信号通路促进脑缺血大鼠神经干细胞(NSCs)移植后神经再生的机制。方法采用大脑中动脉阻塞(MCAO)方法构建局灶性脑缺血模型,体外培养NSCs,移植入纹状体缺血区。将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组(移植神经干细胞)、氮-[氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰]-S-苯基甘氨酸丁酯(DAPT)+移植组。采用HE染色观察各组大鼠神经元损伤程度,利用免疫组织化学、Western blotting检测各组大鼠脑组织中Notch1、Hes1及Hes5的表达情况。结果与假手术组相比,模型组神经元损伤严重,出现核固缩和核溶解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞表达明显增多,Notch1、Hes1及Hes5蛋白表达显著上调(P<0. 05)。与模型组相比,移植组和DAPT+移植组神经元损伤均不同程度缓解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞均有部分表达,各项蛋白表达均有所降低(P<0. 05);DAPT+移植组神经元损伤明显恢复,较移植组各项蛋白阳性细胞和蛋白表达进一步降低(P<0. 05)。结论抑制Notch信号通路可促进脑缺血大鼠神经干细胞移植后的神经再生,其机制主要与下调Notch1、Hes1及Hes5的表达有关。