绿壳蛋鸡青年鸡疑似心包积液——肝炎综合征的实验室诊断

2017年,在河北省涿鹿县某山间林下饲养的60~80日龄绿壳蛋鸡青年鸡突然发生大量死亡,根据其临床症状以及剖检变化初步怀疑为心包积液—肝炎综合征(hydropericardium hepatitis syndrome,HHS)。为了进一步确诊,选择发病死亡典型病例采集样品进行细菌和病毒的分离、培养、鉴定,以及10周龄SPF鸡致病试验。结果表明,分离到3株大肠杆菌,但接种SPF鸡未出现典型临床症状和发病死亡;利用电镜观察到直径为60~80 nm的圆形病毒,该病毒能够凝集大鼠红细胞;病毒分离株引起SPF鸡出现典型的心包积液—肝炎的剖检变化;经琼脂扩散试验鉴定该病毒为禽Ⅰ群腺病毒4型。

蛋鸡禽白血病与沙门菌混合感染的实验室诊断

为了确定引起河北省张家口市沙城地区某蛋鸡场饲养的海兰褐蛋鸡发病和死亡原因,对送检的病死鸡进行病理剖检,同时无菌取病鸡的肝脏、脾脏、肺脏等脏器和血液,进行细菌分离、鉴定、药敏试验和血清学诊断。通过ELISA方法检测发病鸡群所产鸡蛋蛋清中禽白血病P27(ALV-P27)抗原。细菌分离、鉴定和血清学试验结果表明为沙门菌,该菌对庆大霉素、恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林、链霉素均敏感,检测30枚蛋中有7枚P27抗原为阳性。表明该送检病例是禽白血病与沙门菌混合感染的结果。

流感病毒诱导的MDCK细胞自噬

H9N2流感病毒频发,禽类及哺乳动物受到严重感染,对养殖业造成严重的经济损失,严重威胁人类健康。为此,对H9N2流感病毒的研究显得至关重要。流感病毒感染后病毒与宿主的斗争是最近研究的热点内容。自噬是一种正常的生理代谢机制,可以清除细胞中包括病毒在内的病原微生物,可以将废物大分子降解为可重复使用的生物活性单体。

赛鸽圆环病毒天津株全基因组的扩增和序列分析

本研究利用PCR从有腹泻症状的鸽中检测到圆环病毒,进一步进行了全基因组扩增。基因组序列分析表明该基因组长度为2032 bp,编码5个开放阅读框(ORFs),5'端和3'端各存在一个基因间隔区。该基因组序列与已登录的中国、澳大利亚、日本、波兰、比利时和巴西的PiCV基因序列同源性为81.5%~97.7%。全基因组系统发育分析显示,54个序列(53个参考PiCV基因组序列和1个本研究PiCV基因组序列)可分为6个分支(A、B、C、D、E和F),本研究分离毒株位于B支,与来自比利时(DQ915957和DQ915958)、中国(KX108826、KX108805、KX108825、KJ704802和KJ704806)的分离株亲缘关系密切。Simplot重组分析结果显示Rep ORFs包含多个重组热点,表明我国鸽圆环病毒存在遗传多样性。

天蚕素对H_(9)N_(2)亚型禽流感病毒和禽致病性大肠杆菌共感染肉鸡的干预作用

试验旨在探讨天蚕素对H_(9)N_(2)亚型禽流感病毒(AIV)与禽致病性大肠杆菌(APEC)共感染致炎性渗出的干预效果,为临床H_(9)N_(2)亚型AIV与APEC共感染的有效防治提供参考。试验选取150只14日龄白羽肉鸡,随机分为5组,每组3个重复,每个重复10只鸡。对照组肉鸡使用无菌生理盐水0.2 mL滴鼻,APEC感染组肉鸡使用含2.09×109 CFU APEC O2菌株肉汤0.2 mL滴鼻,H_(9)N_(2)感染组肉鸡使用H_(9)N_(2)病毒尿囊液(约105 EID50 H_(9)N_(2)病毒)0.2 mL滴鼻,H_(9)N_(2)+APEC感染组肉鸡使用0.2 mL APEC O2菌株肉汤离心后的沉淀与0.2 mL H_(9)N_(2)病毒尿囊液混匀得到的病毒尿囊液滴鼻,H_(9)N_(2)+APEC干预组肉鸡采用与H_(9)N_(2)+APEC感染组相同处理后,使用天蚕素饮水(300 mg/kg)+基础饲粮饲喂,其余各组正常饮水+基础饲粮饲喂。正式试验期21 d。结果显示,H_(9)N_(2)+APEC感染组肉鸡临床症状极为明显,死亡率显著升高(P<0.05),气管和肺脏病变最为严重。与H_(9)N_(2)+APEC感染组相比,H_(9)N_(2)感染组和APEC感染组在感染后第3、7、14、21 d时的H_(9)N_(2)病毒拷贝数和APEC载量均显著降低(P<0.05);H_(9)N_(2)+APEC干预组在感染后第3、7、14、21 d时的H_(9)N_(2)病毒拷贝数均显著降低(P<0.05),H_(9)N_(2)+APEC干预组在感染后第7、14、21 d时的APEC载量均显著降低(P<0.05)。研究表明,天蚕素可以缓解H_(9)N_(2)亚型AIV、APEC以及两者共感染引起的肉鸡呼吸道症状,降低死亡率,其机制与天蚕素降低病原在组织内的载量及修复呼吸系统、改善呼吸机能有关。

胚蛋注射乳酸菌对雏鸡孵化性能和肠道黏膜结构的影响

试验旨在探讨胚蛋注射乳酸菌对蛋雏鸡孵化性能和肠道黏膜结构的影响。将150个SPF种蛋孵化至18胚龄时随机分成2组,每组3个重复,每个重复25个种蛋。对照组羊膜腔接种0.2 mL灭菌生理盐水,鸡胚乳酸菌注射组羊膜腔接种0.2 mL含1.21×10^(8) CFU/mL活菌数的唾液乳杆菌XP132。孵化到21 d出壳,饲养期35 d。结果显示:胚蛋注射乳酸菌显著增加了蛋雏鸡体重(P<0.05)。与对照组相比,鸡胚乳酸菌注射组7日龄和28日龄的胸腺指数、14日龄脾脏指数和法氏囊指数、21日龄的胸腺指数和法氏囊指数均显著提高(P<0.05)。与对照组相比,鸡胚乳酸菌注射组雏鸡十二指肠绒毛高度(VH)显著提高(P<0.05),绒隐比(V/C)极显著升高(P<0.01);7日龄十二指肠隐窝深度(CD)极显著降低(P<0.01),21、35日龄十二指肠CD显著降低(P<0.05);7、21日龄空肠VH、V/C显著升高(P<0.05),CD显著降低(P<0.05);21日龄回肠VH显著升高(P<0.05),V/C极显著升高(P<0.01);35日龄回肠VH显著升高(P<0.05)。因饲养过程中未用抗生素,导致对照组部分雏鸡出现轻微细菌感染,电镜观察可见雏鸡十二指肠上皮细胞微绒毛、线粒体结构等细胞器出现了一定的损伤,而应用乳酸菌后7、21、35日龄雏鸡未出现细菌感染,上皮细胞微绒毛、线粒体结构和紧密连接蛋白等结构的损伤情况均得到改善。研究发现,胚蛋注射乳酸菌可增加SPF蛋鸡体重,并对其肠道黏膜结构具有一定的改善作用。

鸭源、鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与耐药性分析

鸭疫里默氏杆菌病是由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引发鹅、鸭、火鸡等水禽的一种接触性急性败血性传染病,又称鸭疫综合征、鸭传染性浆膜炎和鸭疫巴氏杆菌病等。本病以1~6周龄的禽类多发,成年禽类通常不易感染。该病的传播途径较多,可以通过饮水和垫料等途径传播,也可通过携带病原菌的成年禽类传播。该病发病率极高,病禽死亡率大约为5%~75%,幼龄病禽耐过后也易形成弱雏。伴随着鸭、鹅等禽类养殖规模的扩大,鸭疫里默氏杆菌病的防制工作越来越受到重视,但由于鸭疫里默氏杆菌的血清型众多,且各个血清型之间没有交叉保护,疫苗防控具有一定的局限性,因此采取药物治疗尤为重要。

鹅副黏病毒分离鉴定与治疗试验

鹅副黏病毒病(Goose Paramyxovirus Disease,GPMVD)是鹅的一种急性传染性疾病,临床主要表现为精神沉郁、采食减少、腹泻以及神经症状,剖检变化为腺胃乳头出血、肠道有出血等。该病毒与鸡新城疫(NDV)同为副黏病毒科,禽腮腺炎病毒属的单股RNA病毒,但其抗原性不同。鹅副黏病毒对不同品种、不同年龄的鹅均有致病性,给我国养鹅业造成一定程度的经济损失。目前疫苗免疫接种仍是该病主要的预防措施。然而由于鹅副黏病毒疫苗基因型与NDV的差异,加上多数养殖场(户)对GPMVD了解较少,导致疫苗接种覆盖率偏低,防护效果不佳等,因此鹅副黏病毒病仍时有发生,给鹅类健康养殖带来严重的威胁。在此背景下,鹅副黏病毒病的准确诊断对于及时发现疫情、及时采取有效控制措施具有重要意义。

山柰酚通过下调NF-κB信号通路减轻猪源甲型H9N2流感病毒所致小鼠急性肺损伤

目的:探讨山柰酚是否通过下调转录因子NF-κB信号通路的表达而保护感染猪源甲型H9N2流感病毒引起急性肺损伤的小鼠。方法:猪源甲型H9N2流感病毒感染BALB/c小鼠建立急性肺损伤模型,山柰酚干预后检测肺湿重与干重比,观察肺组织的病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液内炎性细胞数量以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)含量同时检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性以及丙二醛(MDA)含量,Western blot检测小鼠肺内NF-κB P65的表达,ELISA检测小鼠肺组织匀浆细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结果:山柰酚能降低小鼠死亡率,改善肺组织的病理学变化和肺水肿程度,并能降低肺内巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等炎性细胞的数量同时降低TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA的含量,抑制MPO的活性并升高SOD的活性。另外,山柰酚可以下调NF-κB P65的表达增加细胞核提取物中NF-κB P65和NF-κB P50的核转位。结论:山柰酚通过下调NF-κB信号通路的表达从而降低猪源甲型H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠的炎症程度和氧化应激损伤,最终减轻流感病毒所致的急性肺损伤。

人参皂苷Rb1对H9N2亚型猪流感病毒诱导急性肺损伤小鼠肺组织氧自由基的影响

本试验将120只6～8周龄BALB／c小鼠随机分为对照组、肺损伤模型组（ALI组）、人参皂苷Rb1组（G-Rb1组），每组40只。AL1与GRb1组采用100μL SIA／swine／HeBei／012／2008／猪流感病毒（H9N2SIV）经鼻腔接种建立急性肺损伤模型，同时G-Rb1组腹腔注射人参皂苷Rb1液0．1mL（剂量为10mg·kg-1），连续7d；对照组鼻腔接种相同剂量生理盐水稀释的正常鸡胚尿囊液。通过观察临床症状、小鼠的体重、肺病理组织学变化、检测小鼠肺组织T—SOD活性、抑制0H·能力及MDA、NO含量，探讨人参皂苷Rb1（G-Rb1）清除肺损伤小鼠氧自由基的能力。结果表明，从第2天末开始ALI组大部分小鼠出现高度的精神沉郁，呼吸极度困难，采食量明显减少，体重下降。肺部明显水肿、淤血和出血，炎性细胞渗出，对照组小鼠各器官未见异常。G-Rb1组症状明显轻于攻毒组，症状出现较缓，症状较轻，死亡时间延迟，死亡率降低。在第4、6、8天：抑制0H·能力、T-SOD活力与对照组比，G-Rb1与AILI组含量显著减少（P〈O．05），但G-Rb1组明显高于ALI组（P〈0．05）；MDA及N0含量与对照组比，G-Rb1与ALI组含量极显著增加（P〈0．01），但G-Rb1组明显低于ALI组（P〈0．01）。本研究表明，G-Rb1在一定浓度范围内，具有清除由病毒诱导的肺损伤组织中自由基的作用，保护自由基对肺组织的氧化损伤。

牛源大肠杆菌四环素类抗生素耐药相关基因的筛选及鉴定

为筛选与鉴定牛源大肠杆菌耐四环素类药物的耐药相关基因,本研究从67份犊牛腹泻病料样品中分离细菌。采用生化和PCR方法鉴定分离菌,通过K-B法检测分离菌的药物敏感性,并选定一株多重耐药菌;通过杂交的方法,将供体菌携带的转座子插入到该分离菌(亲本菌)的染色体中,并通过转座子携带的卡那霉素抗性筛选转座子的插入突变株文库;分别利用含1/2 MIC四环素、米诺环素、强力霉素和卡那霉素的LB培养板对插入的突变株进行筛选,以获得对四环素类药物敏感的突变株;利用Taq I对四环素类药物敏感突变株基因组酶切后,以随机方式连接linker并作为模板经套式PCR扩增并测序,将测序结果与大肠杆菌O157株的染色体序列比对以确定转座子破坏的基因。结果显示,通过细菌的分离鉴定与药敏试验选定了一株耐18种抗生素的牛源大肠杆菌;经杂交方法及卡那霉素抗性筛选共获得3 000株转座子插入突变的大肠杆菌;且共筛选出10株对四环素类抗生素均敏感的突变株;通过套氏PCR扩增及序列比对分析结果显示,四环素类抗生素突变株中转座子破坏的基因为磷酸烯醇式丙酮酸蛋白磷酸转移酶I(ECs4877)和H-NS核蛋白(ECs1739)。本研究结果首次证实Ecs4877和Ecs1739基因是牛源大肠杆菌潜在的四环素类药物的耐药相关基因。本研究筛选出的耐药相关基因为深入了解大肠杆菌的耐药机制、寻找药物作用的新靶点具有重要意义。

N-乙酰半胱氨酸对H9N2猪流感病毒所致急性肺损伤小鼠的保护作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对H9N2猪流感病毒所致急性肺损伤小鼠的保护作用。方法:采用BALB/c小鼠建立H9N2猪流感病毒诱导的急性肺损伤模型。实验小鼠在接种病毒前1 h腹腔注射NAC(10mg/kg,稀释于生理盐水),此后连续使用5 d。检测肺湿重与干重比变化,评估肺水肿情况,观察肺组织的病理学变化,检测支气管肺泡灌洗液内炎症细胞、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1β(IL-1β)的变化,同时检测肺组织匀浆中病毒的增殖、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和髓过氧化物酶(MPO)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:NAC能降低小鼠死亡率,延长小鼠存活时间,显著降低肺组织的病理学变化和肺水肿程度,并能降低巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等炎症细胞的数量,同时降低TNF-α、IL-6、IL-1β和MDA的含量,抑制MPO的活性以及升高T-SOD的活性。结论:NAC减轻H9N2猪流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤,其保护作用可能与减轻氧化应激作用和炎症反应相关。

人参皂苷Rb1对H9N2流感病毒诱导急性肺损伤小鼠抗氧化酶的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1（G-Rb1）对肺损伤小鼠抗氧化酶活力的影响.方法 将195只6～8周龄BALB/c小鼠随机分为对照组、肺损伤模型组（ALI组）、人参皂苷Rb1组（G-Rb1组）,每组65只.ALI与G-Rb1组采用100 μL SI A/swine/HeBei/012/2008/猪流感病毒（H9N2 SIV）经鼻腔接种建立急性肺损伤模型,同时G-Rb1组腹腔注射人参皂苷Rb1液0.1 mL,剂量为10 mg/（kg·bw）,连续7d;对照组鼻腔接种相同剂量生理盐水稀释的正常鸡胚尿囊液.观察临床症状、肺病理组织学变化,计算小鼠肺湿干重比、肺系数,检测小鼠肺组织T-SOD、MPO、CAT、GSH-PX活力.结果 从第2天末开始ALI组大部分小鼠出现高度的精神沉郁,呼吸极度困难,采食量明显减少,体重下降.肺部明显水肿、淤血和出血,炎性细胞渗出,对照组小鼠各器官未见异常.肺系数及肺干湿重比逐渐升高,第8天开始下降,第14天趋于正常.G-Rb1组症状明显轻于攻毒组,症状出现较缓,症状较轻,死亡时间延迟,死亡率降低.在第4、6、8天,与对照组比G-Rb1组和ALI组T-SOD及CAT活力显著降低（P＆lt;0.01）,组间比,G-Rb1组明显高于ALI组（P＆lt;0.05）;在各时间点,与对照组比,ALI组GSH-PX活力显著降低（P＆lt;0.01）,而G-Rb1组则显著升高（P＆lt;0.01）,实验组组间差异显著（P＆lt;0.01）.结论 G-Rb1在一定浓度范围内,具有提高小鼠抗氧化酶活力作用,一定程度上改善H9N2猪流感病毒对肺组织的氧化损伤.

TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用

旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na^+-K^+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显著高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显著低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显著降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na^+-K^+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。

表没食子儿茶素没食子酸酯对H9N2猪流感病毒诱导小鼠肺损伤中Toll样受体-4表达的影响

旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对猪源H9N2流感病毒感染诱导小鼠肺损伤及氧化应激相关信号通路Toll样受体(TLR)-4表达的影响。将6~8周龄、雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为病毒感染致急性肺损伤(H9N2)组、H9N2+EGCG组、模拟感染(Mock)组、Mock+EGCG以及TLR-4抑制剂Eritoran5564(H9N2+E5564)对照组,观察各组小鼠肺组织病理学变化,测定肺湿/干重比;测定肺组织内MPO、T-SOD、抗HO·能力、MDA、IL-1β和TNF-α的含量;Western blot和RT-PCR方法检测肺内TLR-4 mRNA及蛋白质的表达。结果表明,H9N2组小鼠精神沉郁、呼吸困难、体重下降明显;肺组织学表现为肺泡壁水肿、炎性细胞浸润、出血为特征的弥漫性肺组织损伤。EGCG干预后,与H9N2组相比,EGCG治疗组小鼠临床症状较轻,一定程度上降低了死亡率,并明显延长小鼠存活时间(P<0.01);其肺组织损伤程度较轻,肺湿/干重比极显著下降(P<0.01);MPO和MDA的含量显著降低,与之相反T-SOD及抗HO·能力升高;同时,EGCG显著降低肺组织内IL-1β和TNF-α的含量。肺组织内TLR-4mRNA以及蛋白表达显著降低;E5564呈现与EGCG相似的干预效果,显著降低TLR-4mRNA以及蛋白表达,降低肺组织MPO、MDA、IL-1β和TNF-α的含量,减少T-SOD的消耗以及提高抗HO·能力。EGCG明显缓解小鼠肺损伤过程,其机制可能与其影响活性氧自由基的产生或清除进而显著降低TLR-4的表达有关,提示其在辅助预防和干预H9N2-SIV诱导的肺损伤方面具有潜在的应用前景。

p38MAPK信号通路在猪源H9N2流感病毒导致小鼠肺损伤中作用的研究

探讨p38MAPK信号通路在猪源H9N2流感病毒诱导小鼠肺损伤过程中的作用。将BALB/c小鼠随机分为病毒感染组(H9N2组)、模拟感染组(NS组)和H9N2+p38MAPK抑制剂组(H9N2+SB203580)。Western blot方法检测肺组织p38MAPK表达,观察各组小鼠肺组织病理学变化、测定肺湿/干重比,衡量肺损伤情况;同时进行支气管肺泡灌洗液(BALF)内细胞计数和肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的测定。结果如下:Western blot结果显示感染组小鼠肺组织内p38MAPK表达显著高于H9N2+SB203580抑制剂组(P<0.01);感染组小鼠精神沉郁、呼吸困难、体重下降;肺组织学表现为肺泡间质水肿、炎性细胞渗出、出血为特征的弥漫性肺泡损伤。与感染组相比,p38MAPK抑制剂组症状较轻,一定程度上降低了死亡率,并明显延长小鼠存活时间(P<0.01);同时,小鼠BALF内炎性细胞渗出减少,TNF-α和IL-1β的含量(P<0.05)以及肺湿/干重较感染组显著下降(P<0.01)。本研究证实p38MAPK信号通路参与H9N2流感病毒诱导小鼠肺损伤过程,其抑制剂SB203580能够有效减少p38MAPK表达,进而减少TNF-α和IL-1β产生以及炎性细胞渗出,缓解肺损伤的严重程度,延长小鼠存活时间和降低死亡率,提示p38MAPK信号通路抑制剂SB203580在今后作为辅助预防和干预H9N2-SIV诱导肺损伤具有一定的应用前景。

H9N2流感病毒诱导MDCK细胞自噬对病毒复制的影响

本试验旨在研究H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬对病毒复制的影响。试验首先建立了稳定表达GFP-LC3的MDCK细胞系,该细胞系经H9N2流感病毒感染后,激光共聚焦观察到了绿色荧光的点状聚集,得出H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发细胞自噬。随后试验利用3-MA抑制细胞自噬、Rapamycin诱导细胞自噬,荧光定量PCR检测NP mRNA水平,TCID50检测病毒的滴度进行细胞自噬与病毒复制的研究。结果表明:Rapamycin可显著增加NP mRNA水平和病毒滴度(P <0.01);3-MA可以显著降低NP m RNA水平和病毒滴度(P<0.01)。说明H9N2流感病毒感染MDCK细胞引发的细胞自噬可促进流感病毒的复制。

鸽新城疫HB株水佐剂灭活疫苗的制备及免疫特性

为有效控制临床中赛鸽新城疫的发生,将分离到的鸽新城疫河北毒株(HB株)灭活后制备成水佐剂疫苗,并对其物理性状、安全性、毒性、最佳免疫剂量和抗体产生时间、免疫持续期和保护效果及与鸡新城疫疫苗(LaSota株)对比效果进行检测。结果显示,使用0.10%甲醛37℃灭活16 h可彻底将病毒灭活,并且对病毒的效价影响最小;制备的水佐剂疫苗安全无毒副作用,采用0.3 mL剂量免疫雏鸽后7 d,有较低水平抗体产生,21 d抗体水平达到8.1 log2,28 d达到顶峰9.0 log2;免疫30 d后保护指数为100.0;与鸡新城疫疫苗(LaSota株)进行对比发现,制备的水佐剂疫苗攻毒保护率为100%,而鸡新城疫疫苗(LaSota株)仅为30%;制备的水佐剂疫苗在4℃条件下可保存180 d,20℃条件下可保存90 d。综上,采用鸽新城疫病毒HB株制备的水佐剂疫苗可在免疫后短时间内产生有效抗体,并且在受到强毒攻击时较鸡新城疫疫苗的保护率高。

H9N2亚型猪源性流感病毒在小鼠肺微血管内皮细胞内最佳增殖条件的研究

试验旨在确定H9N2亚型猪源性流感病毒(SIV)在小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中增殖的最佳条件。将PMVEC解冻、复苏、培养,取长成单层的PMVEC,在不同浓度TPCK-胰蛋白酶维持液(0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8、1.0μg/mL)、不同H9N2亚型SIV(A/swine/HeBei/012/2008/(H9N2)接种剂量(1∶10、1∶100、1∶1 000、1∶10 000、1∶100 000、1∶1 000 000和1∶10 000 000)及不同病毒吸附时间(0.5、1.0、2.0和3.0h)条件下观察PMVEC形态变化,并测定细胞上清液中H9N2亚型SIV的HA滴度。在未加病毒的情况下,低于0.6μg/mL的TPCK-胰蛋白酶对PMVEC的生长未造成任何影响,但随着TPCK-胰蛋白酶浓度的增加,PMVEC开始出现肿胀、变圆,甚至脱落;采用含有0.6μg/mL TPCK-胰蛋白酶维持液将H9N2亚型SIV稀释为不同的浓度感染PMVEC,在0.3μg/mL TPCK-胰蛋白酶维持液、10-2病毒稀释倍数感染条件下48和72h HA滴度分别为4.6log2和6.4log2;病毒吸附时间为2h且中间震荡20s的条件下H9N2HA滴度最佳。结果表明,当TPCK-胰蛋白酶维持液浓度为0.3μg/mL、病毒接种浓度为10-2、吸附时间为2h且中间震荡20s时,H9N2亚型SIV在PMVEC中增殖最佳,达到6.8log2。

抗菌肽在家禽生产中的研究进展

抗菌肽(AMPs)在动物、植物内广泛存在。抗菌肽是机体细胞特殊基因由转录、翻译等过程产生的一类由12~50个氨基酸组成的小肽物质,是机体固有免疫重要组成部分,构成了机体防御病原微生物的第一道防线。抗菌肽具有分布范围广、广谱抗菌活性强、不易产生耐药性、热稳定性高、抗病毒等作用。抗菌肽作为饲料添加剂广泛应用于家禽防治疾病、增强免疫、改善肠道菌群以及提高禽类生长性能等方面。文章主要从抗菌肽的种类及其抗细菌作用、抗病毒作用、防治疾病、改善肠道菌群以及提高禽类生长性能等方面进行阐述,为后期抗菌肽的研究与应用提供参考。