混合式教学模式在“肾脏病理学”教学中的应用探究

以河北医科大学2018级临床医学专业本科生为研究对象,3个班级为实验组,采用线上线下混合式教学模式,其余3个班级为对照组,采用传统教学模式。利用期末考试、问卷调查等方式,分析混合式教学模式在“肾脏病理学”中的教学效果。期末考试成绩分析表明,实验组“肾脏病理学”部分的成绩明显高于对照组。调查问卷结果显示,实验组的学生对混合式教学模式普遍感到满意。混合式教学模式能激发学生的学习兴趣,提高学生的自主学习能力,培养学生的团队合作精神,增进师生互动,提升教师教学水平,最终,教学质量得以提高。本研究为混合式教学模式在病理学教学中的推广应用奠定了实践基础。

PinX1在食管鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨Pin2/TRF1结合蛋白X1(PinX1)与食管癌发生发展及与临床病理特征的关系。方法采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术方法(FCM)检测50例原发性食管癌患者的癌组织及食管切缘正常黏膜(距离癌5 cm以上)中PinX1的表达。结果 PinX1mRNA和蛋白在食管癌组织中表达显著低于食管正常组织(P<0.01)。且在食管癌中的表达与癌细胞分化程度、浸润深度及淋巴结转移呈负相关(P<0.05),但与患者年龄、性别无关(P>0.05)。结论 PinX1作为一种潜在的抑癌基因,其表达下调可能参与了食管鳞状细胞癌的发生和发展,是判定癌分化程度、浸润转移和判定预后的分子标志物。

p53基因突变与贲门癌的关系及其临床病理意义

目的研究 p5 3基因突变在贲门癌中的作用及其临床病理意义。 方法银染聚合酶链反应 -单链构像多态性分析法 (PCR -SSCP)检测贲门癌新鲜冰冻组织中p5 3基因 5～ 8外显子点突变情况。结果PCR -SSCP检测 p5 3基因 5～ 8外显子点突变率为 5 2 .6 % (2 0 / 38) ,以第 8外显子出现突变的频率最高。其中有淋巴结转移者的p5 3基因突变率 (70 .6 % )较无淋巴结转移者的突变率 (38.1% )高 (P <0 .0 5 ) ,除此以外 ,p5 3基因突变率与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度及组织类型等均无明显相关性 (P >0 .0 5 )。结论 p5 3基因突变是贲门癌常见的分子事件 ,并可能是导致贲门癌野生型 p5 3功能丧失的重要遗传改变 ,p5 3基因突变与贲门癌淋巴结转移之间有相关性 ,提示检测p5 3基因突变对估计该肿瘤的预后可能有所帮助。

医学电子版教材应用的趋势与挑战

医学电子版教材由数字化信息处理系统提供支撑软件平台,从而实现文本、图形、图像、声音、视频、动画等多种信息建立关联,形成具有多样性、集成性和交互性的现代化教材。目前,国内电子版教材的应用发展很快,但也遇到了很多问题,总之,医学电子版教材的应用是医学教学和计算机技术发展的必然要求,国内制作出成熟的电子版教材指日可待,电子版教材的应用将对更好地培养优秀的医学专门人才具有深远的意义。

Mdm2基因扩增在贲门癌中的作用及临床病理意义

目的研究mdm2基因扩增与贲门癌的关系及其与各种临床病理因素之间的相关性。方法取新鲜贲门癌组织 ,用酚氯仿异物醇法提取基因组DNA ;用差异聚合酶链反应 (differentialpolymerasechainreaction ,dPCR)技术检测mdm2基因扩增。结果 38例贲门癌组织中 7例有mdm2基因扩增 (18.2 % ) ,高中分化组的mdm2基因扩增阳性率 (33 .3 % )较低分化组 (5 .0 % )高 (P <0 .0 5 ) ;而mdm2基因扩增与其它临床病理因素之间 ,如年龄、性别、组织类型和淋巴结转移等均无相关性 (P >0 .0 5 )。结论mdm2基因扩增在贲门癌并非少见 ,提示mdm2基因扩增可能是导致贲门癌野生型 p5 3功能丧失的重要遗传改变 ;

缬沙坦对高糖培养的肾小球系膜细胞p38MAPK传导通路的影响

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、其上游因子MAPK激酶3/6(MKK3/6)和下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)的表达以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用Western bolt检测MKK3/6、p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测系膜细胞内TGF-β1和FN mRNA的表达。放免法测定细胞上清液中纤维连接蛋白(FN)和IV型胶原的含量。MTT法检测缬沙坦在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①与低糖对照组相比,高糖组系膜细胞p-p38 MAPK、p-MKK3/6和p-CREB1表达明显上调,TGF-β1和FN mRNA的表达增加,FN和IV型胶原含量增加。②缬沙坦组p-p38 MAPK、p-MKK3/6和p-CREB1的表达明显下调,TGF-β1和FN mRNA的表达降低,同时FN和IV型胶原的含量减少。③MTT法检测显示不同浓度的缬沙坦对细胞增殖状态都有所抑制,并随药物浓度的增加而作用增强。结论缬沙坦抑制肾小球系膜细胞TGF-β1的表达和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK传导通路的激活来实现的。

血清TNF-α升高对糖尿病肾脏脂质积聚的影响研究

目的明确糖尿病小鼠血清TNF-α升高与肾脏脂质代谢的关系。方法 CD1小鼠按体重腹腔注射链脲佐菌素(150 mg·kg-1),72 h后空腹血糖大于16.7 mmol·L-1者确定为1型糖尿病模型,饲养1个月后,采用ELISA方法检测血清中TNF-α水平,免疫组织化学和Western blot方法检测SREBP-1和ADRP的表达。结果与正常对照小鼠相比,糖尿病小鼠血清TNF-α水平明显升高,为正常对照小鼠的7.73倍。SREBP-1和ADRP主要表达于肾小管上皮细胞,糖尿病小鼠肾脏SREBP-1前体片段、成熟片段和ADRP表达明显高于正常对照小鼠,分别是对照组的2.31倍、1.74倍和1.72倍。小鼠血清TNF-α水平和肾脏ADRP表达的相关性分析证实二者间存在正相关,相关系数为0.914。结论糖尿病小鼠血清TNF-α升高可能是导致肾脏脂质积聚的因素之一。

高迁移率族蛋白1、Toll样受体4和血管细胞黏附因子1与狼疮性肾炎血脂异常的关系

目的探讨高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB-1)、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)和血管细胞黏附因子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)与狼疮性肾炎(LN)血脂异常和动脉粥样硬化(atheroscleros,AS)的关系。方法收集20例正常健康人、30例系统性红斑狼疮(SLE)无肾脏损害和35例LN患者外周静脉血,检测血脂水平、HMGB1mRNA、TLR-4mRNA、血清HMGB1蛋白水平、外周血单核细胞CD14+/VCAM-1表达。结果 LN组患者血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)明显高于SLE组和正常对照组(P<0.01);LN组患者血清中HMGB1表达量(9.86±1.54)g/L高于正常对照组(7.85±0.75)g/L和SLE组(7.46±1.53)g/L;HMGB1mRNA和TLR4mRNA表达亦升高(P<0.01),SLE组和正常对照组差异无统计学意义;与SLE组和正常对照组比较,LN组单核细胞中CD14+/VCAM-1表达明显增强;在LN组患者外周血中HMGB1表达与TLR4、血脂(TG、LDL-C)呈正相关(r=0.915、0.536、0.448,P<0.05或<0.01)。结论在LN发病过程中晚期炎症介质HMGB1可能通过与TLR4结合,促进单核细胞表面VCAM-1表达,从而引起血脂异常,参与AS的形成。

JAK/STAT信号介导高糖诱导系膜细胞转化生长因子β_1及其基质蛋白的分泌

目的观察高糖和AG490对大鼠肾小球系膜细胞Janus激酶/信号转导和转录活化因子(Januskinase/signal transducer and activators of transcription,JAK/STAT)信号激活以及对系膜细胞转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和细胞外基质蛋白表达的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western印迹检测JAK2磷酸化表达,Western印迹检测信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化-STAT1(phospho-STAT1,p-STAT1)和p-STAT3表达;酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunoadsorbent assay,ELISA)和放射免疫法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和IV型胶原的分泌,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖对照组比较,高糖培养的系膜细胞JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,TGF-β1、FN和IV型胶原分泌增加,TGF-β1mRNA表达增加;AG490能够明显抑制高糖培养系膜细胞JAK2的磷酸化,下调p-STAT1和p-STAT3表达,明显抑制TGF-β1、FN和Ⅳ型胶原的分泌,同时降低TGF-β1mRNA表达。结论JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β1和细胞外基质的分泌。

大鼠局限性炎性肉芽肿模型的建立

目的探讨建立实验性大鼠肝内和皮下局限性炎性肉芽肿模型的实验方法。方法应用正常Wistar大鼠,开腹直视下肝内和皮下分别注射卡介苗、破壁和未破壁灵芝孢子粉溶液,处理后4和8周时进行病理形态学观察和分析。结果各实验组大鼠在造模前后生命体征均良好,造模后4和8周时肝内和皮下均可见到局限性的炎性肉芽肿病变,但8周时即可出现较重纤维化。结论应用卡介苗和灵芝孢子粉局部注射,可在对机体无明显危害情况下,在大鼠肝内和皮下成功建立局限的炎性肉芽肿模型。

敲低periostin对PDGF引起的系膜细胞增殖和细胞外基质表达的影响

目的 观察敲低periostin对PDGF引起的系膜细胞增殖和细胞外基质表达的影响。方法 体外培养小鼠系膜细胞,细胞以10 μg·L -1 PDGF刺激,分别于刺激0、2、4、6、12 h时收集细胞,Western blot检测periostin、PCNA、FN、TGF-β1蛋白的表达水平;细胞免疫荧光检测periostin蛋白表达和定位。另外,细胞随机分为control组、PDGF组、PDGF+空质粒转染(PDGF+sh-nc)组和PDGF+periostin沉默质粒(PDGF+sh-periostin)组,后3组以10 μg·L -1 PDGF孵育6 h后终止培养,Western blot检测periostin、PCNA、FN、TGF-β1表达水平。结果 PDGF上调periostin蛋白表达,6 h达到高峰,12 h明显回落;细胞免疫荧光检测结果显示,PDGF刺激下periostin在胞质表达明显增强。PDGF可导致PCNA、FN、TGF-β1表达增强。periostin沉默质粒能够抑制PDGF引起的系膜细胞增殖和细胞外基质表达,下调PCNA、FN、TGF-β1蛋白表达。结论 PDGF诱导periostin在体外培养的小鼠系膜细胞表达增加,并上调系膜细胞增殖水平和细胞外基质表达水平。periostin沉默质粒部分逆转PDGF引起的系膜细胞增殖和FN、TGF-β1蛋白表达。

NF-κΒ、COX-2在高糖培养的肾小管上皮细胞中的表达及意义

目的探讨核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)/环氧化酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)信号途径在高糖培养的肾小管上皮细胞增殖中的作用及意义。方法用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞,24、487、2 h后收集细胞,采用免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear autigen,PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况。结果①与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强;②正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB和COX-2蛋白的表达;③NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关。结论活化NF-κB,上调COX-2蛋白表达从而引起肾小管上皮细胞增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之一。

缬沙坦对糖尿病小鼠肾小球组织Notch通路活化及足细胞丢失的影响

目的探讨应用缬沙坦对糖尿病小鼠肾小球组织中Notch通路活化及足细胞丢失的影响。方法建立糖尿病小鼠模型给予缬沙坦治疗,观察小鼠肾小球细胞凋亡及足细胞脱落情况,采用Western blot检测Notch胞内域1(Notch intracellular domain 1,NICD1)、Hesl、Heyl、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白表达情况,Real-time PCR检测Hesl和Heyl mRNA表达情况。结果缬沙坦可降低糖尿病小鼠肾小球细胞凋亡及足细胞脱落,减少糖尿病小鼠肾小球组织中NICDl、Hesl、Heyl、Bax、cleaved caspase-3的表达,增加Bcl-2表达(P<0.05)。结论缬沙坦可通过抑制糖尿病小鼠肾小球组织中Notch通路的活化,减少足细胞凋亡和脱落。

三氧化二砷对高迁移率族蛋白诱导的大鼠滑膜细胞增殖的抑制作用

目的:探讨三氧化二砷(AS2O3)对高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导的大鼠滑膜细胞(RSC-364细胞)增殖的抑制作用及其机制。方法:将常规培养的RSC-364细胞分为正常对照组、HMGB1组及HMGB1加0、5、10、20、40和80μmol·L-1AS2O3实验组;MTT法检测不同浓度AS2O3对RSC-364细胞生长的影响,RT-PCR检测STAT1mRNA的表达变化,免疫细胞化学和流式细胞术检测STAT1、cyclinD1和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化。结果:①MTT结果显示,AS2O3可抑制HMGB1诱导的RSC-364细胞的增殖,80μmol·L-1AS2O3作用24h抑制率可达88.18%,其抑制作用呈时间和浓度依赖性(P<0.05或P<0.01);②与对照组比较,HMGB1组STAT1mRNA及STAT1、PCNA、cyclinD1蛋白表达量增强,AS2O3组STAT1mRNA及STAT1、PCNA、cyclinD1蛋白降低,并呈剂量依赖性(P<0.01);③STAT1与cyclinD1蛋白表达呈正相关关系(r=0.842,P=0.001)。结论:AS2O3能够抑制HMGB1诱导的滑膜细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT1的活性从而下调细胞周期调节蛋白cyclinD1的表达有关。

INF-γ对体外培养的系膜细胞HMGB1和MMP-2表达的影响

目的:探讨INF-γ对体外培养的人肾小球系膜细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响及可能机制,为系统性红斑狼疮(SLE)肾脏损害的治疗提供依据。方法:将常规培养的人肾小球系膜细胞分为正常对照组和INF-γ刺激组,于6、12和24 h收集细胞和上清,RT-PCR和免疫细胞化学法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;双抗夹心ELISA法检测细胞培养上清中HMGB1和MMP-2表达;免疫细胞化学法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和MMP-2表达。结果:与对照组比较,INF-γ刺激组系膜细胞PCNA蛋白表达强度增加,INF-γ刺激12和24 h时系膜细胞中HMGB1 mRNA水平明显增加(P<0.01),HMGB1蛋白表达强度增加;培养上清中HMGB1浓度明显增加(P<0.01);与对照组比较,INF-γ刺激组系膜细胞中MMP-2表达强度增加,培养上清中MMP-2蛋白水平升高(P<0.01);培养上清中HMGB1浓度与MMP-2蛋白表达量呈正相关关系(r=0.915,P<0.01)。结论:INF-γ通过促进系膜细胞合成和分泌HMGB1而上调MMP-2的表达,可能与SLE肾脏损伤有关联。

肾缺血再灌注对大鼠肾小球超微结构及负电荷位点的影响

目的探讨肾缺血再灌注损伤时肾小球超微结构及肾小球负电荷位点(anionic sites,AS)的变化。方法取SD大鼠30只,复制肾缺血再灌注模型,随机分为假手术组(n=18)及缺血再灌注组(n=12),以聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)为阳离子探针标记肾小球滤过膜AS,透射电镜观察肾缺血再灌注对大鼠肾小球超微结构及AS的影响。结果①假手术组电镜下肾小球结构正常,缺血再灌注组肾小球足细胞足突排列紊乱,有明显的融合现象。②假手术组肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)外透明层AS比较清晰,呈连续的规则点线状排列,AS数目(19.3±1.7)/μm;缺血再灌注组GBM外透明层AS排列稀疏,AS数目(16.6±1.0)/μm,PEI颗粒小,2组差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾缺血再灌注时出现肾小球上皮细胞足突融合、肾小球滤过膜的AS减少等病理性损伤,这些变化可能是肾缺血再灌注损伤大鼠蛋白尿产生的主要机制。

异丙酚对第三丁基过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用

目的观察异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的心肌细胞凋亡的影响并探讨可能的机制。方法采用SD新生大鼠进行心肌细胞原代培养。实验分为5组:正常对照组、t-BHP组和异丙酚1、10、30μmol.L-1组。分光光度计法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物岐化酶(SOD)活性;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞线粒体活性,罗丹明123(Rhodamine123)荧光染色、流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3的表达。结果与正常对照组相比,100μmol.L-1的t-BHP处理心肌细胞4 h后,细胞内GSH水平明显下降(P<0.05),MDA含量增加(P<0.01),抗氧化酶SOD活性降低(P<0.01),细胞线粒体活性降低(P<0.01),线粒体膜电位ΔΨm明显下降(P<0.01),细胞凋亡率和caspase-3的表达明显升高(P<0.01);异丙酚10、30μmol.L-1能减少过氧化氢所致的细胞中MDA含量升高;提高SOD活性和GSH水平;提高线粒体活性、膜电位;抑制心肌细胞凋亡和caspase-3的表达升高(P(0.05,P(0.01)。结论异丙酚能减弱过氧化氢所致的心肌细胞凋亡,其作用机制可能是通过减少活性氧自由基导致的细胞膜氧化损伤、提高线粒体活性、维持线粒体的膜电位,从而抑制心肌细胞凋亡的发生。

自噬与糖尿病肾病关系的研究进展

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）作为糖尿病最常见并发症之一,发病机制复杂,严重危及糖尿病患者的生命健康。研究发现自噬与DN的发生存在一定的关联性;然而,相关基础研究仅处于认识阶段,仍需进一步深入探讨。因此,对DN发病机制及有效治疗方法的研究已经成为代谢性疾病领域的重要研究课题。

L-精氨酸对糖尿病大鼠心肌组织钙泵及钠钾泵功能的影响

目的 :探讨左旋精氨酸 (L 精氨酸 )对实验性糖尿病大鼠心肌组织钙泵及钠 钾泵功能的影响。方法 :应用链脲佐菌素 (STZ)制备大鼠糖尿病模型 ,随机分为糖尿病模型组、L 精氨酸组、正常对照组 ,用药第 8周末处死动物 ,检测血糖、血中NO含量和NOS活性 ,以及心肌组织的Ca2 + ATP酶、Na+ K+ ATP酶活性 ,分析L 精氨酸对糖尿病大鼠心肌钙泵及钠 钾泵功能的影响。结果 :与模型组比 ,L 精氨酸可以明显降低糖尿病大鼠血糖 ((8.5± 2 .4 )mmol/Lvs (2 5 .8± 4 .3)mmol/L ,P <0 .0 1) ,增加血清中NO含量及NOS活性 (P <0 .0 5 ) ,使心肌组织中的Ca2 + ATP酶及Na+ K+ ATP酶活性明显增加 ((4 6 .5± 3.7) μmol/(mg·h)vs (4 2 .9± 4 .5 ) μmol/(mg·h) ,(2 5 .9± 3.6 ) μmol/(mg·h)vs (18.3± 3.2 ) μmol/(mg·h) ,P <0 .0 5 )。 结论 :糖尿病大鼠心肌存在着钙泵及钠 钾泵功能障碍 ,适当补充外源性L 精氨酸对于改善糖尿病大鼠心肌钙泵及钠

大肠癌中错配修复酶hMLH1、hMSH2及环氧化酶-2表达的研究

目的观察大肠癌中环氧化酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )、人类mut s同系物 1 (humanmut lhomologue 1 ,hMLH1 )、人类mut s同系物 2 (humanmut shomologue 2 ,hMSH2 )的表达。 方法应用COX 2、hMLH1、hMSH2多克隆抗体 ,采用免疫组织化学方法检测 78例大肠癌手术切除标本中COX 2、hMLH1、hMSH2蛋白的表达情况。结果在所检测的 78例大肠癌组织中 ,hMLH1表达的缺乏率为 2 9.4 9% ,hMSH2表达的缺乏率为 2 8.2 1 % ,COX 2表达阳性率为 74 .36 %。结论在大肠癌中hMLH1、hMSH2蛋白均有一定的缺乏率 ,一部分大肠癌中COX 2呈阳性表达 ,提示大肠癌的发生至少有 2种可能的途径即错配修复酶缺陷和COX