河北省预防兽医学重点学科建设中存在的问题及对策

为了更好地发挥预防兽医学重点学科的优势,提出了建设河北省预防兽医学重点学科的必要性和重要性,总结了采取的建设措施,并对建设过程中出现的问题提出了相应的对策。

预防兽医学教学团队特色与建设实践

河北科技师范学院预防兽医学教学团队是在长期的教学科研中形成的一个优秀教学群体,从团队设置、专业设置、课程设置等方面阐述了该团队的特色与建设实践。

河北省5株牛支原体的分离鉴定和药敏试验

为了确定肉牛场犊牛患呼吸道疾病死亡的致病原,本试验采集河北省秦皇岛地区5个肉牛养殖场病牛的肺脏组织进行病原的分离培养,采用染色镜检、培养特性观察、支原体特异性oppD/F基因鉴定、16S rRNA序列比对和同源性分析鉴定分离菌株,并通过药敏试验筛选敏感药物,检测中西药对分离菌株的抑菌效果。结果显示,分离菌株在PPLO肉汤固体基础培养基上为针尖大小白色菌落,瑞氏染色菌体呈球状;oppD/F基因和16S rRNA基因扩增均可得预期目的条带,16S rRNA基因序列与NCBI中牛支原体参考序列同源性达99%,在遗传进化树中处于同一分支,共从病牛肺脏分离鉴定出5株牛支原体,分别命名为ZYT-1~ZYT-5;药敏试验结果显示,5株牛支原体分离菌株对恩诺沙星、环丙沙星、土霉素和氟苯尼考极度敏感,对中药苏木、五味子、白头翁和乌梅极度敏感。结果表明,肉牛场患病犊牛的致病原为牛支原体,本试验结果可为当地牛支原体感染临床病例的治疗用药提供参考依据。

河北省部分地区肉、蛋食品大肠杆菌污染状况的检测

为了解河北省肉食品大肠杆菌污染状况,从河北省内不同地区集贸市场和超市随机采集了生活用肉、蛋类等105个样品,采用国家标准法和PCR方法对样品进行了大肠杆菌的检测与鉴定。结果表明,从105个样品中检测到大肠杆菌19株,大肠杆菌总阳性率18.1%。其中,生鸡肉、生猪肉、生鸡蛋的大肠杆菌阳性率分别为35.3%,23.8%,16.7%;生羊肉、生牛肉、生鸭蛋、生虾没有检出大肠杆菌。19株大肠杆菌中从生鸡肉样品中检出产志贺样毒素大肠杆菌2株。河北省肉类食品总体上大肠杆菌污染程度较轻,但生鸡肉中大肠杆菌的检出率较高。

河北省滦县牛梨形虫的分子检测

本研究旨在检测河北省滦县牛梨形虫的感染情况。采集滦县牛血液样本28份,并提取基因组DNA;根据已发表的梨形虫Tams1,P32表面蛋白以及18S rRNA基因序列,设计6对梨形虫特异性引物,以牛血液基因组DNA为模板,对不同梨形虫进行PCR或巢式PCR扩增。结果表明,在28份DNA样本中检测出双芽巴贝斯虫阳性样本7份,阳性率为25.00%;其他牛巴贝斯虫阳性样本3份,阳性率10.71%;而环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫均未检测到阳性样本。

河北省新乐市羊梨形虫分子检测

为检测河北省新乐市羊梨形虫的感染情况,采集河北省新乐市羊血液样本31份,并提取基因组DNA;根据梨形虫18S rRNA基因序列设计5对特异性引物,以羊血液基因组DNA为模板,对梨形虫进行巢式PCR扩增。结果表明,在31份DNA样本中检测出4份吕氏泰勒虫(12.9%),而尤氏泰勒虫、中华泰勒虫和羊巴贝斯虫均未检测到阳性样本。

省级重点实验室服务本科教学的机制探讨

省级重点实验室肩负着科研水平提升和服务教学的双重任务,如何充分发挥其特色和优势服务于本科教学,是摆在各高校面前的一项重要课题。结合河北省预防兽医学重点实验室建设和发展的实际,从强化本科教学的中心地位、科研促进教学的有效途径、实验室开放、实验室管理等方面进行了探析,从理论上提出了适合学校实情的关于实验室建设的可行性建议,以求有效地指导教育、教学实践。

河北省犊牛腹泻大肠杆菌致病性及耐药性分析

为确定河北省犊牛腹泻大肠杆菌的致病性与耐药性,本研究对2018年1月至2019年6月期间从河北省石家庄、保定、承德、唐山、廊坊的部分肉牛场腹泻犊牛样品中分离到的50株大肠杆菌进行了致病性试验、药物敏感性试验、毒力基因和耐药基因检测。结果显示:50株分离菌均对小鼠具有致病性,致病菌占比100%(50/50)。毒力基因fyuA、irp2、eaeA、ler检出率分别为68.0%、66.0%、34.0%、34.0%。50株分离菌均对15种抗生素中的2种及以上表现为耐药,对10种及以上抗生素耐药的菌株占比达34%(17/50);分离菌对土霉素、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星4种药物表现为高度耐药,耐药率分别为90%、90%、94%、100%。除四环素类tetD基因检出率为0外,其它耐药基因均有检出,其中四环素类tetC、氨基糖苷类aadA1、喹诺酮类gyrA、gyrB基因检测率高达100%。试验的50株大肠杆菌均具有较强的毒力和多重耐药性。本研究为河北省大肠杆菌所致犊牛腹泻病的防治提供了实验依据。

河北省蛋种鸡ALV携带率及亚群检测

为了解河北省蛋种鸡群ALV携带情况,采集7个种鸡场2024份样品,采用ELISA法检测ALVp27抗原,结果显示:种鸡场ALVp27检出率为85.71%,蛋种鸡群个体ALVp27携带率为8.99%,其中,坝上长尾鸡和太行鸡ALVp27携带率为8.39%~31.30%,大午京白939和海兰褐ALVp27携带率为0.56%~1.43%。通过阳性样品接种鸡胚成纤维细胞,运用PCR方法对其进行分型,结果显示:蛋种鸡群J亚群ALV感染率为9.00%,A/B亚群ALV感染率为0.15%,其中坝上长尾鸡J亚群ALV感染率为12.6%,太行鸡J亚群ALV感染率为15.44%,海兰褐J亚群ALV和A/B亚群ALV感染率皆为3.34%,京白939J亚群ALV和A/B亚群ALV感染率同为0.56%,且182份阳性样品中J亚群ALV感染率达100%。由此表明,河北省不同鸡场不同品种蛋种鸡个体ALV携带差异较大,且流行亚群主要以J亚群为主。

2018年~2019年河北地区蛋鸡源大肠杆菌流行病学调查与分析

为了解河北地区蛋鸡源大肠杆菌血清型、耐药性及耐药基因等流行病学特点,本研究对2018年~2019年采集自河北地区病死鸡病料组织173份样品,通过细菌分离纯化、PCR法分离鉴定得到120株大肠杆菌,采用O血清型玻板凝集试验、K-B药敏纸片法及PCR法对其进行血清型、耐药性及耐药基因研究,并分析其流行病学特点。结果显示,分离的120株大肠杆菌分属于6种血清型,以O78型(74.2%)、O2型(11.7%)和O89型(9.2%)为主要流行的血清型;分离的大肠杆菌对磺胺二甲氧嘧啶、头孢拉啶、林可霉素等14种药物耐药性较高,其耐药率45.8%~98.3%,对其它药物的耐药率15.0%~43.3%,分离菌株呈现多重耐药性,耐11(10.83%)、16(9.17%)、17(9.17%)种药物的菌株最多;分离的大肠杆菌检测出29种耐药基因,耐药基因ant-Ia、tetC、tetB、tetA4、aadA1、blaTEM、OXA-1、tetM4、gyrB、floR、gyrC、gyrE、blaCTX-C5、gyrA、dhps、aaC2、strA检出率42.0%~99.0%,其它耐药基因检出率38.3%~19.2%;分离菌株均携带多重耐药基因型,以同时携带16(18.33%)、17(15.0%)、18(15.83%)种耐药基因为主要流行基因型,经分析耐药表型与耐药基因型携带基本呈正相关。本研究为河北地区蛋鸡大肠杆菌病的防控提供了参考。

河北部分腹泻仔猪源大肠杆菌整合子-基因盒的分子流行病学调查

为调查河北地区腹泻仔猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子-基因盒的流行分布情况及对细菌耐药性的影响,试验在测定仔猪源大肠杆菌对常用21种抗菌类药物的耐药谱的基础上,利用PCR技术对分离株的整合子-基因盒系统进行扩增检测,并对携带的耐药基因进行序列分析。结果表明：97.5%的分离菌株检测到Ⅰ型整合子,39株Ⅰ型整合子阳性菌株中24株扩增出四种类型的耐药基因盒,以编码氨基糖苷类和甲氧苄啶耐药基因的aad A和dfr A为主,基因盒排列dfr A17＋aad A5（30.8%）及dfr A1＋aad A1（25.6%）较为流行。说明河北地区仔猪源大肠杆菌多重耐药现象非常严重,Ⅰ型整合子-基因盒普遍流行,菌株的多重耐药与Ⅰ型整合子呈高度正相关。

猪圆环病毒2型河北株全基因组序列分析

为了解秦皇岛及周边地区猪圆环病毒2型（PCV-2）分子流行病学变化特点,试验从20个疑似患猪圆环病毒病的猪场采集肺脏、脾脏、淋巴结、扁桃体样本24份,采用PCR方法检测样品中PCV-2感染情况,对4株PCV-2河北流行株的全基因组进行扩增、克隆和测序,并将全基因组序列与国内外主要流行毒株进行同源性比对及构建系统进化树。结果表明：在24份样品中,有20份样品为PCV-2阳性,阳性率达到83.33%,其中4株PCV-2河北流行株全基因组序列全长均为1 767 bp;经序列比对与进化树分析发现,均与当前流行的PCV-2b型毒株聚为一支,同源性为95.9%-99.9%。说明PCV-2b型为秦皇岛及周边地区的主要流行毒株。

PRRSV河北地方分离株ORF5基因序列分析

为了分析河北秦皇岛和唐山部分地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因变异情况,对采集自秦唐部分地区在2009年的临床发病猪肺组织,提取其RNA,通过RT-PCR扩增样本中PRRSV的ORF5全序列,并对其进行生物信息学分析。应用DNA Star软件分析序列,系统进化分析表明,它们与国内2006年-2007年间的分离的JXA1、HUB1、HEB1等高致病毒株亲缘关系较近,而与更早的分离株和疫苗MLV株亲缘关系较远。

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株NSP2基因的序列分析

为了分析河北省流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2基因的变异情况,试验对2009年采自秦唐部分地区和廊坊地区的临床发病猪肺组织提取RNA,通过RT-PCR扩增样本中PRRSV的NSP2全序列,并对其进行生物信息学分析,应用DNAStar软件将其与VR-2332、CH-la、MLV、BJ-4、HB-1、HB-2、JXA1、HUB1、HEB1等毒株进行序列比对。结果表明:河北地方株NSP2基因全长2 850 bp,编码的氨基酸均缺失30个不连续的氨基酸;其与国内2006—2007年间分离的JXA1、HUB1、HEB1等高致病毒株亲缘关系较近,而与更早的分离株和疫苗MLV株亲缘关系较远。

河北地区鸡传染性支气管炎病毒的遗传变异分析

为确定河北地区鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及遗传演化情况,本研究对来自河北主要养鸡地区鸡场的118份疑似IBV感染鸡的病料样品经SPF鸡胚进行病毒分离,并对传至第3代的尿囊液经PCR扩增IBV S1基因并测序后,以GenBank中的IBV疫苗株、国内外部分流行株共53株作为参考病毒,利用DNAStar 7.1软件分析分离株S1基因的同源性。采用MEGA 7.0软件中的Neighbor-Joining方法构建S1基因的遗传进化树,并分析S1基因编码的氨基酸序列。采用RDP4、SimPlot软件分析分离病毒株的重组事件。结果显示,分离到11株IBV,且其S1基因全长1614 bp~1620 bp,编码约540个氨基酸。S1基因的同源性分析结果显示,11株分离株之间的同源性为92.8%~99.9%;11株分离株与国内外53株参考株之间的同源性为73.0%~96.7%,与国内常用疫苗株M41、H120、W93、Ma5和QX的同源性为74.7%~96.1%。遗传进化分析结果显示,11株分离株与GI-19基因型(QX型)IBV属于同一分支。序列分析结果显示,11株分离株S1基因及其编码氨基酸序列与参考株相比均发生了不同程度的突变,主要突变位点在其与血清型特异性和病毒中和表位相关的高变区(aa38~aa67、aa91~aa141和aa274~aa387)内。基因重组结果显示,分离株HB.SJZ.21和HB.XT.1是两株重组病毒,HB.SJZ.21株可能是由HB.XT.9株和HB.SJZ.8株重组而成,HB.XT.1株可能是由HB.SJZ.8株和智利分离株重组而成。上述结果表明,河北地区IBV流行株为GI-19基因型,与疫苗株相比存在不同程度的变异,且分离株之间存在重组现象。本研究为河北地区鸡传染性支气管炎的流行病学调查及免疫防控提供了参考。

河北地区水貂源大肠杆菌的分离鉴定及致病性与耐药性研究

为分析河北地区水貂源大肠杆菌的致病性与耐药性,本研究对河北地区送检病死水貂采集组织样品,经分离鉴定、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析,共分离得到24株水貂大肠杆菌。对分离菌株进行致病性试验、药敏试验、毒力基因和耐药基因检测。结果显示,24株大肠杆菌感染小鼠后小鼠死亡率为20%~100%;24株分离菌中有22株检测到毒力基因,fimC毒力基因检出率最高,为70.83%(17/24);分离的24株株大肠杆菌耐药性较强,对替米考星、土霉素、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、复方新诺明耐药的菌株占80%以上,对头孢曲松最敏感,敏感菌株占66.67%(16/24),且分离菌均具有多重耐药性,耐5种以上药物的菌株占比高达100%;24株大肠杆菌均检测到耐药基因,耐药基因检出率为4.17%~79.17%,其中氨基糖苷类耐药基因addA1(79.17%)、喹诺酮类耐药基因gyrA(75%)、gyrB(70.83%)检出率较高,β-内酰胺类耐药基因ctx-M(20.83%)和SHV(4.17%)检出率较低;未检测到tetA、tetC、sul1、mefA耐药基因。上述结果表明,分离菌对小鼠均具有一定的致病力,且毒力基因检出数越多的菌株对小鼠的致病力越强;β-内酰胺类、氨基糖苷类和喹诺酮类的耐药基因与耐药表型基本相符,分离菌的其余耐药基因与耐药表型不符,提示分离的大肠杆菌可能存在其他耐药机制。本研究为河北地区水貂大肠杆菌病的防治提供参考依据,为大肠杆菌的致病机制和耐药机制的研究奠定基础。

E. tenella河北株重组蛋白IL-2-AMA-1对雏鸡血清主要细胞因子和免疫器官指数的影响

为了确定E.tenella河北株AMA-1基因在毕赤酵母系统中表达产物-重组蛋白IL-2-AMA-1对鸡血清主要细胞因子和免疫器官指数的影响,将150只雏鸡分成5个组,每组30只,第1,第2组分别为阴性对照组和阳性对照组,第3,第4,第5组在7,14,21日龄时分别肌肉注射重组AMA-1蛋白50,100,150μg。在28日龄时,除阴性对照组外,每只鸡经口灌服0.5 mL孢子化卵囊液,其中E.tenella孢子化卵囊含量1.6×10^8个/L,在试验的第14,21,28,35天时每组采集5只鸡心血收集血清,测定其IL-2,IFN-γ的质量浓度。试验第28天时对采血的鸡只剖杀,取脾脏、胸腺、法氏囊进行称质量,并计算免疫器官指数。结果表明,第3组血清IL-2和IFN-γ含量最高,在试验的第21,28,35天时均显著高于第1第2组;在试验的第21,35天时血清IL-2的质量浓度,试验的第35天时血清IFN-γ的质量浓度,与第4组比较也达差异显著水平(P<0.05)。第3第4第5组的脾脏指数、胸腺指数和法氏囊指数均显著高于第2组(P<0.05),与第1组比较差异不显著(P>0.05)。由此表明,适量的重组蛋白IL-2-AMA-1能显著提高雏鸡感染球虫前后的免疫水平,从而提高抗球虫能力。

常用中草药对水产动物致病菌体外抑菌效果研究

试验旨在探讨黄柏、诃子、知母、苏木等常用中草药对水产动物致病菌的体外抑菌效果,为今后水产养殖细菌性疾病的防控提供参考。以美人鱼发光杆菌、嗜水气单胞菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌临床分离株为试验菌株,以抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及联合抑菌指数(FICI)作为检测指标,研究常用中草药对水产病原菌的抑菌活性。采用水提法提取中草药有效成分,并通过琼脂平板打孔法测定中草药对水产致病菌抑菌圈,微量肉汤稀释法测定中草药MIC和MBC及微量肉汤棋盘稀释法测定联合抑菌指数(FICI)。结果显示,16种中草药对水产致病菌具有不同程度的抑菌作用。药敏试验结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种水产致病菌均具有抑菌效果,抑菌圈直径在10.5~29.0mm之间,而4种病原菌对马齿苋均表现为耐药;MIC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MIC值为7.81~250.00mg/mL;MBC检测结果显示,苏木、女贞子、夏枯草、青皮对4种病原菌的MBC值为7.81~500.00mg/mL;联合抑菌试验结果显示,苏木与夏枯草、女贞子及青皮联用仅对美人鱼发光杆菌起到协同抑菌作用,对嗜水气单胞菌、创伤弧菌及哈维氏弧菌均无抑菌作用,女贞子和青皮组合仅对哈维氏弧菌抑菌作用为相加作用,该组合在抑菌效果上对其他病原菌表现为无关或颉颃作用,其他药物组合在抑菌效果上对4种病原菌则表现为无关或颉颃作用;联合抑菌圈测定结果表明,中草药联合使用对4种病原菌抑菌作用不一。本试验结果表明常用中草药对水产动物致病菌具有一定程度的抑菌作用。