基于IRS-1/PI3K信号轴探究补肺健脾方对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响

目的探究补肺健脾方(Bufei Jianpi formula,BJF)通过调控IRS-1/PI3K信号轴对COPD大鼠骨骼肌线粒体损伤的影响。方法将60只SPF级SD大鼠随机分为空白(Control)组、COPD稳定期模型(Model)组、氨茶碱(Am)组、补肺健脾方(BJF)组、吡格列酮(PIO)组以及补肺健脾方+吡格列酮(BJF+PIO)组,10只/组。采用烟熏加鼻腔滴菌(肺炎克雷伯杆菌)的方法建立COPD稳定期大鼠模型,自第9周开始给药至20周结束后取材,每周给予大鼠体重测量。分别对肺组织和骨骼肌组织进行常规切片与HE染色,并于光镜下观察其相应的病理学改变。分别于第0、8、20周采用非束缚全身体积描记系统观察大鼠肺功能,包括VT、PEF、EF50。采用qPCR技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、PGC-1α以及Leptin mRNA的表达。采用Western blot技术检测大鼠骨骼肌组织中IRS-1、PI3K、AKT、p-AKT、PGC-1α、TFAM和Leptin蛋白的表达。结果光镜观察显示与Control组比,Model组肺病理可见肺泡间质以及肺支气管存有大量的炎性细胞浸润,部分肺泡壁出现断裂并融合形成气腔、纤维网被破坏等;与Model组比,用药治疗后各组肺泡壁的断裂以及纤维网的破坏均得到改善,支气管中炎性细胞浸润减轻,其中以BJF组与Am组尤为明显。用药治疗后各组骨骼肌病理与Model组比,可不同程度改善肌纤维之间排列间隙、萎缩与断裂,肌细胞胞质染色不均一等,其中以BJF组疗效较为显著。与Control组比,Model组PEF、VT和EF50第8周起显著降低(P<0.01),BJF组、BJF+PIO组和Am组可以显著提高PEF、EF50(P<0.01)。与Control组比,Model组中IRS-1、PGC-1α和PI3K mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Leptin mRNA与蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与Model组比,BJF组IRS-1、PGC-1α、PI3K mRNA与蛋白表达水平显著增高(P<0.05,P<0.01);PIO组IRS-1 mRNA表达水平显著增高(P<0.01);BJF+PIO组PGC-1αmRNA水平显著增高(P<0.01),IRS-1、PI3K mRNA与蛋白水平显著升高(P<0.05,P<0.01);Am组中PI3K mRNA与蛋白表达水平显著增高(P<0.01);4个用药组中Leptin mRNA的表达水平均显著降低(P<0.01),除Am组外,其余3个用药组Leptin蛋白表达显著降低(P<0.01);与Control组比,Model组股四头肌组织中TFAM、p-AKT蛋白表达有明显的下降趋势,各治疗组的TFAM、p-AKT蛋白表达均有升高趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论补肺健脾方可通过调控IRS-1/PI3K信号轴,改善骨骼肌线粒体的损伤,同时提高PGC-1α与线粒体转录因子TFAM的表达,增强线粒体的生物合成,从而减轻肺与骨骼肌组织的病理性损伤。

宣肺解毒方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎的作用机制探讨

目的探究宣肺解毒方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎的机理研究。方法除空白组外,其余组采用气管插管的方法建立MDR-PA(9×10^(8) CFU/mL,0.5 mL)肺炎大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、宣肺解毒方低剂量组、宣肺解毒方中剂量组、宣肺解毒方高剂量组以及亚胺培南西司他丁组,每组12只;以上除空白组与模型组外,剩余给药组统称为干预治疗组。造模1 d后,宣肺解毒方低、中、高剂量组分别给予相应剂量的宣肺解毒方(Xuanfei Jiedu Formula,XFJDF)灌胃,亚胺培南西司他丁组给予亚胺培南西司他丁(imipenem,IPM)腹腔注射,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,每天2次,持续7 d。观察大鼠的一般状态、体重变化、肺湿重/肺干重(W/D),采用苏木素-伊红(HE)染色法于光镜下观察大鼠肺组织病理学改变,采用酶免疫吸附测定法检测大鼠血清中IL-1β、TNF-α、TGF-β、IL-6炎症因子水平,采用比色法检测大鼠血清中GSH含量与MPO活性,采用TBA法检测大鼠血清中MDA含量,试剂盒法检测总抗氧化能力T-AOC;采用免疫组化法对肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65蛋白进行定位与半定量观察,采用qPCR和Western Blot技术检测大鼠肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组比,模型组大鼠反应迟缓,呼吸频率加快、呼吸杂音增多且出现不同程度寒颤,饮食饮水减少,体重下降;肺W/D(P<0.01)显著升高,肺组织的肺泡腔以及肺支气管周围存有大量炎性细胞浸润,部分肺泡壁出现断裂融合形成气腔并伴有炎性渗出,肺间质增厚,局部可见肺纤维形成等;血清中IL-1β、TNF-α、TGF-β、IL-6水平明显升高(P<0.01),MDA含量增加、MPO活性增强、GSH含量与T-AOC能力降低(P<0.01),肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比,干预治疗组均不同程度改善上述指标变化(P<0.05,P<0.01),以宣肺解毒方高剂量组以及亚胺培南西司他丁组最为显著(P<0.05,P<0.01)。结论宣肺解毒方能够显著改善MDR-PA大鼠的一般状态、体重、肺W/D以及肺病理,降低炎症与氧化应激反应,其作用机制可能与宣肺解毒方抑制肺组织中TLR4/Myd88/NF-κB通路表达有关。

慢性阻塞性肺疾病相关性肾损伤发生机制研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以持续存在的呼吸道症状和气流受限为特征的疾病,除呼吸道病变以外,其还存在多种合并症。肾损伤是COPD重要的肺外合并症之一,发病率高,起病隐匿,不及时干预将进展为慢性肾病,极大地增加了COPD患者的死亡风险和经济负担。肺与肾生理上相互联系,病理上相互影响,但COPD相关性肾损伤的发生机制尚不明确。本文针对COPD相关性肾损伤发生机制的研究进展进行综述,以期为COPD相关性肾损伤的临床防治及基础研究提供参考。

当归芍药散对PM2.5致雄性生殖损伤大鼠睾丸组织代谢组学的影响

目的:通过代谢组学技术评价当归芍药散对PM2.5致雄性生殖损伤大鼠睾丸组织的影响。方法:18只雄性SD大鼠分为对照组、PM2.5组和当归芍药散组,每组6只。除对照组外的大鼠进行为期12周的PM2.5实时浓缩暴露。自暴露第9周起,对照组、PM2.5组予以生理盐水(2 mL/只)灌胃,当归芍药散组给予当归芍药散[2 g/(kg·d)]灌胃。第12周结束后取材,光镜下观察肺组织及睾丸组织病理改变,采用代谢组学技术分析大鼠睾丸组织代谢物的变化。结果:与对照组相比,PM2.5组大鼠肺组织出现肺泡壁断裂、炎症细胞浸润等病理表现;睾丸组织生精细胞层次减少,排列紊乱,精子及精子细胞减少;代谢组学分析结果显示,PM2.5组大鼠睾丸组织中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱等代谢物含量降低,当归芍药散组上述代谢物含量较PM2.5组回调(P<0.05),3组差异代谢产物主要涉及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢、α-亚麻酸代谢等5条代谢通路,其中甘油磷脂类代谢产物的改变较为显著。结论:PM2.5暴露可引起大鼠睾丸组织代谢紊乱,当归芍药散对其具有良好的保护作用,其机制可能与调控甘油磷脂代谢有关。

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠肠道黏膜屏障的影响

目的:探讨调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠肠道黏膜屏障的作用。方法:将SPF级SD大鼠随机分为空白(control)组、COPD模型(model)组、补肺健脾(BJ)组、补肺益肾(BY)组、益气滋肾(ZS)组和茶碱(Am)组。于第1~8周采用香烟烟雾暴露联合脂多糖滴注法制备COPD稳定期大鼠模型,第9~12周分别给予各组大鼠灌胃。观察动物一般情况,HE染色观察肺和结肠组织形态学变化,透射电镜下观察结肠组织超微结构变化,TUNEL法测定结肠组织细胞凋亡率,免疫组化染色检测结肠组织occludin(OCLN)和zonula occludens-1(ZO-1)蛋白表达,ELISA法检测血清二胺氧化酶(DAO)、肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)和D-乳酸(D-LA)水平。结果:与control组比较,model组大鼠出现进食减少、消瘦和大便溏薄等症状,支气管黏膜皱襞增多明显,肺泡结构紊乱,形成大的气腔,大量炎症细胞浸润;结肠黏膜结构破坏,大量上皮细胞坏死脱落,杯状细胞明显减少,吸收上皮细胞的微绒毛稀疏、缺损,细胞间隙增宽,细胞间连接装置损坏,结肠细胞凋亡率显著升高(P<0.01),结肠OCLN和ZO-1显著降低(P<0.01),血清DAO、IFABP和D-LA水平显著升高(P<0.01);与model组比较,调补肺肾三方治疗后大鼠上述胃肠道症状均明显改善,支气管和肺泡结构恢复,结肠黏膜结构基本完整,吸收上皮细胞和细胞间紧密连接结构损伤减少,结肠细胞凋亡率均明显降低(P<0.05),结肠OCLN与ZO-1水平均有不同程度升高,其中BJ和ZS组OCLN明显升高(P<0.05或P<0.01),各中药组ZO-1明显升高(P<0.05或P<0.01),BJ和ZS组ZO-1表达较Am组明显升高(P<0.05或P<0.01),ZS组ZO-1较BY组显著升高(P<0.01),血清DAO、IFABP和D-LA水平均显著降低(P<0.01)。结论:调补肺肾三法均能够通过减轻结肠上皮细胞与细胞间紧密连接损伤,降低肠道黏膜屏障通透性,缓解COPD大鼠肠道黏膜屏障损伤,从而保护肠道黏膜屏障完整性。

调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠肺与肠道炎症指标的影响

目的探讨调补肺肾三法对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠肺与肠道IL-6、IL-33和IFN-γ的调控。方法将60只SD大鼠随机分为空白(Control)组、COPD模型(Model)组、补肺健脾(Bufei Jianpi,BJ)组、补肺益肾(Bufei Yishen,BY)组、益气滋肾(Yiqi Zishen,ZS)组和氨茶碱(aminophylline,Am)组。第1-8周,采用香烟烟雾暴露联合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)滴注法制备稳定期COPD大鼠模型,对应给予生理盐水、补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方、氨茶碱灌胃4周,于第13周灌胃周期结束后取材。光镜下观察肺与结肠组织形态学改变,采用免疫组化法(IHC)对肺与结肠组织中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-33、干扰素(interferon,IFN)-γ蛋白进行定位与半定量观察。结果与Control组相比,Model组大鼠不仅支气管周围与肺泡腔出现大量炎症细胞及炎性渗出,结肠黏膜也出现了大量炎症细胞浸润,肺和结肠IL-6、IL-33和IFN-γ水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与Model组相比,各治疗组不仅支气管和肺泡炎症细胞浸润减少,而且结肠黏膜炎症细胞也出现减少,肺与结肠中IL-33和IFN-γ、结肠IL-6水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),BY、ZS、Am组肺IL-6水平显著降低(P<0.01)。肺IL-6与结肠IL-6水平呈正相关,肺IL-33与结肠IL-33水平呈正相关,肺IFN-γ和结肠IFN-γ水平呈正相关。结论调补肺肾三法均可以改善慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠肠道功能障碍,其机制可能与抑制肺与结肠中IL-6、IL-33和IFN-γ的释放,降低肺与肠道炎症反应有关。

基于《千金方》“肺脏·积气”篇的“积气致癌”理论探讨

原发性支气管肺癌(以下简称肺癌)是最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和病死率在全球范围内高居不下,越来越引起世界各国及广大学者的关注。肺癌病因繁多,病机复杂,现代医家多从虚、痰、瘀、毒论治,又有阴虚、气阴两虚、阳虚、阴阳两虚、痰瘀论、癌毒论、伏气学说、络病学说等,诸说纷纭。近年来,中医药在肺癌治疗及康复中发挥了重要作用,但往往扮演着辅助治疗的角色。历史上,中医学中并无“肺癌”之称谓,但诸多经典著述均有其病因、病状和治疗的专述。深入钻研中医学经典,挖掘经文深意,将有助于对肺癌成病机制及证治方药有更深刻更系统的认识。围绕唐代孙思邈《备急千金要方·卷第十七·肺脏·积气第五》展开了系统论述,分析了寒、热、怒、恚、喜、忧、愁等七气积聚导致肺癌发生的病机及其临床表现的异同;并结合其临床用药,阐述“积(积聚)气致癌”原理。七气中寒气、热气属外感邪气,怒气、恚气、喜气、忧气、愁气属内伤情志,与历代医家所论之六淫邪气(风、寒、暑、湿、燥、火)、七情内伤等相合,是对肺癌成因做出的高度概括。寒邪是肺癌发生的首要致病因素,邪积日久,正气亏虚,因虚致实,因实致虚,痰瘀毒互结,积久致癌,据此提出了“积气致癌”的假说,并探讨肺癌形成的中医学理论基础和可能机制,以期为肺癌的认识和治疗提供新思路。