显微分光光度计测量细胞DNA对肿瘤诊断和预后价值的研究

目的 :研究显微分光光度计测量细胞DNA对肿瘤诊断和预后的价值。方法 :应用OPTON 0 3型扫描分光光度计和改良的DNA Feulgen染色方法对 15例涎腺发生的肿瘤、17例恶性淋巴瘤、2 3例早期胃癌和 2 0例食管及贲门早期浅表癌的癌细胞DNA含量进行了测量。测量结果与病理组织学诊断及随访结果进行了对比分析。结果 :癌细胞DNA含量增高 ,胞核DNA含量分布广泛 ,出现非整倍体细胞核。非整倍体型早期食管癌的复发率较二倍体型早期食管癌高 (P <0 0 5 )。结论 :细胞光度术测量细胞DNA含量对鉴别良、恶性肿瘤可以提供客观依据。DNA倍体数对食管癌预后判断有一定价值。本研究建立的DNA Feulgen染色方法效果极佳。

兔肿瘤坏死血清的诱生条件及体外抗肿瘤作用的研究

本文探讨了在新西兰兔体内诱生含肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)的肿瘤坏死血清(Tumor Necrosis Serum,TNS)的适宜条件及其在体外抗肿瘤作用。结果表明:新西兰兔感染BCG二周再经LPS攻击1.5小时后,在其血清中能出现最高活性的TNF。检测TNS活性的靶细胞(L929)最佳浓度为1.5×10~5个/ml细胞,放线菌素D能明显增加靶细胞对TNS的敏感性。体外实验发现,TNS对小鼠L929细胞、YAC-1细胞,人ECO109细胞有明显细胞毒作用,而对人胃癌823细胞无作用,表明TNS具有选择性细胞毒性作用,而无种特异性。

针对Cox-2基因siRNA载体构建和沉默效应

目的构建针对人Cox-2基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对肺癌细胞Cox-2基因表达的沉默作用。方法设计Cox-2靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSINsi-hU6载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR检测Cox-2基因mRNA表达的变化。结果把针对Cox-2基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSINsi-hU6载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR检测显示,Cox-2基因的表达水平明显降低。结论成功构建出显著沉默细胞Cox-2基因表达的siRNA载体。

丙二醛对小鼠淋巴细胞的抑制作用

体内外实验观察脂质过氧化的终产物丙二醛对小鼠脾淋巴细胞活性和功能的影响。结 果表明，丙二醛可明显抑制鼠自身混合淋巴细胞反应，并抑制刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）和细菌脂多糖 （ＬＰＳ）分别诱导的Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖，对Ｔ细胞作用更明显，此抑制作用发生在有丝分裂原激活 淋巴细胞之后。提示：脂质过氧化产物参与了对机体淋巴细胞的损伤过程；为阐明由丙二醛造成的 免疫抑制的过氧化机理提供部分实验依据。

肾移植患者手术前后血清sIL-2R检测

目的:探讨血清可溶性白细胞介素2受体(sIL-2R)在肾移植急性排斥中的应用价值。方法:采用双抗体夹心ELISA法检测170例肾移植患者手术前后血清sIL-2R浓度。肾移植患者分为肾病组(n=27),慢性肾炎组(n=137),感染组(n=6),另设正常对照组(n=20)。结果:sIL-2R术后较术前明显升高者27例,分别为肾病组12例,慢性肾炎组9例,感染组6例。27例患者术后血清sIL-2R水平显著高于正常对照组(P<0.01),经临床证实为急性排斥者21例,余6例因感染引起。结论:血清sIL-2R浓度可以作为肾移植排斥反应早期诊断一个有实用价值的指标。

hTERT重组绿色荧光表达载体的构建与表达

目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERTmRNA表达水平。结果DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致。转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT。结论成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础。

肾移植受者T、B淋巴细胞及红细胞活性观察

目的 :观察肾移植术后受者T、B淋巴细胞及红细胞活性的变化并探讨其关系。方法 :测定 41例肾移植受者T、B淋巴细胞增殖反应及红细胞C3 b受体花环形成率 (C3 bRR)。结果 :T淋巴细胞增殖反应在术后 1～ 3周明显增强 ,7～ 8周减弱 ;B淋巴细胞增殖反应在术后 6～ 8周明显增强 ;急性排斥期间 ,T淋巴细胞增殖活性增强 ,未观察到B淋巴细胞增殖反应和红细胞C3 b受体活性的明显改变。术后红细胞活性逐渐增强 ,与血红蛋白的变化呈正相关 ,与淋巴细胞活性无明显相关关系。结论 :术后早期T淋巴细胞活性增强与移植物的刺激有关 ;动态观察T淋巴细胞增殖反应有助于急性排斥反应的诊断。术后B淋巴细胞活性逐渐增强的意义尚待阐明。