2019冠状病毒病相关血栓形成的研究进展

新型冠状病毒肺炎(2019冠状病毒病,coronavirus disease 2019,COVID-19)是由新型冠状病毒(严重急性呼吸综合征冠状病毒2,severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-Co V-2;简称新冠病毒)引起的一种呼吸系统传染病,是目前人类面临的最大的公共卫生问题。

华法林耐药突变体减弱人维生素K环氧化物还原酶与华法林的结合能力

目的探讨人维生素K环氧化物还原酶(VKORC1)耐药突变体对华法林耐药的机制。方法利用与华法林结合导致VKORC1电泳迁移率变化的原理进行电泳迁移实验,并通过酶联免疫吸附实验检测VKORC1的活性和华法林抑制VKORC1的半抑制浓度(IC_(50)),评价VKORC1耐药突变体与华法林的结合能力。结果华法林与VKORC1结合后,保护其柔性跨膜螺旋1(TM1)中的一个半胱氨酸免受N-乙基马来酰亚胺(NEM)的修饰,从而增加VKORC1的电泳迁移率。增加华法林浓度可以增加具有快速迁移效应的VKORC1。与野生型VKORC1相比,华法林耐药突变体的快速迁移效应减弱或消失,表明华法林与耐药突变体的结合能力减弱;且突变体快速迁移效应越弱,其对华法林的耐药性越强。结论VKORC1耐药突变体与华法林的结合能力减弱是华法林耐药的主要原因。

丘脑背内侧核损毁对帕金森病大鼠内侧前额叶皮层电活动的影响

目的:探讨丘脑背内侧核(MD)损毁对帕金森病(PD)模型大鼠内侧前额叶皮层(m PFC)锥体神经元电活动的影响,阐明MD在PD病理生理过程中的作用。方法:以6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑内注射损毁黑质致密部(SNc)复制PD大鼠模型,在大鼠脑中注射鹅膏蕈氨酸(IBO)损毁MD。将24只雄性SD大鼠随机分为正常组、SNc损毁组(PD模型组)、MD损毁组(MD中注射IBO)和SNc+MD联合损毁组(SNc损毁后1周损毁同侧MD),每组6只。酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色观察各组大鼠SNc和腹侧被盖区(VTA)中多巴胺神经元数量,尼氏染色判断电生理记录点的位置和MD损毁情况。观察各组大鼠m PFC中锥体神经元的放电频率、放电间隔(ISI)的变异系数和放电形式。结果:注射6-OHDA后,PD模型组大鼠损毁侧SNc中多巴胺神经元完全消失,同侧VTA中多巴胺神经元数较对侧明显减少(P<0.01);与正常组比较,SNc损毁组大鼠m PFC锥体神经元的放电频率明显升高(P<0.05),放电形式趋于爆发式活动(P=0.001),平均ISI变异系数增加(P<0.01);MD损毁2周后,SNc损毁组大鼠m PFC锥体神经元的放电频率较正常组明显增加(P<0.01),爆发式放电增多(P<0.01),平均ISI的变异系数增加(P<0.01);与正常组比较,SNc+MD联合损毁组大鼠m PFC锥体神经元的放电频率差异无统计学意义(P>0.05),爆发式放电增多(P<0.01),平均ISI的变异系数增加(P<0.01)。结论:MD对m PFC神经元的活动起重要的调节作用,MD的功能改变可能是PD病理生理过程中m PFC神经活动改变的重要原因之一。

邻近标记技术在神经生物学中的应用与展望

通过综述基于过氧化物酶和生物素连接酶的邻近标记技术的原理、应用及常见问题,重点回顾目前邻近标记技术在神经生物学领域主要用于突触亚区分子成分的研究并取得一些成果,分析在应用过程中面临的活体脑组织中探针输入和高背景等挑战。展望该技术将为系统地鉴定神经组织中高度复杂的动态相互作用蛋白质组及亚细胞结构蛋白质组提供前所未有的机会,也为寻找神经生物学中的关键分子提供有效途径。

α-常春藤皂苷诱导肝癌Bel-7402细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)诱导肝癌Bel-7402细胞发生铁死亡(ferroptosis)的可能机制。方法:采用梯度浓度的α-常春藤皂苷处理肝癌Bel-7402细胞24 h,MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC_(50))。将细胞分为空白对照组、α-常春藤皂苷(25μmol/L)组和α-常春藤皂苷(50μmol/L)组。谷胱甘肽试剂盒测定分组后细胞内GSH含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基xCT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)的表达,DCFH-DA探针用以检测细胞活性氧(ROS)水平。利用铁死亡抑制剂进行细胞功能恢复试验,测定了同时使用Ferrostatin-1和α-常春藤皂苷后的细胞活力、GSH含量、铁死亡相关蛋白表达水平以及ROS水平。结果:随α-常春藤皂苷浓度增加Bel-7402细胞的存活率显著降低,24 h对应Bel-7402细胞的IC_(50)为40.32μmol/L。α-常春藤皂苷能减少细胞内GSH含量,下调xCT和GPX4的表达,上调DMT1的表达和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制α-常春藤皂苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力、GSH含量恢复以及ROS生成减少。结论:α-常春藤皂苷可通过抑制GPX4和xCT的表达,促进DMT1的表达,诱导ROS大量生成并导致肝癌Bel-7402细胞铁死亡。

lncRNA HULC对肝癌细胞miRNA差异表达谱及ceRNA调控网络的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)肝癌高表达转录本(HULC)对肝癌细胞微小RNA(miRNA)差异表达谱及竞争内源性RNA(ceRNA)调控网络的影响。方法选取人肝癌细胞系BEL-7402,瞬时转染HULC siRNA以降低lncRNA HULC的表达。通过高通量测序选取表达具有差异的miRNA,并通过实时荧光定量PCR进行验证。基于参考基因组,预测新miRNA。通过基因富集分析及ceRNA调控网络,研究这些基因的潜在功能。结果经敲低lncRNA HULC表达后,通过高通量测序挑选出了9个表达差异显著的miRNA。5个miRNA表达下调,4个miRNA表达上调。通过miRDeep2打分,挑选出了15个分值较高的新miRNA。基因富集分析结果显示,表达下调的miRNA的靶基因的分子功能与丝氨酸tRNA连接酶活性、蛋白激酶活性、阳离子通道活性、钙转运ATP酶活性等有关;表达上调的miRNA的靶基因与硒代半胱氨酸裂解酶活性、过氧化物酶体机制靶向信号1结合、过氧化物酶体靶向序列结合、蛋白质N-末端结合、肿瘤坏死因子受体超家族结合等有关。miRNA-靶基因互作网络、显著富集功能-功能互作网络揭示靶基因与miRNA的关联性以及功能间的相关性。结论在肝癌细胞系BEL-7402中lncRNA HULC具有调节多个表达差异的miRNA的作用,通过ceRNA调控网络模式,影响肝癌的发生、发展。

一种基于细胞测定维生素K环氧化物还原酶活性的方法

维生素K环氧化物还原酶(VKOR)是开发抗凝药的重要靶点,其活性测定对鉴定靶向VKOR新型抑制剂具有重要的应用价值.目前测定VKOR活性的常用方法为基于报告基因的方法,是一种间接测定VKOR活性的方法,不能用于鉴定靶向VKOR新型抑制剂.为建立一种快速、直接测定VKOR活性的方法,首先建立了一种基于HPLC检测维生素K(VK)和维生素K环氧化物(VKO)的方法,该方法简便快速,准确性高,重复性好,各检测物色谱峰分离良好.在此基础上,利用GGCX基因敲除的细胞,建立了直接测定细胞内VKOR活性的方法,更加便捷地鉴定靶向VKOR抑制剂,为研发靶向VKOR新型抗凝药提供帮助.

B型血友病分子治疗策略的研究进展

B型血友病是维生素K依赖蛋白凝血因子Ⅸ(FIX)缺乏导致的一种伴X染色体隐性出血性疾病,其主要由基因突变导致。近年来,随着B型血友病致病突变的机制被逐渐阐明,针对不同致病机制的分子治疗策略也逐渐被关注。该文首先对FIX的分子结构、生物学功能及其在B型血友病的突变类型及数目进行阐述,然后对基于不同基因表达层面设计的针对不同致病机制的分子治疗策略进行综述,这将为B型血友病临床治疗药物的研发提供了新思路,同时,也对B型血友病患者的精准治疗具有重要意义。

GGCX基因致病性变异相关表型的部分研究进展

γ-谷氨酰羧化酶(γ-glutamyl carboxylase,GGCX)又称维生素K依赖性谷氨酰羧化酶,通过对维生素K依赖性蛋白特定的谷氨酸残基进行γ-羧基化修饰,参与凝血、骨代谢、血管钙化和细胞增殖等多种生物学过程。早期研究发现GGCX基因致病性变异导致凝血缺陷,该表型被称为维生素K依赖性凝血因子缺乏症1。近年来发现GGCX突变还可以导致其它多种临床表型,包括皮肤、眼科、骨和心脏的异常。其中皮肤异常表型最为常见,该表型被称为类弹性假黄瘤样综合征。本文就GGCX基因致病性变异相关表型进行综述,以期提高对相关遗传病的认识,从而有助于诊断和治疗。

二甲双胍在非霍奇金淋巴瘤中的研究进展

临床前研究表明腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活剂二甲双胍可以抑制淋巴瘤细胞的生长,不影响正常淋巴细胞的功能,同时可促进淋巴瘤细胞凋亡,改善肿瘤免疫环境。临床研究表明二甲双胍用于初治及维持治疗均可以提高非霍奇金淋巴瘤(NHL)化疗疗效,改善预后;通过对糖代谢的影响,改善血糖水平,减少类固醇糖尿病的发生。二甲双胍抗NHL的主要分子机制包括激活肿瘤细胞内AMPK,抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号、抑制关键的胆固醇合成、改善葡萄糖代谢、增强高细胞毒性T淋巴细胞活性等。目前研究显示,二甲双胍可能成为NHL治疗的一种新策略。