戊型肝炎与慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染的临床特征比较

目的分析比较戊型肝炎与慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染患者的临床特征,并初步探索戊型肝炎慢性化问题。方法对66例戊型肝炎与37例慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染患者的临床资料进行回顾性分析比较及统计。结果慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染患者较戊型肝炎患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)升高水平及发生率无显著差异,而在白蛋白(A)、白蛋白/球蛋白(A/G)及凝血酶原活动度(PTA)降低与肝纤维化系列各项指标增高方面更突出,消化道症状更重。结论慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染后肝功能损害更严重,凝血酶原时间长,慢性肝病特征常见,但单纯戊型肝炎患者慢性化问题也值得重视。

益肝散联合博尔泰力治疗儿童乙型肝炎病毒感染

目的 了解益肝散联合博尔泰力 (氧化苦参碱 )对儿童乙肝病毒感染的疗效。方法 在第 4、6月疗程结束时比较益肝散联合博尔泰力与博尔泰力对 8～ 14岁儿童乙肝病毒感染的疗效。结果 益肝散和博尔泰力治疗结束时综合疗效近期完全应答率为 2 2 .2 % ,部分应答率为 4 4.4 % ;血 HBV - DNA完全应答率为 2 2 .2 % ,部分应答率为 50 .0 % ,与博尔泰力治疗相比差异有显著性 ( P<0 .0 5) ,疗效更好。6月随访时综合疗效完全应答率为 2 7.8% ,部分应答率 4 4.4 % ;H BV- DNA完全应答率为 2 5.0 % ,部分应答率为 55.6 % ,与博尔泰力 (完全应答率 2 2 .2 % ;部分应答率 36 .1% ;HBV- DNA完全应答率为 2 2 .2 % ,部分应答率为 4 1.7% )相比疗效为好 ( P<0 .0 5)。毒副作用小。结论 益肝散和博乐泰力联用对儿童乙肝病毒感染治疗效果好 ,安全可靠 ,是治疗儿童乙肝病毒感染的有效方法。

163例慢性重型乙型病毒性肝炎合并自发性细菌性腹膜炎的临床分析

目的探讨慢性重型乙型病毒性肝炎合并自发性细菌性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis,SBP)临床特点,以提高疗效和改善预后。方法回顾性分析我科2008年1月至2010年12月住院的慢性重型乙型病毒性肝炎患者400例,合并SBP患者163例,男性137例,女性26例,年龄(44.21±11.30)岁。观察临床表现、血液检查、腹腔积液常规及细菌培养等情况,根据药敏及临床经验予抗生素治疗,观察疗效及转归因素分析。结果 163例慢性重型乙型病毒性肝炎合并SBP患者主要表现腹部压痛(75.46%)、腹胀(61.35%)、腹痛(52.15%)、反跳痛(47.24%),主要并发症为肝性脑病(30.06%)、肾功能不全(19.63%),少数表现为消化道出血、休克、发热。腹腔积液白细胞数和中性粒细胞比例升高者分别为17.79%(29/163)和16.56%(27/163);腹腔积液或血液细菌培养阳性率分别仅为2.35%或23.53%,几乎为革兰染色阴性杆菌。慢性重型乙型病毒性肝炎合并SBP的住院期间死亡率为4.29%,除外自动出院患者,其住院期间死亡率上升至15.56%,治愈率84.44%。年龄、肝性脑病、肾功能不全、总胆红素、凝血酶原时间在治愈组和无效组中存在统计学差异(P<0.05)。结论慢性重型乙型病毒性肝炎合并SBP患者的临床表现不典型,及时、经验性抗感染治疗可提高患者治愈率。

结核病Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究

目的研究Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法将雌性C57BL/6N小鼠40只,随机分为5组,即Mtb8.4/hIL-12嵌合基因、Mtb8.4基因疫苗组、BCG组、空载体组和PBS组。小鼠脾细胞培养上清液检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行细胞毒性T细胞(CTL)杀伤检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻,其效果优于卡介苗(BCG)组和Mtb8.4基因疫苗组。结论hIL-12与Mtb8.4构建成嵌合基因疫苗后,使Mtb8.4基因疫苗的免疫效力得到很大提高。

川南地区乙型肝炎病毒基因型的分布及临床意义

目的:初步了解乙型肝炎病毒基因型的分布及临床意义。方法:用特异性引物-聚合酶链反应的方法,对80例来自川南地区HBV-DNA阳性慢性乙型肝炎病毒感染者血清进行HBV基因分型,其中无症状携带者26例,轻、中度慢性肝炎35例,重型肝炎、肝硬化13例及肝癌6例。结果:80例血清标本中,B型64例(80%),C型12例(15%),B+C混合基因型4例(5%)。B型平均年龄低于C型(P<0.01);B型的HBeAg阳性率高于C型(P<0.01),HBV-DNA水平也高于C型(P<0.05);B、C型在肝功能损伤程度指标的比较无统计学意义(P>0.05)。结论:川南地区主要的HBV基因型为B型和C型,B型为优势基因型,还有少量的B+C混合型;HBV基因型与其致病性有一定的相关性。

人白细胞介素12表达质粒与Mtb8.4基因疫苗联合免疫增强对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果

本课题旨在研究结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.40只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS,经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次.BCG组经尾部皮下注射1×106CFUBCG免疫1次.免疫4周后,每组处死3只小鼠,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性.每组其余5只小鼠用结核杆菌H37Rv强毒株经尾静脉攻击,4周后,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.结果显示,联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1493±8pg/ml、748±49pg/ml),显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强,对小鼠结核杆菌感染有较好的免疫保护效果,使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数显著减少,组织病变明显减轻,其效果与卡介苗(BCG)组相当,优于Mtb8.4基因疫苗组.表明hIL-12表达质粒与Mtb8.4基因疫苗联合免疫后,能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答,使Mtb8.4基因疫苗的免疫效力得到很大提高.

结核菌Mtb8.4基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究

为研究Mtb8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即Mtb8.4基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1(+)组和PBS组。小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。

乙型肝炎病毒基因变异与临床

HBV在多种因素影响下发生基因变异,以实现自身生存的目的。乙型肝炎病毒(HBV)基因变异对慢性乙型肝炎患者病情发展、严重程度以及对抗病毒治疗效果都有一定的影响。随着聚合酶链反应及其扩增产物直接测序等分子生物学技术的应用和发展,使人们能够从分子水平认识病毒及其变异,包括HBV不同基因区段变异的频率和类型。本文就HBV基因变异、临床意义及其检测方法的最新研究进展做一综述。

人IL-12表达质粒联合含信号肽Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果

目的研究结核分枝杆菌含信号肽Mtb8.4(MS)基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠后,诱导的细胞免疫应答及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法将40只C57BL/6N小鼠随机分为联合免疫组(MS基因疫苗+hIL-12组)、MS基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组。将基因疫苗、空载体和PBS,经肌内注射免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次;BCG组经尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次。采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠细胞毒性T细胞的杀伤活性。用结核杆菌强毒株H37Rv静脉攻击小鼠后,计数肺和脾组织中结核杆菌的菌落数。对小鼠的部分肺和脾组织作病理切片,经HE染色观察组织病变的程度,经ZN染色检查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-2的水平,与BCG组相当,显著高于MS基因疫苗组,IL-4分泌减少,特异性CTL的杀伤活性增强,对小鼠结核杆菌感染有较好的免疫保护效果。表现为小鼠肺和脾组织中结核杆菌的菌落数显著减少,组织病变明显减轻,其效果与卡介苗(BCG)组相当,但优于MS基因疫苗组。结论以hIL-12表达质粒与MS基因疫苗联合免疫后,能显著增强MS基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。

乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的构建与鉴定

目的采用基因重组技术，将乙肝病毒4段小基因与协同刺激分子CD80基因嵌合，构建成嵌合乙肝小基因DNA疫苗。方法①根据文献选择和设计FIBV的一段pres2、三段core表位编码小基因，以人工合成DNA片段P1-P10，通过退火、连接成为含绚170bp的嵌合基因，用HindⅢ酶切；②提取和纯化pcDNA3．CDS0，用HindⅢ酶切和击磷酸化；③将酶切小基因定向插入pcDNA3-CD80载体的HindⅢ位点之间，构建成pcHBV-CD80小基因质粒；④pcHBV-CD80转入E．coli JM109扩增、提取质粒，测序鉴定。结果①各DNA小片段经退火、连接。成功嵌合为一大小约170bp之目的基因；②pcDNA3-CD80提取、酶切均成功；③170bp之目的基因定向克隆到载体上，构建了重组质粒pcHBV-CD80，经测序鉴定均构建正确。结论乙肝病毒小基因与协同刺激分子CDS0嵌合DNA疫苗构建成功。

灵芪蠲肝液治疗慢性病毒性乙型肝炎临床研究

目的了解灵芪蠲肝液治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法60例慢性乙型肝炎轻到重度患者随机分为两组。对照组给予基础保肝治疗;治疗组在对照组基础上加用灵芪蠲肝液。观察两组临床症状及肝功能改善情况。结果两组患者经治疗后临床症状及ALT、AST、TBIL较治疗前有明显好转( P<0 .0 5 )。治疗组各项症状改善情况与对照组比较均有显著性差异( P<0 .0 5 ) ;治疗组患者ALT、TBIL与对照组比较降低更明显( P<0 .0 5 ) ,AST降低无显著性差异。结论灵芪蠲肝液对慢性乙型肝炎有较好的治疗作用。

四川省2000年犬只携带狂犬病毒及免疫后效果的流行病学调查

目的:为进一步预防和控制狂犬病。方法:从7个监测点随机采集436份犬只唾液和132份血清,冷冻保存,分别用法国巴斯德诊断试剂盒检测狂犬病毒抗原和抗体。结果:在436份唾液标本中,抗原阳性18份,平均阳性率4.13％,带毒率在0～10％之间,最高为宜宾市高县(10%),最低为资中(0),经x^2检验,各地区犬只带毒率无显著性差异(P>0.05)。132份血清标本中,抗体阳性仅12份,阳性率9.09％,抗体阳转率最高为双流县(25%),资中县、荣县均为0,经x^2检验,无显著性差异(P>0.05)。结论:我省监测点犬只携带狂犬病毒普遍存在,有严重的流行隐患。

四川省2000年犬只携带狂犬病毒及免疫后效果的流行病学调查

目的 :为进一步预防和控制狂犬病 ,对犬只狂犬病毒携带情况进行流行病学调查。方法 :从 7个监测点随机采集 436份犬只唾液和 132份血清 ,冷冻保存 ,分别用狂犬病毒抗原酶联免疫吸附试验 (ELISA)双抗体夹心法和法国巴斯德诊断试剂盒检测抗原和抗体。结果 :在 436份唾液标本中 ,阳性 18份 ,平均阳性率 4 13% ,带毒率在 0～ 10 %之间 ,最高为宜宾市高县 (10 % ) ,最低为资中 (0 ) ,经x2 检验 ,各地区犬只带毒率无显著性差异 (P >0 0 5 )。 132份血清标本中 ,阳性仅 12份 ,阳性率 9 0 9% ,抗体阳转率最高为双流县 (2 5 % ) ,资中县、荣县均为 0 ,经x2 检验 ,无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :我省监测点犬只携带狂犬病毒普遍存在 ,有严重的流行隐患。犬只免疫后抗体阳转率较低 ,不能形成较好的保护。

结核病Mtb8.4基因疫苗构建、表达及诱导的细胞免疫应答

目的制备结核病Mtb8.4基因疫苗,并研究其免疫原性。方法克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)Mtb8.4,转染COS7细胞后,用RTPCR检测Mtb8.4基因在细胞内正确表达。将Mtb8.4基因疫苗肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第3次DNA免疫后4周,处死小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。结果Mtb8.4基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFNγ)和白细胞介素2(IL2)含量分别为787.317±45.586pg/ml和319.953±57.978pg/ml,BCG组分别为1486.540±39.600pg/ml和767.043±50.269pg/ml,BCG组IL4的含量为90.580±10.998pg/ml,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,Mtb8.4基因疫苗组的CTL活性分别为55.3%、35.7%、9.2%,BCG组分别为28.9%、21.4%、9.8%。Mtb8.4基因疫苗主要使抗原特异性Th1型细胞免疫应答增强,细胞因子IFNγ和IL2分泌增加,IL4分泌减少,CTL活性增加;而BCG使IFNγ、IL2和IL4分泌均增加。结论结核病Mtb8.4基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,可作为结核病的候选疫苗。

白介素2、华蟾素加强狂犬病疫苗免疫的实验研究

目的 :探讨白细胞介素 - 2 (IL - 2 )、华蟾素能否作为佐剂增强狂犬病毒灭活疫苗在小鼠体内的免疫应答。方法 :将昆明种小鼠 12 0只随机分成 3组 ,分别注射IL - 2加狂犬病毒灭活疫苗、华蟾素加狂犬病毒灭活疫苗、狂犬病毒灭活疫苗 (对照组 ) ,检测不同时期的中和抗体效价。结果 :① 3组免疫后的GMT :12日时分别为 10 0、70 .71、5 0 (P <0 .0 5 ) ;17、2 2日时分别为 14 1.4 2、10 0、10 0 (P >0 .0 5 ) ;2 7日时分别为 14 1.4 2、10 0、70 .71(P >0 .0 5 ) ;32日时分别为 10 0、10 0、5 0 (P >0 .0 5 )。②IL - 2组第 7日出现抗体 ,而华蟾素组和对照组均在第 12日时开始出现。结论 :在白细胞介素 2的作用下 ,抗体产生的时间提前 ,抗体效价提高 ,华蟾素有此效应 。

含信号肽Mtb8·4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用

目的研究含信号肽MTB8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用。方法雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即含信号肽的MTB8.4(MS)基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1+组和PBS组。ELISA检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,观察小鼠部分肺和脾组织的病变程度;Z-N染色查结核杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护作用。结果MS基因疫苗能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;免疫组小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。结论结核病MS基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护作用,但尚需进一步提高。

小鼠对乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗免疫应答

目的:探讨含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗的免疫应答.方法:以乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗pcHBV-CD80(含CMV启动子、HBV-preS_2片段、HBV-C片段和CD80)、pcHBV(含CMV启动子、HBV-preS_2片段、HBV-C片段),以及质粒pcDNA-CD80、pcDNA3.1和生理盐水,im免疫小鼠2次(间隔2wk),末次接种后2wk时检测特异性抗体、γ-IFN水平和淋巴细胞转化率.结果:质粒pcHBV-CD80和pcHBV免疫后均可检测到特异性的抗体,抗-preS2在pcHBV-CD80组和pcHBV组分别为15125.52nkat/L和14463.56nkat/L;抗-HBc在pcHBV-CD80组和pcHBV组分别为7607.35nkat/L和7711.21nkat/L,两组间无明显差异;但pcHBV-CD80更能增加γ-IFN的产生(1266.7ng/Lvs986.3ng/L,P<0.01),并增强免疫小鼠的激淋巴细胞转化.结论:含CD80的乙肝病毒小基因嵌合DNA疫苗可诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答.