纯培养微生物荧光原位杂交技术检测的影响因素探究

为了研究纯培养微生物荧光原位杂交技术(FISH)检测的影响因素,该实验以大肠杆菌(Escherichia coli)及植物乳杆菌(Lactobacillus planetarium)为研究对象,研究不同种属、不同生长期菌株、菌体预处理方式及杂交条件对基于探针EUB338的FISH检测结果的影响。结果表明,菌体种类及菌体生长阶段均较明显影响FISH计数的准确性;确定超声分散菌体时间60 s(100 W、每30 s间歇)、溶菌酶处理60 min可较大幅度提高FISH对菌体的检出率;杂交时间和洗脱液中NaCl浓度对FISH检测结果影响小,杂交温度、杂交液中甲酰胺浓度对大肠杆菌影响小而对植物乳杆菌有一定影响。

一株窖泥己酸菌株的多相鉴定及产酸研究

采用常规形态、生理生化指标,并结合16s RNA基因序列分析进行多相鉴定方法及气相色谱分析技术,对分离自泸州老窖180年窖池的1株产己酸菌株(K-2)进行分类鉴定和代谢产物分析,结果表明,K-2菌株能利用D-葡萄糖、甘露醇、菊糖、L-阿拉伯糖、D-蔗糖等多种碳源,具有脲酶、七叶灵和明胶酶水解活性;K-2菌株16s RNA基因序列(1346bp)与Clostridium celerecrescens一致率为99%,Strain K-2 16s RNA基因序列在系统进化树中位于Clostridium属分支,与Clostridium celerecrescens序列相似性最近,本研究将其鉴定为梭菌属(Genus I Clostridium)中的Clostridium celerecrescens菌株,该菌株有高效的产己酸(547.26 mg/100 m L)和丁酸能力(382.45 mg/100 m L)能力,但几乎不产己酸乙酯和丁酸乙酯。此研究为国内外首次报道从浓香型白酒窖池窖泥中分离出Clostridium celerecrescens菌株,且具有高效的产己酸特性。

中国传统白酒酿造丢糟资源循环利用研究进展

中国传统白酒酿造产业主要副产物为蒸馏提取残留物丢糟,丢糟资源化再利用不仅可以解决环境污染压力,也能充分利用丢糟价值,实现企业生态、循环、可持续发展。综述近年来丢糟资源利用最新研究报告,为践行低碳循环经济,拓展白酒产业链副产物资源化利用途径提供参考。

产己酸菌Lysinibacillus fusiformis SigA基因的克隆、表达及生物信息学分析

通过克隆产己酸菌Lysinibacillus fusiformis SigA全长基因,并对其进行表达和生物信息学分析。结果表明,SigA基因开放阅读框(ORF)有1 128个碱基,编码327个氨基酸,其分子质量为45.275 kDa;生物信息学预测表明,L.fusiformis与Lysinibacillus sphaericus具有较近的亲缘关系,二者序列相似度达97%;该蛋白为亲水性可溶性蛋白,与Bacillus sp.B14905相似度达100%,其二级结构主要由α-螺旋和loop环状构成,α-螺旋和loop环状分别占其二级结构的60.15%和37.79%;预测并优化的三级结构由14个α-螺旋和15个loop构成。

高效发酵人工窖泥的制备及应用研究

采用平板计数、窖泥理化分析法、微生物菌落结构分析法、感官评价及色谱分析法等工具,对8个候选窖泥配方的微生物组成、理化性质及感官特征进行了比较分析,结果表明,8个人工窖泥方案进行中,8号窖泥配方(X8)具有较好的各项指标,为最优窖泥配方;进一步采用X8窖泥配方制备窖泥,进行夹泥发酵工艺生产试验,以检测其发酵功能,结果表明,试验组与对照组间乙酸乙酯(Sig=0.111>0.05)差异不显著,乳酸乙酯(0.05>Sig=0.022>0.01)在试验组与对照组间差异显著,己酸乙酯(Sig=0.001<0.01)、丁酸乙酯(Sig=0.002<0.01)、总酯(Sig=0.001<0.01)、总酸(Sig=0.009<0.01)差异极显著。

基于荧光原位杂交法剖析窖泥微生物的预处理条件探究及应用

该研究首先对浓香型白酒窖泥样品的料液比、离心转速、超声波分散时间、Al_(2)(SO_(4))_(3)添加量等预处理条件进行优化;然后将纯培养菌体添加到窖泥样品,采用荧光原位杂交(FISH)法检测菌体回收率;最后按最优预处理条件处理不同窖龄窖池窖泥,并采用FISH法研究窖泥样品中的微生物。结果表明,窖泥样品的最优预处理条件为料液比1∶16(g∶mL)、离心转速800 r/min、超声分散时间60 s、Al_(2)(SO_(4))_(3)添加量为4.17×10^(-5)mol/g窖泥。在此条件下,FISH法检测大肠杆菌(Escherichia coli)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的菌体回收率分别为62.50%、55.44%,表明优化后的预处理条件对于窖泥微生物的FISH检测是可行的。FISH法检测窖泥微生物,结果显示随着窖池窖龄的增加,窖泥样品中细菌、古菌及菌体总数差异明显,总体呈现出先增加后降低的趋势,在100年窖龄的窖泥样品中,微生物总量最高。

一株整合型高抗性高效发酵己酸菌的选育研究

该试验采用同源重组技术从产己酸菌-纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)基因组中敲出α-淀粉酶基因、蔗糖磷酸化酶基因,同时敲进SigA和SigB基因,以提高L.fusifoemis的抗性,选育高效发酵己酸菌。结果表明,SigA和SigB双整合菌株SigA-SigB4在pH 4、乙醇体积分数6%条件下,己酸产量达到360.86 mg/100 mL,比单整合菌株SigB3提高了1.17倍,比非重组出发株L.fusifoemis提高了8.97倍,且经过32代传代后,其高效产己酸效能无显著变化(P>0.05)。

高酸发酵液的发酵条件优化研究

为了获得浓香型白酒的高己酸和高总酸发酵液,本研究采用均匀实验设计和多因子及互作项回归方法,对高酸发酵液的发酵配方和温度进行优化。结果表明,实验数据与所得回归方程具有显著的拟合度(P<0.01),从数学模型和验证实验得到的最优配方及温度组合为:葡萄糖120 g/L、酵母膏19 g/L、MgCl_2 1 g/L、乙酸钠27.5 g/L、K_2HPO_4 1 g/L,28℃。

一株耐高乙醇和低pH己酸产生菌Lysinibacillus fusiformis-pBE_3-ep-SigB的构建

以Lysinibacillus fusiformis为出发菌,分别转染Sig A和Sig B突变基因,获得耐高乙醇和低p H胁迫的优良己酸产生菌。以p ET32a(+)-Sig A/Sig B为模板,采用均匀试验优化Sig A/Sig B易错聚合酶链式反应(ep PCR)扩增体系中的Mn^(2+)和Mg^(2+)浓度,通过ep PCR获得ep-Sig A/Sig B突变基因,与载体p BE_3-MCS连接后,构建L.fusiformis-p BE_3-ep-Sig A/Sig B突变菌体库,将两种菌体库在p H值2~5和乙醇含量2%~12%条件下进行筛选。结果表明,L.fusiformis-p BE_3-ep-Sig B重组菌株耐受最高乙醇含量为8%左右,最低耐受p H值为2.5左右;当乙醇含量为8%、p H值为3.5时,L.fusiformis-p BE_3-ep-Sig B重组菌株的己酸产量达到(254.35±39.74)mg/100 m L,显著高于工程菌株L.fusiformis-p BE_3-ep-Sig A的己酸产量(P<0.01),且为出发菌L.fusiformis己酸产量(93.62±10.33)mg/100 m L的271.68%,表明L.fusiformis-p BE_3-ep-Sig B重组菌株具有较强的抗高乙醇浓度和低p H值胁迫产己酸的能力。