浙江省检验医学科住院医师规范化培训现状与模式探索

浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验医学科专业基地作为浙江省检验医学科专业的质控中心,从浙江省检验医师规范化培训的现状出发,分析了目前住院医师规范化培训面临的问题和挑战。探讨与建立更优化的"临床科室-检验医师-检验科"的临床检验医师培养模式,提出了注重师资的同质化培养、强调住培教学与临床紧密结合、在标准化的基础上实施个体化培养方案,体现分层分级螺旋上升、树立检验医师是临床和检验科沟通的桥梁、鼓励不同基地之间优秀经验的分享等工作思路。检验医师住培教学将培养同质化的检验医学人才,更好地服务于健康中国。

生物信息学在医学检验中的研究进展及研究生教学中的意义与应用

目的探讨生物信息学在医学检验中的研究进展及研究生教学中的意义与应用。方法分析在中国知网收录的医学检验领域的生物信息研究论文,并结合生物信息学的特点和医学检验研究生培养的需要,阐述医学检验领域研究生教学过程中生物信息学的意义和应用途径。结果在中国知网收录的医学检验领域的生物信息研究论文总体呈逐年上升趋势,涉及众多医学学科和研究层次。学科交叉融合是当今科学技术发展的主要趋势,未来理想的医学检验研究生需要具备扎实的基础和临床专业知识,能够提出合理的科学问题,并掌握和利用生物信息学技术分析思考、设计和解决问题。结论生物信息学在医学检验科研活动和科研创新中的作用已至关重要,生物信息学课程设置及问题导向式教学方法有助于研究生利用生物信息学解决医学问题,适应大数据时代和创新人才培养的需求。

浙江省医学检验住院医师规范化培训教学查房标准化探索和考核指标制定

教学查房在住院医师规范化培训中对培养医师的临床思维能力和实践能力具有重要作用,但是检验医学科由于未设立床位,不与患者接触,教学查房一直是一个培养难点。浙江省医学检验住院医师规范化培训基地质控中心通过对教学查房内涵深度剖析,分析医学检验住院医师规范化培训基地教学查房现状,推行“以检验结果为切入点式教学查房”。本文详细介绍以检验结果为切入点式教学查房的标准化过程和考核指标,以提升医学检验规范化培训教学查房质量,推进它持续深入开展。

质谱技术在多组学研究和医学检验中的应用前景及挑战

传统医学模式正进入到基因组学、蛋白质组学、代谢组学等多组学整合分析的精准诊断时代。以高性能质谱为核心的多组学研究已成为各类疾病筛查、早期诊断、治疗监测和预后评估的生物标志物创新发现的关键技术平台。近年来质谱技术的迅速发展及其在临床诊断中的推广应用,为提升医学检验水平奠定了坚实的基础,临床质谱技术将是医学检验未来发展的一大亮点。本文概述了质谱及多组学在医学检验中的现状、亟待解决的瓶颈及今后的发展趋势。

检验医学住院医师规范化培训仪器旁带教模式探讨与策略分析

住院医师规范化培训临床实践性较强,需要学生掌握一定的临床技能,该教学活动中的床旁带教环节在检验医学学科中需进行转换。本次教学探讨提出仪器旁带教的概念,从其教学内容、教学方法和教学模式以及带教老师应具备的能力等方面,探讨仪器旁带教的教学新策略,以提高规培教学质量,并为培养检验医学规培学员的临床思维与技能提供新思路。

CRISPR/Cas系统在核酸检测中的应用和挑战

成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关基因(Cas)系统是古菌和细菌适应性免疫系统,最初被发现用来进行基因编辑,近年其特异识别和切割特性以及可编程性使其在核酸和非核酸靶标检测中崭露头角。目前基于CRISPR/Cas系统的核酸检测系统主要与核酸扩增技术如PCR、链置换扩增(SDA)、滚环扩增(RCA)和EXPAR等恒温扩增技术结合,以提高灵敏度;多项研究也在尝试开发基于CRISPR/Cas的无预扩增核酸检测系统;另外也有研究尝试通过生物祖体(包括适体、DNAzymes和抗原-抗体反应)特异性识别靶物质实现非核酸信号转换为核酸信号,实现基于CRISPR/Cas的蛋白质、小分子、细胞等非核酸物质的检测。但仍存在一些挑战,其中目标中痕量原始浓度的信号转换和放大是分析系统的关键挑战;其他挑战包括CRISPR/Cas存在一定背景活性,CRISPR RNA和单链DNA/单链RNA信号报告序列有降解风险等。随着技术的逐渐成熟,CRISPR/Cas系统将在生物靶标检测中发挥更大作用。本文就CRISPR/Cas系统在核酸检测这一领域的最新发展方向作一述评。

骨髓瘤细胞表面CD117表达与复发难治性多发性骨髓瘤的相关性分析

目的探究骨髓瘤细胞表面CD117表达与复发难治性多发性骨髓瘤的相关性。方法回顾性研究初次治疗的250例多发性骨髓瘤患者,根据患者治疗疗效和复发情况,将患者分为复发难治组和非复发难治组。比较两组间的骨髓瘤细胞CD117表达和临床资料特征的差异,同时采用二元logistic回归模型多因素分析患者复发难治的影响因素。结果两组在性别、M蛋白类型、血小板、白细胞、乳酸和浆细胞比例比较中,差异均无统计学意义(χ^(2)分别=0.10、0.85,t分别=0.10、0.79、0.03、1.31,P均>0.05);与非复发难治组比较,复发难治组骨髓瘤细胞CD117表达阴性比例较高、年龄较大、DS分期较晚、血色素较低、肌酐较高、β微球蛋白较高、白蛋白较低、血钙较高和C-反应蛋白(C反应蛋白)阳性率较高,差异均有统计学意义(χ^(2)分别=26.15、19.21、13.14、7.54、4.76、6.44、5.90、7.14、6.04,P均<0.05)。二元logistic回归结果显示,骨髓瘤细胞CD117表达阳性是复发难治的保护因素,年龄大、DS分期晚和C反应蛋白阳性是复发难治的危险因素(HR分别=0.13、3.47、1.79、2.10,P均<0.05)。结论骨髓瘤细胞CD117表达阳性可能是复发难治性的多发性骨髓瘤患者保护因素。

凝血指标和抗凝因子在肺栓塞疾病中的预测价值

肺栓塞是指血液中形成的栓子栓塞在肺部动脉或其分支中,阻塞血液流动,进一步影响肺循环功能障碍的病理综合征,其发病率与死亡率居高不下,仅次于急性心肌梗死和脑卒中[1~3]。近几年,我国确诊的肺栓塞病例数急速上升,临床症状隐匿,并且易漏诊、误诊[4,5],通常会误诊为循环系统疾病或呼吸系统疾病等心肺疾病[6]。目前对于肺栓塞的诊断还是以计算机断层扫描、肺血管造影为主,但该项检查并不适合在所有疑似肺栓塞病例中使用,因为它涉及到电离辐射。并且肾病患者和造影剂过敏患者也不适用。

欧蒙免疫印迹法(ANA谱3)模条本底颜色变深对结果影响2例分析

欧蒙印迹法中所包被的抗原均为生化特性明确的纯化抗原,因此具有良好的检测敏感性[1]。操作过程中,模条本底颜色变深、扫描不报警的现象时有发生;但本底颜色很深及扫描报警,显示“不可用的”情况也偶有发生,表明实验失败,复查也如此,报告发不出。2020年12月18日和2021年1月1日2名住院患者ANA谱3模条(15项)颜色很深及扫描报警,显示“不可用的”;经进一步分析为球蛋白增多,增加了模条的吸附所至。血清经适当稀释,减少球蛋白的含量,从而减少吸附达到可以扫描,不报警,实验成功的目的;再加做间接免疫荧光(IIF:HEp-2细胞),ANA谱3报告就可以安心发出。现报告如下。

解脲支原体的致病性研究进展

解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)是一类与非淋球菌性尿道炎、不孕不育和胎膜早破及新生儿支气管肺泡发育不良等多种疾病相关的病原体。UU的致病性成为近年来的研究热点,主要包括两个方面:其一可能存在的多种潜在的致病因子或致病岛,其二与致病性强弱密切相关的UU的生物群、血清型和浓度及宿主自身的免疫力。文中就UU的致病性进行了详细综述。

CEA、CA125、NSE、CYFRA21-1、SCC联合应用诊断肺癌的意义

目的评价血清CEA、CA125、NSE、CYFRA21-1、SCC在肺癌的诊断价值及其联合检测的临床意义。方法将肺癌患者分为鳞癌、腺癌和小细胞癌3组,测定各组和健康对照组血清CEA、CA125、NSE、CYFRA21-1、SCC水平,比较各组差异,以及肺癌不同类型组间的差异,探讨联合检测对肺癌的诊断意义。结果肺癌组各项标志物的水平与健康对照组比较有显著性差异(P<0.05),CYFRA21-1、SCC在肺鳞癌和肺腺癌中有显著性差异(P<0.05);SCC、CYFRA21-1、NSE在肺鳞癌和肺小细胞癌中有显著性差异(P<0.05);NSE在肺小细胞癌和肺腺癌中有显著性差异(P<0.05),5项肿瘤标志物联合检测肺癌阳性率为87%,高于单项肿瘤标志物的检测。结论 5项肿瘤标志物在肺癌的诊断和病理分型中均有一定价值,其中NSE对肺小细胞癌,CYFRA21-1对肺鳞癌诊断价值较高。肿瘤标志物联合检测有利于提高肺癌的诊断率。

肺炎链球菌ciaH/R基因重组表达及CiaH/R与β-内酰胺类耐药相关性

目的:构建肺炎链球菌ciaH和ciaR基因的原核表达系统,探讨CiaH和CiaR封闭后细菌耐药性变化。方法:采用PCR扩增全长ciaH和ciaR基因,以常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rCiaH和rCiaR表达量。制备rCiaH和rCiaR兔抗血清及其IgG。检测IgG胞外或胞内封闭肺炎链球菌菌株CiaH和CiaR后,细菌对青霉素和头孢噻肟耐药性的变化。结果:与报道序列比较,所克隆的ciaH和ciaR基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9%～100%和100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-ciaH和E.coli BL21DE3pET42a-ciaR能高效表达目的重组蛋白rCiaH和rCiaR,其产量分别高达细菌总蛋白的33%和45%。rCiaH、rCiaR抗血清及其IgG免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶1、1∶1。CiaH-IgG胞外或胞内封闭CiaH、CiaR-IgG胞内封闭CiaR后,青霉素及头孢噻肟敏感菌株可出现对两种抗生素的耐药性,但对耐药菌株耐药性无明显影响。结论:成功地构建了肺炎链球菌ciaH/ciaR基因原核表达系统,为深入研究该TCS与耐药性关系奠定了基础。CiaH和CiaR均与肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟耐药性有关。

血细胞分析仪应用中镜检标本筛选条件的探讨

目的 根据对STKS五分类血细胞分析仪在血细胞分析中各项异常值的分析及形态学的鉴别 ,提出一种较为可行的镜检标本筛选条件以供探讨。方法 结合标本分析值并参照美国罗马琳达大学医学院临床实验室镜检标本筛选方法 ,把 1 30 0例标本仪器分析结果分成a、b、c、d 4组 ,并分别与镜检结果比较。结果 a组仪器分类结果与镜检结果基本相符 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;b组镜检阳性率 2 3.6 % ;c组镜检阳性率 1 2 .0 % ;d组镜检阳性率 81 .3%。结论 STKS五分类血细胞分析仪SuspectFlags提示存在一定程度的假阳性与假阴性 ,而本实验中 1 30 0例标本用规定的条件筛选后 ,对非a组进行镜检既能确保不漏检阳性结果 ,又能纠正仪器的假阳性指示 ,镜检率为 35 .6 % ,是一种既能提高工作效率。

意义未明单克隆免疫球蛋白病及多发性骨髓瘤患者微RNA-221和微RNA-222的表达

目的：探讨意义未明单克隆免疫球蛋白病（ MGUS ）、多发性骨髓瘤（MM）患者血清和浆细胞中微RNA-221（miR-221）和微RNA-222（miR-222）的表达水平及其作为MGUS、MM诊断和预测预后生物学指标的可能性。方法：收集2013年1月至2015年12月浙江大学医学院附属邵逸夫医院及浙江省立同德医院14例初诊MGUS患者、81例初诊及复发MM患者和10名健康对照者的血清及骨髓标本，其中骨髓标本用CD138磁珠分选浆细胞。用实时定量PCR检测血清和浆细胞中miR-221／222的表达量。采用Δct表示miR-221／222的相对表达量并比较组间差异。比较缓解组和难治组MM患者治疗前后血清miR-221表达水平的变化，并分析其与血清β2微球蛋白的相关性。结果：MGUS 患者和 MM 患者血清miR-221／222的表达量均较对照组高（均P＜0．01），而浆细胞miR-221／222的表达量均较对照组低（ P＜0．05或＜0．01）；MGUS与MM患者miR-221和miR-222表达量的差异在血清中或在浆细胞中均无统计学意义（均P＞0．05）。 miR-221和miR-222表达量在血清与浆细胞之间无相关性（r＝0．024和－0．127，均P＞0．05）；而血清和浆细胞 miR-221与 miR-222表达量之间均具有相关性（ r ＝0．534和0．552，均P＜0．01）。受试者工作特征（ ROC）曲线显示血清miR-221／222和浆细胞miR-221／222诊断MGUS、MM 的曲线下面积（ AUC ）分别为0．968和0．976、0．801和0．727。 MM患者不同M－蛋白类型之间血清miR-221的表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。复发患者血清miR-221的表达量高于初诊患者（P＜0．01）。DS分期为Ⅲ期MM患者血清miR-221表达量高于MGUS及DS分期Ⅰ期和Ⅱ期MM患者（P＜0．01）。缓解组治疗后血清miR-221表达量低于治疗前（U＝51．5， P＜0．01），而难治组治疗前后血清miR-221表达量差异无统计学意义（U＝67．5， P＞0．05）。 MM患者血清β2微球蛋白水平与血清miR-221的表达量呈正相关（r＝0．524，P＜0．01）。结论：检测患者血清、浆细胞miR-221／222表达量有助于MGUS的早期诊断，也有助于MM的诊断及疗效观察。

迪康胶囊抗大鼠肝纤维化作用机制的实验研究

目的通过迪康胶囊治疗不同剂量二甲基亚硝胺(DMN)诱导的肝纤维化大鼠,分离星状细胞检测胞浆CollagenⅢ、αSMA、Smad3、Smad7mRNA表达的变化,以期了解其在抗肝纤维化作用中的分子机制,为其抗肝纤维化提供证据。方法Wistar雄性大鼠共50只,分为病理1组、2组,治疗1组、2组,正常对照组。分别以不同剂量诱导形成肝纤维化模型并用迪康胶囊治疗。6周后,处死大鼠,分离各组大鼠肝星状细胞,进行体外培养,采用RTPCR方法测定各组大鼠星状细胞中胞浆信号蛋白CollagenⅢ、αSMA、Smad3、Smad7的mRNA的表达,以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)做内参,琼脂糖电泳后照相读取灰度,以扩增片段/GAPDH的比值为mRNA的相对含量进行比较。结果两组病理组星状细胞CollagenⅢ、αSMA和Smad3mRNA与正常对照组相比表达均增加(P<0.01),两组病理组之间无统计学差异;而Smad3与正常组相比则无统计学差异。迪康胶囊治疗后,CollagenⅢ、αSMA和Smad3表达均下降(P<0.05),而Smad7表达则明显增加(P<0.05)。结论迪康胶囊缓解DMN诱导的大鼠肝纤维化程度,使其胶原表达减少,星状细胞αSMA的表达降低,使星状细胞胞浆信号蛋白Smad3的mRNA表达降低,Smad7mRNA表达升高,说明迪康胶囊对不同剂量DMN诱导的肝纤维化均有不同程度的抗纤维化作用。

双重荧光定量PCR检测西尼罗病毒和基孔肯雅病毒

目的建立同时检测西尼罗病毒(WNV)、基孔肯雅病毒(CHIKV)的双重荧光定量PCR法,为临床疑似病例的诊断提供依据。方法分别针对WNV CAP基因、CHIKV E1基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立并优化双重荧光定量PCR反应体系,评价方法的特异性和灵敏度。结果建立的双重荧光定量PCR可同时检测WNV、CHIKV核酸,标准曲线相关系数(r)分别达0.999、0.998,灵敏度达10 copies/μL,具有良好的特异性。结论建立了同时检测WNV、CHIKV的双重荧光定量PCR法,但尚需临床进一步验证。

肺炎链球菌comD/E/C基因重组表达及ComD/C与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性

目的：构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统（TCS）基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化。方法：采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统。采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量。免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清。检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化。结果：与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%-99.3%和99.1%-100%。所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coliBL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%。rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8。ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性。结论：本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础。ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关。

急性颅脑损伤患者血浆神经肽和电解质水平变化及其临床意义

目的:探讨颅脑损伤急性期血浆精氨酸血管加压素(AVP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和电解质水平的变化。方法:根据GCS评分将78例急性颅脑损伤患者分为轻度组、中度组和重度组,测定各组患者损伤后第1、3、7 d血浆AVP和AngⅡ水平,入院当天同时测定血浆电解质。另外选择正常对照组41例相比较。结果:与正常对照组相比,颅脑损伤患者AVP和AngⅡ明显增高(P<0.01),颅脑损伤越重,上述指标升高越明显,损伤后第3d达高峰。颅脑损伤患者血钾、血钙浓度降低(P<0.01),其下降程度与颅脑损伤严重程度相关,轻型颅脑损伤组与对照组比较无显著差异。颅脑损伤后血钠水平无明显变化。结论:血浆AVP和AngⅡ水平的改变可作为判断颅脑损伤严重程度的指标;血钾与血钙降低可以作为颅脑损伤患者病情判断的指标。

不同检测方法对低水平乙型肝炎表面抗原的测定及其临床评估

目的:探讨免疫发光、电化学免疫发光、ELISA三种方法对检测低水平乙型肝炎表面抗原的价值。方法:以免疫发光测试系统Architect i2000检测结果为参考,把70例<50 IU/ml的标本分成三个级别:<1 ng/ml、1~5 ng/ml、≥5 ng/ml三组,用电化学免疫发光MODULAR〈E〉170、ELISA检测,对三种方法测定的结果进行比较。结果:免疫发光Architect i2000与电化学免疫发光MODULAR〈E〉170比较,<1 ng/ml组符合率79.2%(P(0.05),1~5 ng/ml组符合率100%,≥5ng/ml组符合率100%。免疫发光Architect i2000与ELISA比较,<1 ng/ml组符合率0%,1~5 ng/ml组符合率45.5%(P<0.05),≥5 ng/ml组符合率100%。结论:免疫发光Architect i2000与电化学免疫发光MODULAR〈E〉170对低水平HBsAg的检测效能基本一致,结果相对可靠,常规ELISA法对≥5 ng/ml的HBsAg检测结果可靠,但对低水平HBsAg漏检率高,特别是<1 ng/ml HBsAg很难检出。

精准医学中个体化检验诊断的机遇与挑战

2015年美国政府提出“精准医学计划”后，精准医学的理念迅速播散，并推动现代医学从循证医学时代迈入精准医学时代，俨然成为未来医学的发展方向。伴随精准医学发展而产生的个体化检验诊断同样也是一个全新的领域，其复杂程度远远超乎人类当前认知。个体化检验诊断领域机遇与挑战同时并存，检验医学从业者应积极投身这一新兴领域，以期为寻找和评估循环生物标志物，选择适宜的分子诊断技术并使其标准化，高质量的生物标本的获得和样本库的建立，对报告单进行综合解读等领域作出贡献。最终实现对特定疾病和患者进行个性化精确治疗，改善疾病预防与诊治效果。