生物吸附及微生物降解对4-溴联苯醚污染水体的修复

多溴联苯醚(PBDEs)作为阻燃剂被广泛使用。因为它对人类的器官、神经系统和免疫系统的危害以及向周边环境的不断迁移,已经逐渐成为人们迫切需要处理的污染物之一。以同系物4-溴联苯醚(BDE-3)作为降解对象,将海藻酸钠和生物碳混合制成微球制剂,对该制剂吸附BDE-3的潜力、机制及添加降解菌Sphingomonas sp.DZ3后微球菌剂的吸附增益效应进行研究。结果表明:2%的海藻酸钠为微球制备的最佳质量浓度,该微球制剂在液相中的吸附过程符合Lagergren准一级动力学方程和Elovich方程,微球的最大吸附量为28.6 mg·g^(-1)。用添加微生物的微球菌剂对BDE-3污染水体进行修复时发现,微球菌剂在溶液中能加速BDE-3的降解,与游离的微生物相比,差异达极显著水平(P<0.01)。利用Monod降解动力学方程对该降解过程进行拟合,得到降解动力学方程为υ=υ_(max)·S/(K_S+S)=14.29·S/(31.71+S)。

枯草芽孢杆菌F-2抗植物病原真菌活性物质的研究

枯草芽孢杆菌F-1和F-2与尖孢镰刀菌的对峙实验中,F-1没有抑菌作用,而F-2表现出强抑菌效果.为了分析测定F-2的抑菌活性物质,对F-1和F-2胞外代谢物粗提液的HPLC谱图进行比较,发现F-2具有F-1所没有的特征代谢产物.使用LC-MS对F-2的特征产物进行分析,推测主要产物的分子量为1477.0、1489.1和1505.1.进一步采用MALDI-TOFMS对F-2粗提液进行分析,发现F-2产生两组分子量相差14Da(CH2)的同系物.其中一组的分子量依次为1462.8、1476.8、1490.8、1504.8和1518.9,通过质量指纹谱技术鉴定为脂肽抗生素C14-18 Fengycin B.另一组的分子量依次为1432.8、1446.8、1460.8、1474.8和1488.9,与C14-18 Fengycin A对应分子分子量相差2Da,推测可能是Fengycin A的一种异构体,其碳链中具有一个双键,具体性质有待进一步分析.

稻瘟病菌单克隆抗体2B4的研究

从230个具有ELISA阳性反应的细胞株获得了11株具有高效价的单克隆抗体, 其中2B4显示较强结合作用,并均能与分生孢子、芽管和附着胞表面结合。Western blotting分析表明,单抗2B4能与孢子芽管表面的1%SDS提取物中的15kDa的蛋白结合。免疫金定位发现该蛋白确是在病菌各个形态阶段广泛存在的分泌性蛋白。采用2B4从分生孢子cDNA表达文库中筛选获得6个阳性克隆。该克隆MP1表达的蛋白抗原与实际存在的15KDa是相一致的。其基因克隆及功能分析正在研究之中。

新蚜虫疠霉连续液体培养的菌丝生物量、产孢量及杀蚜毒力

继代培养常被疑为虫霉菌种毒力下降或某些生物学性状发生改变的原因之一。从研究新蚜虫疠霉 (Pandoraneoaphidis)固体平板菌落的液体培养获得的初始菌液出发 ,连续 6次继代液培 ,测定了其在萨氏营养液中继代培养生产的菌丝生物量、产孢量及其对桃蚜 (Myzuspersicae)的毒力。在初始菌液的生物量 8 8mg mL和产孢量 7 2× 1 0 5孢子 mg的条件下 ,以三种转接比 (种液 营养液 ,v v)连续 6次继代培养 ,在 1 2 0转接比下的菌丝生物量和产孢量分别为 6 4～ 1 0 0mg mL和 7 3× 1 0 5～ 1 0 8× 1 0 5孢子 mg,在 2 2 0下为 5 7～ 8 5mg mL和 1 0 0× 1 0 5～ 1 2 1× 1 0 5孢子 mg ,在 4 2 0下为 5 5～ 1 0 9mg mL和 6 4× 1 0 5～ 1 0 9× 1 0 5孢子 mg。方差分析表明 ,继代培养对生物量和产孢量均无显著影响 (P <0 0 5)。用初始菌液和 1 2 0转接比下继代培养的菌液制备而成的接种体对桃蚜进行两组毒力测定 ,每一组测定的接种体为所有 7批菌丝体产生的分生孢子 ,第二组测定只包括初始菌液、第 3及第 6次继代培养物。十批接种体在接种后第 3～ 7d对桃蚜的LD50 依次为 2 2 8～ 1 62 0、4 7～ 49 4、2 8～ 1 6 7、2 3～9 5和 1 8～ 5 2个孢子 mm2 ,其中第 7d的LD50

节杆菌(Arthrobacter)42-1菌株的分离、鉴定及产肌氨酸氧化酶条件研究

从42℃的恒化富集培养物中分离到一株产肌氨酸氧化酶(SOX)的节杆菌.对菌株42-1产酶发酵条件的研究表明,SOX可以被诱导物如肌氨酸、肌酸、肌酐和氯化胆碱诱导产生.在发酵过程中适当减少通气量对SOX的产生有显著的促进作用.葡萄糖等容易利用碳源的存在对SOX合成不产生降解代谢产物的抑制作用.而尿素的存在则对SOX生成有强抑制作用.因而SOX分解肌氨酸的主要作用是为细胞提供生长所需的氮源.

十溴二苯醚降解菌的分离鉴定及其降解特性的初步研究

通过选择性富集法从杭州炼油厂附近长期受石油污染的土壤中分离到1株以十溴二苯醚为唯一碳源、能源生长的细菌BD-24,经形态、生理生化、16S rDNA核苷酸序列分析,以及(G+C)mol%测定,菌株BD-24被鉴定为芽孢杆菌属(Bacillussp.);并用高效液相色谱法测定十溴二苯醚浓度.结果表明:菌株BD-24在含20 mg·L-1十溴二苯醚的无机盐培养基上培养15 d,十溴二苯醚残余率下降至75.1%,到第25天,残余率则为65.6%;不同种类碳源的添加均能不同程度地促进十溴二苯醚的降解,其中麦芽糖作用最为显著,培养5 d后,残余率仅剩83.5%;而不同氮源的添加对降解无显著作用.

壳聚糖-生物炭微球对甲基红的吸附及微球菌剂的吸附增益效应

以典型偶氮染料甲基红为吸附对象,将壳聚糖和生物炭混合制成微球制剂,对该制剂吸附甲基红的潜力、机制及添加微生物后微球菌剂的吸附增益效应进行研究.结果表明,所制得的壳聚糖-生物炭微球具有良好的吸附特性,在染料初始质量浓度为500 mg/L、p H 3.0和20℃条件下,微球对甲基红的最大吸附量为460 mg/g.Freundlich等温方程和准二级动力学方程模型与该吸附过程拟合良好.利用Elovich方程与颗粒内扩散方程对微球的吸附过程进行研究,结果证实该吸附过程为自发过程,内部扩散为该过程的限速步骤.通过热力学方程计算得到吸附过程的热力学参数ΔG0、ΔH0和ΔS0分别为-24.35 k J/mol(30℃)、-21.36 k J/mol和8.45 J/(mol K).表明此吸附过程为放热过程,较高温度可降低微球吸附的自发性并抑制微球对甲基红的吸附作用.利用神经网络对影响吸附过程的4个因素(p H值,温度,初始浓度,吸附时间)进行建模分析,发现温度对吸附过程的影响最大,相对重要性为32.76%,时间次之(为25.56%),其余依次为p H(23.36%)和初始浓度(18.32%).包埋微生物的微球菌剂与无微生物的纯壳聚糖-生物炭微球相比,脱色率提高了29%;与微生物单独脱色相比,脱色率提高了76%,表明生物吸附材料与微生物混合制备成菌剂的吸附增益效果明显.

Bacillus sp．C3细胞色素P450CYP102A16酶活性研究

通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp．C3细胞色素P450CYP102A16蛋白；以CYP102A16纯酶为研究对象，系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响；用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）消减法测定CYP102A16的酶活性．结果表明：CYP102A16的最适反应温度为35℃，最适反应pH为6．5-7．5，该酶在45℃以下、pH5．0～10．0的范围内稳定；CYP102A16能完全耐受20％二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）、30％甲醇、10％乙醇和20％丙酮，经10％乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45％以上，经10％正丁醇处理几乎失活；添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶（cetylpyridine chloride，CPC）（0．003-0．02g/L）和聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）（0．1-0．2g／L）可使CYP102A16酶活性分别提高40％和60％左右，而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠（sodiumdodecyl sulphate，SDS）（O．004-0．008g／L）对该酶活性无显著影响；1-20mmol／L K^＋、20-50mmol/L Na^＋、0．05mmol／L Cd^2＋对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应，NH4^＋、Ca^2＋、Mg^2＋、Fe^3＋、CO^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋、Cu^2＋和乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid．EDTA）均能不同程度地抑制CYP102A16的活性，在离子浓度为1-100mmol／L时抑制效应表现为Ca^2＋〉Mg^2＋〉NH^4＋〉EDTA，抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关．

病原菌调节宿主细胞泛素化途径的研究进展

泛素化是真核生物特有的蛋白质翻译后修饰,广泛地参与宿主细胞各种信号通路和生理过程.病原菌常通过分泌毒性效应蛋白,对泛素和泛素结合酶进行独特的共价修饰,或者利用泛素连接酶和去泛素化酶的酶学活性,调节宿主泛素化过程,从而干扰宿主细胞的信号转导,促进细菌的感染和生存.本文概述了病原菌效应蛋白调节宿主泛素化途径的主要研究进展和最新发现.

苄嘧磺隆对淹水稻田土壤呼吸和酶活性的影响

研究除草剂苄嘧磺隆对淹水稻田土壤生态环境的安全性.以淹水稻田土壤为研究对象,在室内模拟田间试验条件下,通过呼吸作用和酶活测定,定期取样研究苄嘧磺隆施用浓度(0.000、0.067、0.3551、.780、3.553μg?g-1干土)对淹水稻田土壤呼吸强度和土壤酶活性的影响.结果表明,苄嘧磺隆施用初期能刺激土壤呼吸强度,随后产生轻微的抑制作用,这种抑制作用在取样后期逐渐减轻并趋于对照水平.苄嘧磺隆能轻微刺激过氧化氢酶活性,而蔗糖酶活性基本不受苄嘧磺隆施用量的影响,脲酶活性则是先刺激后抑制,多酚氧化酶活性受苄嘧磺隆影响不大.说明施用一定量的苄嘧磺隆对淹水稻田土壤生态环境是安全的.

不同寄主来源的根虫瘟霉菌株对小菜蛾幼虫的毒力比较

在不同寄主来源的 4株根虫瘟霉Zoophthoraradicans对小菜蛾Plutellaxylostella 2龄幼虫的生物测定中 ,发现源于小菜蛾的菌株ARSEF110 0毒力最强 ,在 0 5 3～ 319 32 mm2 的孢子剂量下 ,接种后第 8天累计死亡率为 2 38%～ 97 4 4 % ,虫尸全部表现典型的虫瘟霉症状 ;源于叶蝉的ARSEF2 6 99和F9910 1菌株的同日累计死亡率分别为 2 38%～ 5 0 0 0 % (剂量为 1 5 6～314 84 mm2 孢子 )和 2 38%～ 5 7 89% (剂量为 1 84～ 4 84 0 8 mm2 的孢子 ) ;而源于菜粉蝶的ARSEF1342菌株在 3 5 4～6 33 4 0 mm2 的孢子剂量下只引发 6 5 2 %～ 13 6 3%的累计死亡率 ,后 3个菌株致死的小菜蛾幼虫仅部分表现典型症状。所获数据经时间 剂量 死亡率模型模拟分析 ,剂量效应参数依次为ARSEF110 0 (1 89) >F9910 1(1 4 8) >ARSEF2 6 99(1 2 3) >ARSEF1342 (0 37) ,相互间差异均达极显著水平。接种后 4～ 8天内 ,ARSEF110 0的LD50 值分别为 2 31 6 8、 113 0 8、 71 4 1、4 0 87和 35 30 mm2 的孢子 ,其毒力远高于其余 3个菌株 ;ARSEF2 6 99的相应LD50 值为 1344 4 3、 92 2 39、 5 5 5 5 8、 4 10 0 6和397 0 7 mm2 的孢子 ;F9910 1的LD50 值为 6 6 6 86、 4 5 1 6 4、 4 13 82、 35 0 6 5和 332 5 7

球孢白僵菌对斜纹夜蛾高毒菌株筛选与制剂的研发

斜纹夜蛾Spodoptera litura是一种危害极大的农业害虫,为了探索1条可持续、无污染的新型防治方法,我们通过标准喷塔法从12株球孢白僵菌Beauveria bassiana中筛选出1株对斜纹夜蛾2龄幼虫高毒力的菌株———球孢白僵菌Bb2860菌株。在喷雾浓度为（2592±275）孢子.mm-2的高浓度下,菌株Bb2860对斜纹夜蛾2龄幼虫在第7d的校正死亡率达82.43%±6.03%。不同制剂的室内生测试验表明,孢子水悬液和2种油剂（分别为不含稳定剂和含有稳定剂）在中浓度319~529孢子.mm-2的喷雾浓度下,7d后对斜纹夜蛾2龄幼虫的累计死亡率分别为54.8%7、0.0%和76.7%;菌药协同作用为86.8%。另外,于2009年9月在安徽马鞍山进行自然条件下对花椰菜叶上斜纹夜蛾幼虫的田间小区药效试验。处理9d后,纯菌剂的相对防效为77.64%;低剂量和常规用量5%氟啶脲（抑太保）的相对防效分别为49.02%和89.70%;菌药混用的相对防效为91.13%。本研究显示出利用球孢白僵菌制剂及其与低剂量抑太保混用防治斜纹夜蛾的良好应用前景。

一株产环糊精葡萄糖基转移酶的地衣芽孢杆菌的选育、产酶条件及酶学特性

从土壤分离物中筛选到一株环糊精葡萄糖基转移酶 (CGTase)产生菌 4 0 3,96h发酵酶活为 0 95U mL。经紫外辐射和硫酸二乙酯复合诱变而获得突变株CLS4 0 3,96h发酵酶活达 1 36U mL ,提高 4 3%。该突变菌株被鉴定为地衣芽孢杆菌 (Bacilluslicheniformis) ,产CGTase的最佳碳源为可溶性淀粉 ,最佳氮源为硝酸铵 ,最适初始pH为 6 5 ,最适培养温度为 35℃ ,发酵期间CGTase的产生高峰 (第 96h)滞后于菌体生物量高峰 (第 4 8h) 2d。菌株所产CGTase的最适反应pH为 6 0 ,最适温度为 5 5℃ ,在pH 6 0～ 7 5间和 5 0℃下保持 1h后的剩余酶活均达 90 %以上 ;酶液中适量添加Ca2 + 能大幅提高CGTase在 5 5℃下的稳定性。经高效液相色谱分析 ,CGTase作用于淀粉后的产物以α 环糊精为主 ,β 环糊精为次 ,二者比例为 2 4 7∶1,环糊精总产率达 2 9 8% ,但产物中不含γ

球孢白僵菌对桃蚜接种后特定时间内的侵染率

用球孢白僵菌 (Beauveriabassiana)BBSG870 2菌株的分生孢子悬液 (5× 10 6个·ml-1孢子 )对桃蚜 (Myzuspersicae)始产若蚜的成蚜进行表面接种 ,在接种后 5 6h内 ,每隔 8h取样用 0 .2 %百菌清处理蚜虫 ,使其体表残存的孢子全部失活 ,分别置于 10℃和 2 0℃下逐日观察感染引起的死亡 .结果表明 ,10℃下接种后 5 6h、2 0℃下接种后 40h内各时间段有效侵染引起的死亡率相互间存在显著差异 ,并与不用杀菌剂的对照处理差异显著 (P <0 .0 5 ) .与对照相比 ,接种后 8、16、2 4、32、40和 5 6h内 ,10℃下的有效侵染率分别为 2 2 .9、48.8、6 4.9、80 .4、72 .7和 98.3% ,2 0℃下分别为 31.6、48.8、5 8.6、86 .9、97.2和 98.7% .由此表明 ,在 10～ 2 0℃范围内 ,接种后 2 4h内是该菌有效侵染桃蚜的关键时段 ,有效侵染率达 5 9～ 6 5 % .

两种杀虫真菌制剂对茶小绿叶蝉的田间防效评价

于 2 0 0 2年盛夏在浙江遂昌一高山茶园对茶小绿叶蝉 (Empoascaspp )进行了真菌杀虫剂的田间药效试验 .所用菌剂为球孢白僵菌 (Beauveriabassiana)和玫烟色拟青霉 (Paecilomycesfumosoroseus)的纯孢子悬乳剂及其与 3%吡虫啉 10 %可湿剂的混配剂 .各菌剂稀释 5 0 0倍喷雾 2次 ,间隔 12d .结果表明 ,两种真菌的混配剂明显优于纯菌剂 ,其中球孢白僵菌混配剂的最高防效达 83 4 % ,而玫烟色拟青霉的最高防效为 71 3% .根据 2 5d期间历次调查结果计算平均防效 ,球孢白僵菌混配剂达 6 6 8% ,玫烟色拟青霉混配剂为 6 2 1% ,含微量吡虫啉的矿物油为 5 0 3% ,球孢白僵菌和玫烟色拟青霉的纯菌剂分别为 4 9 5 %和19 0 % .结合试验期间气候及田间种群结构特征 。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)S9对植物病原真菌的溶菌作用

本研究共分离了976株细菌分离物,发现来自甘蔗根围的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)S9对立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、终极腐霉(Pythium ultimum)和西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.nivewm)在PDA平板的对峙培养过程中不形成抑菌圈,但4d后可使上述植物病原真菌的菌丝溶解。扫描电镜观察发现S9菌株在待测的立枯丝核菌表面形成了溶菌斑。S9菌株对立枯丝核菌的作用过程是通过吸附在病原真菌的菌丝上,并随菌丝生长而生长,而后产生溶菌物质消解菌丝体。液体共培养测定也证明了S9菌株具有上述作用。本研究还发现,S9菌株对植物病原真菌的拮抗真菌绿色木霉(Trichoderma viride)、鲜红毛壳菌(Chaetomium cupreum)和球毛壳菌(Chaetomium globosum)的生长没有影响。盆栽试验证明了S9菌株可有效地控制立枯丝核菌(R.solani)引起的番茄苗期病害。S9菌株与其它拮抗真菌混合具有促进防治植物病原真菌引起的植物病害的潜力。

球孢白僵菌分生孢子乳悬剂对甘蓝上桃蚜的田间控制效果

利用液 酵法生产球孢白僵菌 (Beauveriabassiana)SG870 2菌株的分生孢子粉 ,配制成含孢量为10 10 个·ml-1的孢子乳悬剂I ,在此基础上按 1% (W/V)的比例添加 10 %吡虫啉可湿性粉剂而得孢子乳悬剂Ⅱ .于 2 0 0 1年 7月对两种孢子乳悬剂在云南昆明进行了自然条件下甘蓝上桃蚜 (Myzuspersicae)的田间小区 ( 5 .5m× 4.8m)药效试验 ,各 3个浓度 (含孢量分别为 10 7、10 6及 10 5个·ml-1常规喷雾处理 ,重复设清水喷雾对照 ,重复 3次 ,随机区组排列 .在喷菌后连续 2 8d的田间蚜虫密度定期抽样调查中 ,乳悬剂Ⅱ的 10 0 0倍稀释液喷雾有效抑制了蚜虫数量增长 ,喷后第 7～ 2 8天防效始终在 90 %以上 .乳悬剂I的相同稀释液喷雾对桃蚜的控制略逊于乳悬剂Ⅱ ,但喷后第 7天的相对防效也达到 85 % ,此后维持防效 70 %以上达两周 ,第 2 4天和 2 8天才分别降至 6 4.4%和 5 2 .6 % .用含孢量 10 6和 10 5个·ml-1的菌液喷雾 ,乳悬剂I仍表现出明显的控蚜效果 ,而添加微量吡虫啉的乳悬剂II的控蚜效果总是优于同一浓度下的乳悬剂I.昆明地区夏季温和而多小雨的气候有利于孢子乳悬剂发挥作用 .

产木聚糖酶的沿海红树林真菌筛选及其培养与酶活测定条件优化(英文)

从香港海岸红树林分离到的 77株真菌中有 34株可产生木聚糖酶 ,从中选出CY2 80 9(Staganosporasp .)、CY4 786和CY5 0 4 0等 3菌株与已知陆生产酶菌株HU5 0 4 8(Aspergillusawamori)进行产木聚糖酶的比较研究。根据培养液中菌丝生物量、木聚糖酶活力和木糖等价还原糖含量等指标的测定 ,菌株CY4 786在起始pH 7 8的木聚糖 酵母膏 海盐液体培养基中 2 5℃下震荡 (10 0r min)培养 7d产酶最佳 ;粗酶液在 5 0℃和pH 4 6的优化条件下进行测定 ,木聚糖酶活力达到 1 0 7× 10 4 U mL。结果表明 ,红树林真菌起着半纤维素降解者的作用 ,沿海红树林环境中存在着可资利用的木聚糖酶产生菌。

两种杀虫真菌制剂与低用量吡虫啉对温室粉虱的协同防效评价

在昆明市郊蔬菜基地 4间大棚 (5m× 10 0m·间 -1)栽培的生菜上 ,用球孢白僵菌 (Beauveriabassiana)和玫烟色拟青霉 (Paecilomycesfumosoroseus)的纯孢子乳悬剂 (有效含孢量 10 10 ·ml-1)及其与 1%和 3% (w/v)的吡虫啉 10 %WP的混配剂对温室粉虱 (Trialeurodesvaporariorum)进行了协同药效试验 ,吡虫啉添加量仅相当于推荐用量的 6 .4 %～ 9.5 %和 19.1%～ 2 8.6 % .试验含 6个菌剂处理、2个低用量吡虫啉处理和 1个清水对照 ,各有 3个小区 (7m× 5m·小区-1)重复 ,随机区组排列 .稀释 10 0 0倍的菌液 (含孢量 10 7·ml-1)和吡虫啉液于生菜移栽后第 11d首次喷雾 ,15d后喷第二次 ,首次用菌前调查初始粉虱密度 ,用菌后每隔 5d调查活虫数和死虫数 ,从 8月 2 0日起历时 30d .结果表明 ,连续 2次用菌有效地控制了粉虱对当季大棚生菜的危害 ,各菌剂处理的最终相对防效和虫口减退率均达到 95 %以上 ,极显著地高于低用量吡虫啉处理 .其中 ,玫烟色拟青霉制剂对粉虱的控制效果一般优于球孢白僵菌制剂 ,且与吡虫啉的添加量呈正相关 .但是 ,各菌剂处理间控虫效果的差异主要发生在首次用菌后第 5d和 10d ,此后差异逐渐缩小 ,至第二次用菌后第 10d各菌剂处理间无显著差异 .本试验结果表明 ,两种真菌的孢子乳悬剂均可用?