创新学科“微创胰胃外科学”建设十年回顾与展望

创新学科“微创胰胃外科学”建设已有十周年,团队以直接造福患者为目的,以临床技术创新为重点,获得了一些成绩和体会,且具有实用性和可复制性。笔者回顾创新学科“微创胰胃外科学”的背景、建设历程、业绩和体会。

伴与不伴糖尿病肾病的糖尿病视网膜病变患者血浆蛋白质组学研究

目的研究伴与不伴糖尿病肾病(DN)的糖尿病视网膜病变(DR)患者血浆蛋白质组学,寻找差异表达蛋白,为筛选相关血浆标志物提供依据。方法入组16例T2DM患者,8例DR伴DN患者纳入DNDR组,8例单纯DR患者纳入DR组,利用蛋白质组非标记(label-free)定量技术对16例血浆标本进行检测,并行液相串联质谱分析(LC-MS/MS),计算蛋白质表达丰度,筛选差异蛋白并行生物信息学分析,包括基因本体(GO)和代谢与信号转导通路(Pathway)注释和富集分析、差异蛋白相互作用网络分析。ELISA法检测两组患者血浆IGFBP7、CPS1 水平,验证label-free 结果。结果以均数和中位数差异倍数均≥ 2.5 倍(上/下调)为标准,筛选出差异蛋白17个,上调11个,下调6个。GO富集分析显示结合蛋白在分子功能蛋白中占绝对优势。Pathway 富集分析示CPS1在丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢中起作用。蛋白相互作用网络分析显示HSPG2、CPS1、IGFBP7、TLN1、KRT5之间有相互作用。ELISA法结果显示IGFBP7在DR组较DNDR组表达升高,CPS1在DR组较DNDR组表达降低。结论采用label-free定量技术发现DR组与DNDR组存在多种差异表达蛋白,这些差异蛋白提供了不同的候选相关血浆标志物和早期防治的靶点。

MicroRNA-101调控人胃癌细胞系增殖、迁移、侵袭的实验研究

目的通过实验研究miRNA-101在胃癌中的表达水平,以及对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭力和皮下移植瘤的影响,以探讨将miRNA-101用于胃癌生物靶向治疗的可能性。方法分子克隆技术构建miRNA-101重组腺病毒表达载体,MTT法检测细胞增殖能力,Millipore Transwell小室法检测细胞迁移能力,Matirgel法检测细胞侵袭能力,q-PCR定量分析各基因表达水平,使用BALB/c免疫缺陷裸鼠建立胃癌皮下移植瘤模型。结果 miRNA-101在胃癌组织中的表达量为(0.661±0.396),低于所对应的癌旁组织(1.128±0.697),差异有统计学意义(t=10.091,P<0.01)。胃正常上皮细胞GES-1中的miRNA-101表达量高于胃癌细胞系BGC-823、SGC-7901、MKN-45和AGS。miRNA-101对MKN-45细胞的增殖能力呈现明显的抑制作用,对胃癌细胞BGC-823、SGC-7901、MKN-45、AGS的迁移和侵袭均有抑制作用。选取MKN-45细胞系建立裸鼠皮下移植瘤模型后5周,Ad-miRNA-101组肿瘤体积为(333.56±46.71)mm^3,小于Ad-EGFP组(806.41±51.83)mm^3,差异有统计学意义(t=21.431,P<0.01)。结论在胃组织中,miRNA-101是一个抑制性miRNA,miRNA-101表达水平下调参与胃癌的发生和发展。miRNA-101将有可能成为胃癌生物靶向治疗的新靶点。

激活的凝血因子——肿瘤相关巨噬细胞对胃癌腹膜转移生物学行为影响的研究

近年来研究表明恶性肿瘤的高凝状态与肿瘤的侵袭、增殖和转移有着密切的关系，高凝不仪可以使肿瘤细胞包裹在纤维蛋白和血小板的聚合物中，逃避免疫监视，而且还可直接导致凝血酶的产生，通过活化多种信号传导机制促进肿瘤新生血管生成和肿瘤转移。

基于决策树模型的内镜逆行胰胆管造影术后胆总管结石复发的研究

目的通过决策树模型,探讨内镜逆行胰胆管造影术(ERCP)后胆总管结石复发的危险因素及风险。方法回顾性分析该院2016年1月-2020年12月因胆总管结石行ERCP取石术的500例患者的临床资料,分别建立决策树模型和Logistic回归模型,并绘制受试者操作特征曲线(ROC curve),用曲线下面积(AUC)、敏感度和特异度对两种模型的预测效果进行评价,筛选影响ERCP后胆总管结石复发的独立危险因素,并使用模型预测患者复发风险。结果决策树分析结果显示,既往有胆道取石史(P=0.000)、胆总管直径>1.60 cm(P=0.000)和既往有胆囊切除史(P=0.004)为ERCP后胆总管结石复发的高危危险因素;多因素Logistic回归分析显示,既往有胆囊切除史(P=0.003)、既往有胆道取石史(P=0.000)、胆总管直径>1.60 cm(P=0.000)、结石数量≥2枚(P=0.001)和胆道支架(P=0.038)为影响ERCP后胆总管结石复发的独立危险因素,白蛋白≥40.5 g/L(P=0.026)为保护性因素。决策树模型与多因素Logistic回归模型相比,总体准确率为92.2%和93.3%,AUC为0.890(95%CI:0.839~0.940)和0.926(95%CI:0.887~0.964),敏感度为87.0%和85.3%,特异度为81.0%和89.2%。结论既往有胆道取石史、胆总管直径>1.60 cm和既往有胆囊切除史是影响结石复发的高危危险因素。决策树模型简单易行,可以较好地预测结石患者的复发风险,可用于筛选ERCP后胆总管结石复发的高危人群,并针对性预防。

Toll样受体4及核因子-κB在脂多糖诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9表达中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子(NF-)κB在脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达中的作用,观察TLR4抑制剂TAK-242对MMP-9表达的影响。方法以终浓度为0、0.1、1、10、100μg/L的LPS刺激HBE4-E6/E7细胞24h,或以LPS(终浓度10μg/L)刺激细胞0、8、12、16、24h,检测LPS刺激与MMP-9表达的量效和时效性关系。以TAK-242(100μg/L)或PDTC(50mg/L)预处理HBE4-E6/E7细胞后以100μg/L LPS刺激24h,采用RT-PCR检测MMP-9mRNA表达,用Western blotting检测MMP-9蛋白表达,以明胶酶谱法检测MMP-9酶活性,采用凝胶阻滞实验检测活化NF-κB的含量。结果 MMP-9mRNA表达随着LPS刺激剂量的增加而增加(P<0.05),且随着LPS刺激时间延长,MMP-9mRNA表达量亦显著增加(P<0.05)。TAK-242和PDTC均能显著抑制LPS诱导的MMP-9mRNA和蛋白的表达,降低其酶活性(P<0.05)。TAK-242和PDTC均能显著降低LPS诱导的活化NF-κB含量(P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路在LPS诱导的气道上皮细胞MMP-9表达中发挥着重要的调控作用;TAK-242可抑制LPS诱导的MMP-9的表达。

miR-328-5p靶向SPON2介导FAK/Src信号调控胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-328-5p对胃癌细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法将30只小鼠按照随机数字表法分为胃癌组和正常组,每组15只,采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)化学诱导法构建小鼠胃癌模型,采用RT-PCR法检测两组小鼠胃组织中miR-328-5p、脊椎蛋白2(SPON2)相对表达量;Western blot法检测两组小鼠胃组织中酪氨酸蛋白激酶(Src)、磷酸化Src(p-Src)、局部黏着斑激酶(FAK)、磷酸化FAK(p-FAK)蛋白表达水平。将胃癌细胞系SGC7901分为miR-328-5p组、miR-con组、NC组共3组,采用RT-PCR法检测3组细胞miR-328-5p、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)相对表达量;采用Transwell小室实验检测3组细胞迁移和侵袭数。采用荧光素酶报告基因实验检测胃癌细胞miR-328-5p、miR-con+SPON2基因野生型(WT)和突变型(MUT)的荧光素酶相对活力值。结果与正常组比较,胃癌组胃组织中miR-328-5p相对表达量明显降低,SPON2相对表达量明显升高(均P<0.05);与正常组比较,胃癌组胃组织中p-FAK、p-Src蛋白表达水平均明显升高(均P<0.05)。与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组miR-328-5p相对表达量明显升高,同时Vimentin、MMP-9相对表达量均明显降低(均P<0.05);与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组细胞迁移数和侵袭数均明显降低(均P<0.05)。与miR-328-5p+SPON2 WT组比较,miR-con+SPON2 WT组、miR-con+SPON2 MUT组、miR-328-5p+SPON2 MUT组荧光素酶相对活力值均明显为高(均P<0.05)。结论miR-328-5p在胃癌组织中呈低表达,过表达miR-328-5p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-328-5p直接靶向SPON2基因3'UTR序列,调控其转录表达,并抑制其下游FAK/Src信号活化及其下游Vimentin、MMP-9的表达。

微创时代新生代胰腺外科医师的成长与培训

21世纪,外科进入微创时代。微创胰腺手术具有出血少、疼痛轻、恢复快等微创优势,已经成为发展趋势。新生代胰腺外科医师站在微创外科时代的风口,面对着新的挑战和机遇。笔者将从微创模拟培训、临床实践培训及职业认知三方面简述新生代胰腺外科医师的成长过程和培训要点。

微创时代胰腺肿瘤的诊治策略

胰腺恶性肿瘤诊断困难,预后极差,是当今的“癌中之王”。外科手术切除曾经是最主要的治疗手段,增强CT则是诊断和评估可切除性的依据。随着不断微创外科的发展,几乎所有的手术都可以在腹腔镜或机器人下完成,外科已进入微创时代。胰腺肿瘤的诊断也日新月异,如超声已经从显像发展到内镜超声显像及穿刺活检,并可测定弹力比,预测化疗敏感性。随着对胰腺肿瘤生物学特性的深入了解,胰腺外科医师认识到胰腺肿瘤类型众多,并非所有的肿瘤都是胰腺癌。对不同类型和病期的胰腺肿瘤,可采取不同的治疗方案。除了经典的标准术式,对于良性或低度恶性的胰腺肿瘤,可采取功能保留术式,保证术后生活质量。对局部进展期或晚期病例,积极实施新辅助放化疗、免疫治疗、靶向治疗,可望降期或转化后手术。因而,在微创时代,我们倡导胰腺肿瘤的诊治策略应该基于“以微创为核心”多学科合作(MDT),进行精准评估。可手术者,尽可能微创手术;不适宜手术的,仍进行积极的综合治疗,争取转化后手术。

再谈腹腔镜与机器人胰腺手术的优势和劣势

腹腔镜手术较传统开放手术有明显的微创优势,深得医护人员和病人及其家属的青睐,是近30年外科学发展的主流。笔者团队于1997年开始腹腔镜胆囊手术,并于2001年在国内率先开展腹腔镜胰腺手术,手术量至今近2000例。2016年开展机器人手术初期,笔者曾对两者进行比较^([1])。近年来,机器人设备引进逐渐增多,并国产化,引起医师、病人、医院管理人员越来越多的关注。机器人手术已超过350例,较前有更多的经验和体会。现结合文献再谈两者的优劣。

胰腺癌外科治疗进展

胰腺癌恶性程度高,是当今“癌中之王”。外科治愈性切除是胰腺癌患者长期生存的先决条件。近年来,随着腹腔镜手术的兴起,外科已经进入微创时代;胰腺癌化疗、放疗和免疫治疗也有长足进展,并从术后辅助治疗走向术前新辅助治疗,多学科合作(MDT)成为肿瘤治疗新模式。本文介绍胰腺癌术前新辅助治疗、微创手术及以微创为核心的MDT模式。

ARID2在胰腺癌组织中表达的临床研究

目的探讨ARID2在胰腺癌与癌旁组织中的表达情况及其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP法,检测60例胰腺腺癌及其癌旁组织中ARID2的表达情况,并结合临床病理资料进行统计分析。结果 ARID2主要表达于细胞核。胰腺癌组织中ARID2阳性表达19例(31.7%),癌旁正常组织中ARID2阳性表达46例(76.7%),差异有统计学意义(P<001)。胰腺癌组织中ARID2的表达与肿瘤分化程度、分期、淋巴转移及远处转移明显相关(均P<0.05),但与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位无相关性(均P>0.05)。结论 ARID2在胰腺癌中低表达,且其表达程度与胰腺癌进展呈负相关,提示其可能在胰腺癌发生、发展中发挥抑癌作用,是胰腺癌预后的良好指标,可为临床诊治提供一定的参考依据。

再生蛋白4的相关表达在胰腺癌诊断中的意义

目的:探讨检测血清中再生蛋白4(REG4)水平在胰腺癌诊治中的作用。方法:分别采用ELISA法和化学发光免疫法对84例胰腺癌血清REG4和CA19-9进行测定,并与58例胰腺良性疾病和70名正常人进行比较,分析REG4对胰腺癌的临床诊断价值。结果:胰腺癌病人血清REG4水平[(2.34±1.37)μg/L]明显高于胰腺良性疾病[(0.82±0.57)μg/L](P<0.001)和正常人[(0.73±0.43)μg/L](P<0.001);Ⅰ+Ⅱ期胰腺癌REG4升高的病人数明显高于CA19-9升高的病人数(P=0.031)。联合检测血清REG4和CA19-9可将诊断灵敏度提高至90.5%,术后监测表明,胰腺癌切除术后血清REG4下降。血清REG4表达与胰腺癌细胞REG4表达明显相关(χ2=7.54,P<0.001)。结论:血清REG4是一个潜在的胰腺癌血清标志物,对胰腺癌的诊断和随访具有临床价值。

miR-146b-5p靶向调控NAIF1抑制胃癌细胞凋亡

目的分析miR-146b-5p对胃癌细胞MGC803增殖与凋亡的调控作用及分子机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞系(MGC803、BGC823、MKN28、MKN45和SGC7901)中miR-146b-5p水平;应用miR-146b-5p抑制剂(inhibitor)和阴性对照(miRNA-NC)分别转染胃癌细胞MGC803,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例;TargetScan数据库分析miR-146b-5p的潜在靶基因,蛋白免疫印迹技术(western blot)检测核诱导凋亡因子1(NAIF1)蛋白表达水平;双荧光素酶实验验证miR-146b-5p和NAIF1之间的关系。结果不同胃癌细胞系(MGC803、BGC823、SGC7901、MKN45和MKN28)miR-146b-5p水平均高于正常人胃黏膜细胞(GES-1)(t分别=26.21、13.08、11.09、11.09、6.41,P均<0.05)。miR-146b-5p inhibitor转染胃癌细胞MGC803后miR-146b-5p水平明显降低(t=9.14,P<0.05)。抑制MGC803胃癌细胞miR-146b-5p水平后,细胞活力明显降低,细胞凋亡比例升高(t分别=3.73、9.55,P均<0.05)。miR-146b-5p mimics转染组WT-NAIF1荧光素酶活性明显低于miRNA-NC组(t=8.35,P<0.05)。Western blot结果表明,上调miR-146b-5p水平后,NAIF1蛋白表达明显降低(t=5.67,P<0.05),而下调miR-146b-5p水平后,NAIF1蛋白表达明显升高(t=4.32,P<0.05),在过表达NAIF1的基础上转染miR-146b-5p,细胞活力明显升高,细胞凋亡比例降低(t分别=6.54、4.73,P均<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向抑制NAIF1抑制胃癌细胞凋亡。

紫杉醇腹腔热灌注化疗对胃癌腹膜转移患者生存期的影响

目的探讨紫杉醇腹腔热灌注化疗(HIPEC)对胃癌腹膜转移患者生存期的影响。方法回顾性分析55例胃癌腹膜转移患者,所有患者均行腹腔镜探查术,术中冰冻病理明确诊断腹膜转移。采用BRTRG-I型高精度体腔热灌注治疗系统,在术后第1天、第3天、第5天使用紫杉醇HIPEC治疗。分析胃癌腹膜转移患者行紫杉醇HIPEC后对生存期的影响,对可能影响生存期的因素进行生存分析。结果胃癌腹膜转移患者使用紫杉醇HIPEC后中位生存时间11个月,1年生存率可以达到49.09%,3年生存率为5.45%。单因素分析显示,肿瘤类型对胃癌腹膜转移患者行HIPEC后生存率有明显影响,差异有统计学意义(χ^(2)=12.97,P<0.05),胃腺癌腹腔转移患者3年生存率较高。性别、年龄、分化程度和肿瘤标志物对胃癌腹膜转移患者行HIPEC后生存率无明显影响,差异均无统计学意义(χ^(2)分别=0.08、0.65、1.45、0.04,P均>0.05)。进一步多元线性回归分析显示,肿瘤类型不能独立影响胃癌腹膜转移患者行紫杉醇HIPEC后的生存率(χ^(2)=3.03,P>0.05)。结论胃癌腹膜转移患者行紫杉醇HIPEC可以延长患者的生存期。胃腺癌腹腔转移患者行紫杉醇HIPEC的预后可能更好。

Klotho基因与肿瘤关系的研究进展

Klotho基因是Kuro-o等[1]在研究自发性高血压时发现的与人类衰老密切相关的基因。该基因与人类心血管疾病、肾脏疾病及骨质疏松等衰老性疾病密切相关。近年来的研究认为Klotho基因的异常表达可能参与到肿瘤的发生、发展，作为一个抑癌基因参与调控多种肿瘤的生物学过程[2]。本文现就Klotho基因及其与肿瘤的关系进行综述。

Maruyama软件术前预测胃癌淋巴结转移的前瞻性研究

[目的]研究应用Maruyama软件术前预测胃癌淋巴结转移范围的可靠性和可行性。[方法]选择2002年1月～2004年6月间施行根治术的胃癌病人166例进行前瞻性研究。将患者性别、年龄、Borrmann分型、组织学类型、浸润深度、肿瘤部位及大小等预后因素输入计算机,应用Maruyama软件对淋巴结转移范围进行分析,并与术后病理诊断结果比较。[结果]Maruyama软件对各站淋巴结转移的术前预测准确率分别为N1:82.2%,N2:89.0%,N3:95.8%。[结论]Maruyama软件术前预测胃癌淋巴结转移率准确率较高,如能进一步提高术前对浸润深度的判断,将有望增加该软件的临床使用价值。

新时期腹腔镜胰十二指肠切除术面临的问题与对策

腹腔镜手术视野清、出血少,病人痛苦轻、恢复快,微创优势明显,使外科进入微创时代[1]。胰十二指肠切除术(Pancreaticoduodenectomy,PD)切除脏器多,重建复杂,术后风险高,是腹部外科最具挑战性的手术。随着腹腔镜器械及设备的更新换代和腹腔镜技术的提高,腹腔镜胰十二指肠切除术(Laparoscopic pancreaticoduodenectomy,LPD)不再遥不可及,并成为腹腔镜外科和胰腺外科的热点[2,3]。

腹腔镜胰十二指肠切除术中网膜垫技术的应用

胰漏是胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy,PD)最常见、最严重的并发症,发生率为6.7%~53%[1]。若处理不当,易继发腹腔出血、感染,极具致命性[2]。近年来,有学者利用大网膜包裹胰肠吻合口来减少胰漏的发生,并减轻其危害性,初步效果明显[2-3]。近年,腹腔镜PD(laparoscopic pancreaticoduodenectomy,LPD)在少数中心已成为常规术式[4]。

腹腔镜胰十二指肠切除术技术关键的认识

手术切除是治疗胰头癌及壶腹部周围肿瘤的标准治疗,也是唯一的根治手段。因其切除范围广,切除器官多,重建技术复杂,术后并发症发生率高,是腹部外科难度最高的手术。传统开腹胰十二指肠切除术因切口较大,而有疼痛、感染甚至切口疝等切口相关并发症。