HLAⅠ基因型配合输注策略用于免疫性血小板输注无效的实验研究

目的利用血小板供者HLA基因分型库,针对PTR患者建立供受者HLA-A、B位点基因配合型输注策略,以提高临床血小板输注疗效。方法以血清学交叉配合试验作为免疫性PTR的初筛手段,对初筛阳性的35例PTR患者采取血小板基因配型策略,其中24例进行HLA-A、-B基因分型和血小板HLAⅠ类抗体检测,根据患者血小板基因型和供者特异性抗体(DSA)回避策略以及供受者CREG配合等级原则,在单采血小板因型数据库中搜寻配合型供者,其中DSA回避优先于CREG等级原则,共计83次输注。其余11例患者仅按照HLA交叉反应组CREG的配合等级原则选择供受者HLA-A,-B抗原基因型相合的供者,共计55次输注。回访临床患者相关资料及基因配型的血小板输注效果,统计分析校正的血小板计数增值(CCI)。结果对临床送检的35例PTR患者先后进行了453次ABO同型的血清学交叉配合试验,人均为12.94次(453/35),每次血小板交叉配型的供者平均人数为4.21(1908/453)人,血清学交叉配合试验阳性率为69.86%(1333/1908)。其中对24例患者标本进行了HLAⅠ类抗体检测,仅有1例标本为抗体阴性,即HLAⅠ类抗体阳性检出率为95.83%(23/24),且平均每个患者有(44.37±22.31)种特异性抗体;根据患者血清中抗体荧光强度值的高低,抗体为强阳性17例、阳性20例、弱阳性23例,其对应的检出率分别为73.91%(17/23)、86.96%(20/23)和100%(23/23)。138次HLA基因配合型输注后的血小板首次计数CCI均值为14.08±11.12[(23.95±21.28)h],高于1h CCI(>7.5有效)或24h CCI(>4.5有效),且DSA回避组输注效果(首次计数CCI为15.56±11.00)显著优于非DSA回避组(首次计数CCI为11.86±12.00)(P<0.05)。在所有患者输注中,49.28%的输注同时存在1种或多种非免疫因素。结论HLA-I基因配型血小板输注策略是预防和改善免疫相关性血小板输注无效的可行方法,对于多次输血且血小板相关抗体初筛阳性的患者,采取DSA回避和供受者CREG配合型输注策略可显著提高输血疗效,为临床提供血小板精准输注。

浙江省无偿献血人群抗HTLV感染状况分析

目的回顾分析浙江省无偿献血人群抗HTLV血清阳性率,对不同年龄、性别、地区、献血频次献血者抗HTLV血清阳性率进行比较。方法对2016年3月至2018年2月全省献血者血液标本采用酶联免疫吸附测定法进行抗HTLV筛检,抗HTLV反应性标本用免疫印迹试验进行确认。不同年龄、性别、地区、献血频次献血者抗HTLV血清阳性率比较采用χ^(2)检验。结果共检测无偿献血者标本1346673例,其中抗HTLV反应性为362例,反应性率为0.027%。确认阳性为48例,阳性率为0.004%。统计分析显示,不同年龄组无偿献血人群抗HTLV血清阳性率的差异、初次献血者与重复献血者抗-HTLV血清阳性率的差异、不同地区无偿献血人群抗HTLV血清阳性率差异均有统计学意义(P<0.01),但不同性别无偿献血人群抗HTLV血清阳性率无显著性差异。结论浙江省无偿献血人群HTLV感染率较低,不同年龄、献血频次和地区抗HTLV阳性率存在差异,应加强重复献血者队伍的建设,保障血液的安全。

核酸检测技术在脐带血保存产妇血液标本检测中的应用研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)与核酸检测(nucleic acid testing,NAT)筛查保存脐带血的产妇血液标本检测结果,评估NAT在产妇血液筛查中应用的必要性。方法选取2018年7月至2020年12月浙江省脐带血造血干细胞库送检的47579例保存脐带血的产妇血液标本,对产妇外周血液标本进行HBsAg、HCV抗体、HIV-1/2抗体的ELISA检测,以及HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA的NAT检测。结果47579例产妇血液标本共检出ELISA无反应性但NAT阳性血液标本43例(0.09%),经鉴别检测17例(0.04%)为HBV DNA阳性,无HCV RNA阳性和HIV RNA阳性结果;另26例标本NAT联检筛查阳性,鉴别试验均为阴性。2018—2020年NAT单阳性率分别为0.14%、0.05%和0.11%,差异有统计学意义(χ^(2)=8.439,P=0.015);2018—2020年HBV鉴别单阳性率分别为0.05%、0.02%和0.05%,差异无统计学意义(χ^(2)=4.145,P=0.126)。结论ELISA检测合格的产妇血液仍有传播病原体的风险,NAT可以进一步提高血液病毒检测结果的准确性,对于降低因母婴垂直传播导致脐带血输注传播病原体风险有重要意义。

浙江省某地医共体输血共享管理工作中的问题与对策

分析了某地医共体试点建设以来,医共体内输血共享管理现状及存在的问题:医共体内的成员单位,特别是山区、海岛等偏远地区,由于交通不便、血液贮存期短等原因,存在基层临床用血困难、应急保障能力不足和血液利用率不高等问题和困难。在此基础上,引入5D模型管理学理念,建立医共体输血共享中心运行机制,建立人员、设备、物料、技术和血液保障“五统一”模式,提出了构建医共体内血液资源合理调配的血液应急体系等具体对策和建议。

2016至2020年杭州地区无偿献血人群HIV感染状况分析

目的了解杭州地区无偿献血人群HIV感染状况,为本地区降低HIV经输血传播风险,制定有效献血者招募及艾滋病防控策略提供数据支持。方法采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和病原体核酸检测技术(nucleic acid testing,NAT)对2016年1月至2020年12月杭州地区902847例无偿献血者标本进行抗HIV-Ⅰ/Ⅱ抗体/抗原和HIVRNA检测。抗-HIV抗体/抗原或HIVRNA反应性标本送杭州市疾病控制中心进一步采用Western blot法和NAT进行确认。结果2016年1月至2020年12月杭州地区共检测HIV确证阳性103例,阳性检出率为0.01%,其中101例ELISA和NAT筛查均为阳性反应,2例ELISA筛查为阴性反应,NAT为阳性反应。103例感染者中,以男性(91.26%,94/103)、18~35岁(69.90%,72/103)、初次献血者(68.93%,71/103)为主。2016至2020年献血者HIV阳性率呈逐年下降趋势(χ^(2)=7.181,P=0.007)。男女献血者HIV阳性率各年的差异无统计学意义(χ^(2)=10.336,P=0.350;χ^(2)=0.653,P=0.957)。各年龄组献血者HIV阳性率各年的差异无统计学意义(χ^(2)=6.378,P=0.173;χ^(2)=2.318,P=0.678;χ^(2)=5.284,P=0.259;χ^(2)=9.183,P=0.057)。结论近5年HIV感染在杭州市无偿献血人群中呈低流行水平,但仍存在感染风险,应加强在低危人群中招募献血者并且应采用先进的检测技术,选择合适的检测策略,保证血液安全。

杭州地区无偿献血者血液筛查中丙型肝炎病毒残余风险的评估

目的评估杭州地区无偿献血者血液筛查过程中丙型肝炎病毒(Hepatitis c virus,HCV)的残余风险。方法回顾分析本中心2016年1月~2017年12月无偿捐献全血者284691例次,HCV血液筛查流程采用两次酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和一次核酸检测(Nucleic acid test,NAT)模式。利用流行率-窗口期残余风险模型对初次献血者和重复献血者进行HCV残留风险评估。结果杭州地区捐献全血的初次献血者HCV检测阳性率显著高于重复献血者(P<0.01)。初次献血者HCV流行率为每10万4.530(95%CI:2.712~5.211),ELISA检测残余风险为每百万7.446(95%CI:4.458~8.565),NAT检测残余风险每百万0.621(95%CI:0.372~0.714)。重复献血者HCV流行率为每10万1.510(95%CI:0.904~1.737),ELISA检测残余风险为每百万2.482(95%CI:1.486~2.855),NAT检测残余风险每百万0.207(95%CI:0.124~0.238)。结论开展血液核酸检测可明显降低HCV血液筛查的残余风险,杭州地区输血传播HCV的残留风险处于非常安全水平。

113例呼吸系统疾病患者红细胞血型不规则抗体的回顾研究

目的研究呼吸系统疾病患者红细胞血型不规则抗体的特点。方法回顾性分析2012年11月至2021年6月间收集的113例呼吸系统疾病患者红细胞血型不规则抗体鉴定结果。结果本研究呼吸系统疾病患者以肺炎类和肺部肿瘤类多见。113例患者中有86例患者检出15种红细胞血型不规则抗体,占比前三位的分别是抗-M(25.58%)、冷凝集素(25.58%)、抗-E(15.12%)。肺炎和肺部肿瘤患者抗-M比例分别为12.82%和44.44%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.32,P<0.05);抗-E比例分别为17.95%和22.22%,差异无统计学意义(χ^(2)=0.00,P>0.05);冷凝集素比例分别为33.33%和5.56%,差异无统计学意义(χ^(2)=3.74,P>0.05)。结论肺部疾病患者红细胞血型不规则抗体以抗-M、冷凝集素和抗-E多见。

一例产生抗-P的罕见P1+P^K+P-个体的血清学和分子生物学研究

目的研究1例P1+P^K+P-(P1^K)表型个体的血型、抗体及其分子机制。方法采用血清学方法鉴定血型和不规则抗体,采用PCR扩增α-1,4-半乳糖基转移酶基因(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)和β-1,3-N-乙酰半乳糖氨基转移酶基因(β-1,3-N-acetylgalactosaminyltransferase,B3GALNT1)编码区,并测序分析DNA序列。结果血清学试验鉴定受检者为P1^K表型,血清中含有可与P阳性红细胞凝集并溶血的抗-P,分子生物学技术发现其B3GALNT1基因编码区存在c.202C>T(CGA>TGA)纯合突变。结论受检者为罕见的P1^K表型,血清中存在抗-P,B3GALNT1基因c.202C>T无义突变可能是导致其P1^K表型的分子机制。

AllType NGS11位点测序试剂在HLA-DPB1基因分型中的模棱两可结果分析

目的 统计分析AllType NGS 11位点测序试剂在Ion Torrent S5和Illumina Miseq 2种二代测序平台对HLA-DPB1基因进行分型检测时的模棱两可结果情况。方法 采用One Lambda公司AllType NGS 11位点测序试剂盒检测434个患者或供者标本的HLA-DPB1基因,其中在Ion Torrent S5测序平台上检测了336个标本,在Illumina Miseq测序平台上检测了98个标本;并同步对434份标本采用PCR-SSO流式磁珠法复核HLA-DPB1基因。对HLA-DPB1*13∶01∶01/107∶01模棱两可等位基因,采用Sanger测序法检测区分。使用TypeStream Visual专业软件指定NGS法的HLA-DPB1基因分型结果,直接计数法统计分析模棱两可组合比例。结果 NGS法以HLA-DPB1命名*后第3区域数字作为高分辨结果进行统计,434个标本中共有357个标本出现模棱两可结果,占82.3%(357/434);其中Ion Torrent S5测序平台336个标本有275个标本存在模棱两可结果,占81.8%(275/336),表现出45种类型;Illumina Miseq测序平台98个标本有82个标本存在模棱两可结果,占83.7%(82/98),表现出27种类型。所有标本HLA-DPB1基因经PCR-SSO法复核,未发现NGS法漏检HLA-DPB1等位基因情况。Sanger测序法检测区分41个标本,共43个HLA-DPB1*13∶01∶01/107∶01模棱两可的等位基因,发现HLA-DPB1*13∶01∶01等位基因为25个,占58.1%(25/43);HLA-DPB1*107∶01等位基因为18个,占41.9%(18/43)。结论 应用AllType NGS 11位点测序试剂仍有较高比例的HLA-DPB1基因模棱两可组合结果。利用Sanger测序法分析HLA-DPB1基因1号外显子可区分解决部分HLA-DPB1*13∶01∶01/107∶01模棱两可等位基因。

HLA-B和-DRB1、HLA-DQB1和-DPB1座位基因重组的分析

目的:探讨2个家系人类白细胞抗原(HLA)座位的重组情况。方法:采集家系成员的外周血,提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针技术(PCR-SSO)和二代测序技术检测HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1和-DPB1座位,通过家系遗传分析确定个体HLA单体型。结果:家系1中单体型HLA-A*11:01~C*03:04~B*13:01~DRB1*12:02~DQB1*03:01~DPB1*05:01:01G与HLA-A*03:01~C*04:01~B*35:03~DRB1*12:01~DQB1*03:01~DPB1*04:01:01G在HLA-B和HLA-DRB1座位间进行了交换,形成HLA-A*11:01~C*03:04~B*13:01~DRB1*12:01~DQB1*03:01~DPB1*04:01:01G。家系2中单体型HLA-A*02:06~C*03:03~B*35:01~DRB1*08:02~DQB1*04:02~DPB1*13:01:01G与HLA-A*11:01~C*07:02~B*38:02~DRB1*15:02~DQB1*05:01~DPB1*05:01:01G在HLA-DQB1和HLA-DPB1座位间进行了交换,形成HLA-A*02:06~C*03:03~B*35:01~DRB1*08:02~DQB1*04:02~DPB1*05:01:01G。结论:2个中国汉族人群家系分别发生了HLA-B和-DRB1、HLA-DQB1和-DPB1座位间的基因重组。

1例p血型白血病患儿的用血管理

目的分析1例p血型白血病患儿的免疫血清学特点、p血型分子基础及用血管理和治疗,为罕见血型白血病患儿临床治疗提供参考。方法采用血清学方法检测p表型和抗-PP1Pk(-Tj^(a))抗体,并联合测序分析。结果该患儿为p血型,血清中含有抗-Tj^(a)。A 4GALT基因检测结果发现该例患儿为c.343 A>T(AAA>TAA)纯合突变,多态性位点c.903 C>G(CCC>CCG)纯合突变。调整常规化疗方案后,配合红细胞输注,治疗过程顺利。结论该白血病患儿为罕见p血型,为配合用血管理,需要合理调整临床治疗方案。对于拥有罕见血型的血液系统疾病患者,需要得到更加精细化的用血管理,并调整常规化疗方案。

基于序列的多重聚合酶链反应对献血者HLA/HPA基因分型

目的研究嘉兴地区献血者HLA-I类(A、B位点)和HPA基因表达情况,建立本地区血小板基因数据库。方法采用基于序列的多重聚合酶链反应(multiplex PCR-SBT)对嘉兴地区5,411例样本进行HLA-I类(A、B)基因测序,对其中199例单采血小板献血者样本进行HPA1-6、15、21w系统基因分型,统计分析HLA-I类和HPA1-6、15、21w基因频率分布情况。结果5,411例样本中共检出HLA-A、B位点等位基因53种,其中HLA-A位点等位基因15个,频率前5位为A*2(0.3040)、A*11(0.2384)、A*24(0.1771)、A*33(0.0893)、A*30(0.0493);HLA-B位点等位基因38个,频率前5位为B*46(0.1137)、B*60(0.1136)、B*13(0.0931)、B*62(0.0822)和B*58(0.0820)。HPA1~6、15、21w系统均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,具有恒定性,以HPA-3杂合度(a/b杂合子基因型)最高(0.482),其次为HPA-15(0.437),HPA-3、15系统中a、b抗原频率相近,HPA-3、15系统有b/b纯合子基因型,分别为0.196,0.266。其余5个系统均以a/a纯合子基因型为主,分别为0.995、0.8995、0.990、0.975、0.945,未见b/b基因型。结论HLA-A、B位点和HPA3、15系统基因具有多态性分布特点,建立献血者HLA/HPA基因数据库可有效解决血小板输注无效问题。

血站单采血小板献血者HLA和HPA基因型数据库的调查和分析

目的 调查分析国内血站系统单采血小板献血者HLA和HPA基因型数据库情况,以促进其建库发展和应用。方法 制定调查表并经专业人员审定,培训调查人员后依据实际情况填写表单,然后收集数据进行分析。结果 调查的24个血站中,有18个建立了血小板献血者HLA和HPA基因型数据库,合计有25 240人;2017年HLA或HPA基因型配合应用总共为137例。有5个血站建立了CD36抗原阴性筛查数据库。入库标本进行了HLA-A,-B位点检测,而HPA系统检测范围不同血站存在差异,其中9个血站只检测HPA 1-6, 15, 21w系统。13个血站采用聚合酶链反应核苷酸特异性引物技术检测HPA系统基因型。13个血站开展HPA抗体检测,6个血站开展CD36抗体检测。结论 血站已建立一定规模的单采血小板献血者HLA和HPA基因型数据库,但其应用存在明显不足。

血小板捐献者血型资料数据库的建设与应用展望

供受者血小板配合输注可有效解决免疫性血小板输注无效问题。由于受HLA和HPA基因系统多态性、人群中CD36抗原缺乏个体比例及临床应用需求时限性等因素的影响,需要提前建立有一定规模的血小板捐献者血型资料库,才可能在临床需要时及时提供配合性血小板。血小板捐献者血型资料库涉及HLA-A,-B基因型资料库、HPA基因型资料库和CD36抗原阴性资料库;国内部分血站已建立200—4 000(人)份捐献者血小板血型资料库。建库中献血者选择、HLA-C位点覆盖问题、HPA系统最适检测范围和检测方法选择仍有待标准化。血小板捐献者血型资料库具有良好的应用前景,但仍需要通过扩大血小板捐献者基因型资料库规模、缩短配合血小板制备发放流程所需时间和加强临床沟通等措施,来提升基因型配合血小板的临床应用。

大规模伤亡事件血液保障与需求预测的研究进展

当前,大规模伤亡事件已经成为一种全球现象,直接对一个国家的医疗体系带来严峻考验[1-2],如何利用有限的资源对蜂拥而至的伤员进行及时、合理、有效的救治和处理,已逐渐成为各国专家学者关注的重要课题。在伤员救治过程中,血液是必备物资,对于降低伤员病死率具有显著作用[3]。本文综述了大规模伤亡事件的主要特点和挑战、血液的重要性与特殊性,以及目前血液需求预测的困境和研究现状。

基于计划行为理论的重复献血行为调查量表的信效度分析

目的检验基于计划行为理论的重复献血行为调查量表的信效度,为分析重复献血的意向及影响因素提供有效的测量工具。方法采用分层抽样方法选取调查对象,以短信发送加H5答题的方式获取数据,获取有效问卷3093份。采用克朗巴赫系数、折半系数、因子分析等方法分别对量表内部一致性信度、结构效度进行分析。结果条目7的相关性系数低于0.5,予以删除,其余条目的相关性系数均大于0.5。最终量表包含29个问卷条目,其Cronbach’sα系数0.933>0.800,各维度Cronbach’sα系数均大于0.700。探索性因素分析结果均显示量表大部分条目的因素载荷均超过0.4,大部分因子平均方差抽取量大于0.5;高分组和低分组各条目得分差异均有统计学意义(P<0.01)。结论该量表具有良好的信效度,可用于发现进一步强化献血人群献血意向的具体因素,进而为提升人群重复献血率提供干预方案。

血小板数字化配型信息体系构建及其应用

目的 构建血小板数字化配型信息系统。方法 设计血小板数字化配型管理信息框架,开发血小板基因库管理模块主要功能,并与已建成运行的临床申请、实验室检测、献血服务、血液库存与发放等模块对接,将信息系统进行初步的临床应用。结果 成功开发了血小板配型信息体系,入库HLA和HPA已分型数据单采献血者5 048例,完成306份搜寻报告。16.5%的搜寻报告即刻在库存血液中找到配合型血小板,所有配型的中位等待时间为3 d。自动血液锁定方式比手动方式的等待时间明显缩短(3.8±3.1 d和5.4±5.4 d)。结论 研发的血小板数字化配型信息系统实现了献血者和患者的全流程管理,有助于提高血小板配型水平。

多维度质量检查模型在采供血机构COVID-19疫情防控常态化下的应用初探

目的在COVID-19疫情常态化防控期间,通过探索多维度结合的质量检查模型,监控采供血机构疫情防控的效果,以进一步加强传染病疫情防控、减少疫情防控期间站内感染,确保血液质量和血液安全。方法 COVID-19疫情防控期间,采用现场监测检查、视频监控、网络信息化等技术手段开展质量检查,对血站内的环境消毒、个人防护和血液产品质量等情况进行统计分析,对不同类型的质量检查模式进行分析比对。结果 2020年1月底-7月10日,开展疫情防控质量检查167 d共458点次,其中现场监测258点次、视频监测176点次、网络监测24次,发现不符合要求现象100例(21.8%)。对献血车、献血屋、单采成分献血室、成分制备室等共584个点位进行空气细菌检测,100%合格。对20位采血工作的手指和20位献血者进行穿刺部位进行细菌学检测,100%合格。抽检48袋单采血小板进行细菌学培养,均无细菌生长。抽检全血4袋和悬浮红细胞7袋、去白细胞悬浮红细胞21袋、新鲜冰冻血浆24袋、单采血小板48袋、辐照血液24袋、冷沉淀凝血因子24袋等血液成分,抽检结果均符合质量要求。结论通过多维度的质量检查,有效地实现了采供血业务质量检查全覆盖,同时也实现了中心所有非业务科室和公共场所疫情防控的全覆盖,确保了疫情防控期间质量检查符合要求,可以为采供血机构在COVID-19疫情常态化防控提供参考,对其他类型的传染病防控也有借鉴意义。

96例血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ类抗体特性分析及抗原免疫原性估算

目的 分析血小板基因配型患者的HLA-Ⅰ抗体特异性,并估算HLA抗原免疫原性。方法 标本来自医院送检本中心申请血小板基因配型的血小板输注无效(PTR)患者,共计96份。采用Luminex技术对患者标本进行HLA-Ⅰ抗体特异性检测,并根据MFI分析抗体表达水平。人群HLA抗原错配率、相对免疫原性根据HLA-A、-B位点等位基因频率分布和抗体检出频次分别进行估算。结果 96份患者标本均检出HLA-Ⅰ类抗体,但抗体种类分布较广。HLA-A、-B、-C磁珠包被抗原(共计97个)对应抗体的平均阳性检出率分别为0.38、0.47、0.28。在浙江人群中HLA-A和-B系统中,抗原频率较高的分别为HLA-A2、A11、A24和HLA-B60、B46、B58,其相对免疫原性分别为0.403、0.283、0.342和0.100、0.067、0.178。结论 PTR患者存在不同种类特性的HLA-Ⅰ抗体,证实不同HLA-A、-B抗原的相对免疫原性存在差异。

2014-2019年无偿献血者保密性弃血回告人群特征分析

目的分析无偿献血者保密性弃血回告人群情况,以进一步提升血液安全,减少经输血传播性疾病的发生。方法回顾分析浙江省血液中心2014—2019年864987人次无偿献血者中保密性弃血回告人群特征,分析献血者回告情况及回告人群特征、献血方式、血液检测结果、回告原因。结果献血者回告45人次,占0.0052%。其中,男性(35人次,占77.8%)、年龄18~40岁(34人次,占75.5%)为主要分布人群,街头献血(29人次,占64.4%)、首次献血(27人次,占60.0%)和全血献血(42人次,占93.3%)者居多。回告保密性弃血前4位原因分别为患有不适宜献血疾病(24人次,占53.3%)、存在高危行为(9人次,占20.0%)、乙肝或乙肝病毒携带者(5人次,占11.1%)和注射疫苗(5人次,占11.1%)。结论无偿献血者保密性弃血回告有助于提升血液安全,但弃血回告的原因以患有不适宜献血疾病为主,提示血站应加强献血者回告的宣传,加强对街头和首次献血者的宣教和征询。