用生物膜干涉技术快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

[目的]采用生物膜干涉技术建立快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的方法。[方法]首先通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定氨苄青霉素-BSA偶联物,结合40 nm纳米金标记的β-内酰胺类抗生素受体,建立了检测牛乳中β-内酰胺类抗生素的方法。[结果]生物膜干涉技术检测牛乳中的β-内酰胺类抗生素的灵敏度比胶体金免疫层析试纸条的灵敏度高1倍。该技术还具有良好的特异性,与浓度为1 000 ng/ml的黄曲霉毒素M1、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应。[结论]研究表明,金标记BLI检测β-内酰胺类抗生素的定量范围较小,并不适用于实际生产中的定量检测,但却是一种简便、快捷的定性检测方法,可用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的快速检测。

生物膜干涉技术快速定性检测牛乳中喹诺酮类药物残留

[目的]基于生物膜干涉技术建立一种快速检测牛乳中喹诺酮类抗生素残留的方法。[方法]通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定环丙沙星-BSA偶联物,结合纳米金-喹诺酮类抗生素单克隆抗体偶联物,建立了检测牛乳中喹诺酮类抗生素的方法。[结果]所建立的检测方法具有良好的灵敏度,比免疫层析法至少高出1倍。该检测方法还具有良好的特异性,与浓度1 000ng/ml的黄曲霉毒素M1、青霉素G、头孢噻呋、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应。该方法还具有良好的重复性,不同基质牛乳检测对检测结果无显著影响。分别采用免疫层析试纸条和建立的金标记BLI检测方法检测43份牛乳(原奶)样品中的喹诺酮类抗生素残留,二者检测结果一致。[结论]生物膜干涉技术检测牛乳中的喹诺酮类抗生素为一种简便、快捷的检测方法,可以用于牛乳中喹诺酮类抗生素残留的快速定性检测。

时间分辨荧光免疫分析技术在医学领域的应用

标记免疫分析技术是在抗原与抗体特异性反应的基础上标记各种可测量的标记物,是目前在微量检测领域独具优势的免疫分析技术。20世纪60年代初期,Yallow和Berson创立了放射性免疫分析方法（RIA）,因其具有极好的微量分析性能而迅速被应用于临床诊断和医学科学研究,但因其放射性危害、试剂昂贵且保存期短等劣势被限制了进一步发展。

人兽共患病免疫学快速检测技术的研究进展

人兽共患病是指人类与脊椎动物之间自然传播的疾病和感染性疾病。目前,全世界已证实的人兽共患传染病和寄生性动物病有250多种,其中较为重要的有89种,我国已证实的人兽共患病约有90种。当前人兽共患病呈现新的流行趋势：

水产饲料中真菌毒素污染现状及风险分析

主要介绍了水产饲料中一些主要真菌毒素污染情况及其对水产动物的危害,并在其基础上进行了水产饲料真菌毒素的风险防控调查,同时建议政府加强对水产企业的监管,大量推进产品生产质量管理规范(GMP)、危害分析和关键控制点(HACCP)等管理体系的落实,构建信息平台使行业信息共享,促进水产饲料、水产养殖业的健康发展。

除草剂百草枯的检测方法研究进展

综述了近几年百草枯残留的主要检测方法,其仪器分析法主要为液相色谱法、气相色谱法、质谱联用法及其他一些方法,并对今后百草枯的检测方法进行了展望。

无线传感器网络在食品冷链物流监控中的应用研究

物联网作为解决食品冷链物流监管不严的有效手段,成为各国关注的焦点,但由于物联网存在高功耗、可控距离短和价格昂贵等缺陷,限制了其在食品冷链物流中的推广,随着基于ZigBee技术的无线传感器网络成为物联网的核心技术,很好地解决了这些问题。利用基于ZigBee技术的多频段组网协调器和木质卡板监控系统,使用价格较低且布置密集的传感器,由无线传感器作为多跳路由进行传输,并结合RFID、GPS和GPRS等技术达到多频段密集采集数据,长、短距离传输自主切换,低功耗和低投入等目的,加快物联网在食品冷链物流中的应用和食品安全监管规范化的进程。

食品安全中苯甲酸检测方法的研究进展

详细介绍了在食品中最为常见的防腐用添加剂苯甲酸及其钠盐,重点阐述了利用光谱学、电位滴定、色谱学等方法对苯甲酸及其钠盐实现分析检测的原理、前处理手段及定量方法,在此基础上归纳评价了各方法的优缺点,并对面向现场的快速分析食品中苯甲酸的新方法进行了展望。

一种快速筛查志贺氏菌的荧光纳米免疫层析方法的建立

本文以建立志贺氏菌荧光纳米颗粒免疫层析法为目的。首先,制成志贺氏菌单抗-荧光纳米颗粒偶联物,以双抗体夹心模式制备志贺氏菌免疫层析试纸条。利用微型手持荧光检测仪读出质控线和检测线上的荧光信号,并利用荧光强度来半定量检测志贺氏菌。结果显示:用本研究建立的荧光纳米颗粒试纸条检测30株菌,对宋内志贺氏菌和福氏志贺氏菌呈阳性结果,其余菌株的呈阴性结果,试纸条灵敏度为9.0×104 CFU/m L。用志贺氏菌免疫层析试纸条和标准法检测60份样品,两种方法的总符合率为88.3%。结论:本研究成功建立了志贺氏菌的荧光纳米免疫层析检测方法,能够快速检测志贺氏菌,具有良好的特异性和灵敏性,便于开展现场快速检测。

狨猴血清中重组人5型腺病毒中和抗体滴度的测定

目的构建表达荧光素酶与绿色荧光蛋白报告基因的重组人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP,检测血清中和抗体最佳实验方法,分析小型灵长类动物普通棉耳狨猴体内腺病毒5型中和抗体水平,为评价腺病毒载体疫苗提供实验动物基础数据。方法利用ADMax包装系统,首先构建穿梭质粒p DC315-Luc-GFP,将所得的穿梭质粒和骨架质粒p BHGloxΔE1,3Cre共转染293A细胞,进行重组人5型腺病毒(r Ad5/Luc/GFP)的包装。通过3次空斑形成实验筛选出单克隆重组腺病毒,并在大量扩增单克隆腺病毒后用Cs Cl密度梯度离心法进行浓缩纯化。采用TCID50法测定纯化后病毒滴度,并挑选进行中和实验的最优病毒滴度。将合适病毒滴度的r Ad5/Luc/GFP与狨猴血清混合预孵育后感染293A细胞,分别采用化学发光法及流式细胞术,对14只普通棉耳狨猴血清中腺病毒5型中和抗体进行检测。结果 PCR、酶切和测序结果均表明穿梭质粒p DC315-Luc-GFP构建成功;GFP检测结果证明重组人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP包装扩增成功,病毒滴度可达6.9×1011.5PFU/m L。两种不同方法检测检测14只狨猴的中和抗体结果一致性较好(P<0.05,Kappa=0.811),化学发光法或流式细胞术检测阳性狨猴比率分别为28.6%(4/14)或21.4%(3/14),化学发光法检测得其中2只狨猴中和抗体滴度为1/16,另2只为1/32,而流式细胞术检测得滴度均为1/16。结论化学发光法是一种快速,准确,适用于多物种的方法,其灵敏度略高于以GFP为报告基因的流式细胞术(7.2%)。普通棉耳狨猴体内Ad5血清阳性率较低,有望应用基于此型或其他型别腺病毒作为载体进行基因治疗和基因疫苗研究。

液相色谱-串联质谱法检测对虾中T-2毒素的不确定度评定

目的评定液相色谱-串联质谱检测对虾中T-2毒素的不确定度。方法样品经乙酸乙酯提取,无水硫酸钠脱水,提取上清液氮气吹干后用1 mL 0.1%甲酸的甲醇:水溶液(3:7,V:V)定容,正己烷除脂。基质匹配法定量。液相采用甲醇和0.1%甲酸酸化的5 mmol/L乙酸铵溶液梯度洗脱,质谱采用电喷雾离子化方式下正离子的选择离子监测模式对T-2毒素的定量离子和定性离子进行监测。通过分析并计算检测过程中各不确定度分量得到合成标准不确定度。结果本方法检测T-2毒素的合成标准不确定度为0.739μg/kg,取置信概率95%的扩展不确定度为1.5μg/kg。所以,试样中T-2毒素的测量结果为:X=(12.7±1.5)μg/kg,k=2。结论此检测方法使外标法的定量结果更为真实有效,方法不确定度的评定亦可为采用空白基质匹配法的现行相关检测方法的不确定度评估提供参考。

C_(18)键合磁珠固相萃取-液质联用检测蜂王浆中磺胺二甲嘧啶残留

[目的]建立一种应用C18键合磁珠固相萃取-液质联用检测蜂王浆中磺胺二甲嘧啶残留的方法。[方法]MCX固相萃取小柱联合C18磁珠对蜂王浆进行前处理,用HPLC-串联质谱仪对净化后样本进行检测。[结果]该方法的线性范围是5～80μg/kg,相关系数0.993 1。添加水平为5、10、20μg/kg时各种化合物的平均回收率范围为93%～104%,RSD值均不大于11.3%。[结论]该方法简单、快速,结合自动化设备,可实现蜂王浆样品中磺胺二甲嘧啶测定前处理的自动化。

骨桥蛋白在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用

目的研究不同氧浓度下滋养细胞骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达与相应氧浓度下滋养细胞侵袭力的相关性,探讨OPN在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用。方法利用气体混配缺氧装置(QT-MTX-3),模拟子痫前期胎盘缺氧的低氧环境,培养人胎盘绒毛膜癌滋养细胞系BeWo细胞。采用Western印迹和实时荧光定量PCR方法,检测不同氧浓度对BeWo细胞OPN表达的影响。采用Transwell侵袭模型,探讨缺氧对BeWo细胞侵袭力的影响。结果 Western blot检测结果显示,缺氧48h后,低氧组OPN蛋白的表达水平均明显下降,且2%O2组OPN蛋白下降更显著。实时荧光定量PCR检测结果表明,缺氧对滋养细胞OPN mRNA的表达影响呈现出浓度时间依赖性,随着氧浓度的降低和缺氧时间的延长,OPN mRNA的表达呈显著下降趋势。Transwell侵袭实验结果显示,与常氧对照组相比,低氧组细胞侵袭力明显降低,8%O2组和2%O2组的细胞浸润指数分别为0.298 8和0.091 7(P<0.01)。采用Spearman相关分析法,比较OPN表达水平与BeWo细胞侵袭力的相关性,结果显示,随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力进一步下降,OPN表达水平与侵袭指数成正相关(rs=0.944,P<0.01)。结论缺氧降低滋养细胞OPN的表达,表现为浓度和时间依赖性;随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力下降。OPN低表达可能是子痫前期滋养细胞侵袭力下降的分子机制之一。

低氧对BeWo细胞骨桥蛋白表达的影响

目的体外模拟子痫前期胎盘缺氧的低氧环境培养滋养细胞,研究低氧对滋养细胞骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响,以进一步深入研究OPN在子痫前期发病机制中的作用。方法利用气体混配缺氧装置(QT-MTX-3)模拟子痫前期的发生发展过程,配置不同氧浓度,采用细胞免疫组化和实时荧光定量PCR检测人胎盘绒毛膜癌滋养细胞系BeWo细胞在不同氧浓度下OPN蛋白及其mRNA的表达。结果①在不同氧浓度的环境下,显微镜观察BeWo细胞的生长情况,发现其对低氧反应敏感,细胞形态发生明显的改变。②细胞免疫组化检测结果显示:OPN在各组BeWo细胞中均有表达,其免疫反应产物主要表达定位于胞质和胞膜中;缺氧24h各组的OPN蛋白表达无明显变化;但低氧48h后,低氧组OPN蛋白的表达水平均明显下降,且2%O2组OPN蛋白下降更显著。③实时荧光定量PCR检测结果表明低氧对滋养细胞OPN mRNA的表达影响呈现出浓度时间依赖性,即随着氧浓度的降低和低氧时间的延长,OPN mRNA的表达呈显著下降趋势。结论低氧使BeWo细胞OPN的表达降低,且呈浓度时间依赖性,类似于OPN在子痫前期胎盘组织的表达随病情加重而进一步降低,这可能是子痫前期胎盘中缺氧对滋养细胞功能影响的重要机制之一。

C18-磁性纳米颗粒萃取虾肉中氯霉素残留

建立了一种用C18键合磁珠固相萃取虾肉中氯霉素残留的方法。在Fe3O4超顺磁性纳米颗粒的表面键合C18基团,制备双功能反相萃取颗粒。用该颗粒对样品中的氯霉素残留进行固相萃取,对结合时间、温度、磁珠用量等因素进行了优化,建立磁珠法兽药残留固相萃取方法。用标准方法(SN/T 1864-2007)对萃取所得产物进行检测。经过优化,C18键合磁珠的最佳萃取条件为50℃结合5 min,用1 mL甲醇洗脱3次。检测结果显示该方法具有良好的精密度和回收率。在0.1～10μg/kg之间具有良好的线性关系,相关系数为0.9941,检出限为0.1μg/kg。该方法灵敏度高、重现性好、准确度高,可满足虾肉中氯霉素残留检测的需要。

毛细管气相色谱法测定地表水中甲拌磷和乙拌磷

本文建立了二氯甲烷液液萃取地表水样品,气相色谱法同时测定水中甲拌磷和乙拌磷的方法。本方法前处理操作简单,富集效率高,分析方法检出限低,精密度和加标回收率符合分析测试要求,适用于地表水中甲拌磷和乙拌磷的测定。

内源性β-内酰胺酶在生鲜牛乳中的区分与牧场管控方案的探索

通过耐药菌体外培养并借助牛乳中β-内酰胺酶高灵敏度快速检测试纸条产品及杯碟法等进行实验研究,对舒巴坦敏感的β-内酰胺酶杯碟法4 U检出限进行了一定程度的探讨,并在实践中获得了区分内源性β-内酰胺酶的参考方法,为牧场及奶农管控β-内酰胺酶提供了极为有效的参考方案。

滴滴涕单克隆抗体的制备及其评价

以滴滴涕（DDT）的特征部分为基础设计并合成了半抗原4-{4-[2,2,2-三氯-1-（4-氯-苯基）-乙基]-苯基}-丁酸（DDT-H1）、4-[4-（2,2,2-三氯-1-对甲苯基-乙基）-苯基]-丁酸（DDT-H2）,并采用活泼酯法制备免疫原DDT-H1-BSA,以及混合酸酐法制备包被原DDT-H1-OVA、DDT-H2-OVA;用DDT-H1-BSA对小鼠进行免疫,通过细胞融合、筛选、克隆等步骤得到1株能稳定分泌DDT农药抗体的单克隆细胞株。细胞株经扩大培养后,注射小鼠体内产生腹水,并将其用辛酸-硫酸铵和protein A柱子纯化出单克隆抗体。其分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类为Ig G1,单抗腹水的效价为1.68×10^5,亲和力Ka为5.238×10^11L·mol^-1,与其它几种代谢物有一定的交叉反应。在此基础上,利用获得的单抗研究建立DDT的间接竞争酶联免疫吸附检测法（ic ELISA）。结果表明,所建立的间接竞争ELISA方法的线性范围（IC20-IC80）为6.6-521.8 ng/mL,可用于检测农副产品、环境中残留的DDT及其代谢物。

快速检测联苯菊酯的胶体金层析试纸条研制

[目的]采用免疫胶体金技术,建立一种快速检测联苯菊酯的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法制备了联苯菊酯半抗原,并与载体蛋白偶联得到免疫抗原,利用人工免疫的方法获得其单克隆抗体,通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。联苯菊酯胶体金层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,并将联苯菊酯抗原与羊抗鼠Ig G分别喷制到硝酸纤维膜上,与样品垫、吸水垫组装在PVC衬板上制备而成。[结果]联苯菊酯胶体金层析试纸条检测限为500~800μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的拟除虫菊酯没有明显的交叉反应,利用该试纸条可实现对苋菜中联苯菊酯添加试验的准确判定。[结论]胶体金试纸条方法具有前处理简单、检测速度快、可以肉眼判断结果等优点,该试纸条有望实现对果蔬中联苯菊酯残留的快速筛查。

Determination of Sulfadimidine in Royal Jelly by C_(18)-functionalized Magnetic Silica Nanoparticles Solid Phase Extraction-High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

[Objective] This study aimed to develop a method of C_18-functionalized magnetic silica nanoparticles solid phase extraction-high performance liquid chro- matography-tandem mass spectrometry for the determination of sulfadimidine in royal jelly. [Method] The royal jelly samples were pretreated by MCX SPE column and C_18-functionalized magnetic silica nanoparticles, and the purified samples were de- tected by HPLC-MS/MS. [Result] The detection method showed a good linear rela- tionship in the range of 5-80 ugkg （r=0.993 1）. The recovery ranges were between 93%- 104% with the relative standard deviations （RSD） below 11.3%. [Conclusion] Combined with automation equipment, the method is simple, fast, time-saving, and easy to real- ize the automation of sulfadimidine in the royal jelly samples before determination.