鼻咽癌研究的回顾与展望（纪念湖南医科大学80周年校庆）

鼻咽癌研究的回顾与展望（纪念湖南医科大学８０周年校庆）湖南医科大学肿瘤研究所姚开泰关键词鼻咽肿瘤；癌；研究；发展趋势１实验动物模型时期（１９７２～１９８０）１．１选题根据鼻咽癌（ＮＰＣ）是我国南方和东南亚国家相对高发的恶性肿瘤，尤以广东最为突出，是世...

茶抗消化系统肿瘤的研究进展

茶抗消化系统肿瘤的研究进展赵燕１曹进１祝和成２作者单位：１．湖南医科大学茶与健康实验室（长沙４１００７８）２．湖南医科大学肿瘤研究所近年来，随着医学与茶学学科交叉日益紧密，茶及茶中很多组分的抗肿瘤研究呈现十分活跃的局面，尤其在茶抗消化系统肿瘤研究领域...

用单克隆抗体检测结直肠癌病人血清中肿瘤相关抗原的研究

自1975年kolher等发明杂交瘤—单克隆抗体（单抗）技术以来,国内外已生产了几种抗肠癌的单克隆抗体,并应用于癌症病人的血清学检测,其中单抗NS19—9,C50识别的CA19—9和CA50可作为胃肠道血清学检测的肿瘤标志物。孙去病等制备的单抗Hb3对结直肠癌有较好的特异性。

肺癌患者肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶mRNA表达及其抗肿瘤活性研究

目的了解一氧化氮（ＮＯ）在肺癌患者肺泡巨噬细胞（ＡＭ）抗肿瘤功能的作用以及ＡＭＮＯ活性。方法通过支气管肺泡灌洗（ＢＡＬ）获取人ＡＭ；ＭＴＴ法观察一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）抑制剂Ｌ┐单甲基精氨酸（ＬＮＭＭＡ）对ＡＭ细胞毒功能的影响；镀铜镉还原——Ｇｒｉｅｓｓ法检测ＡＭ培养上清液、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＮＯ含量；ＲＴ┐ＰＣＲ技术测定ＡＭｉＮＯＳｍＲＮＡ表达。结果（１）在ＬＮＭＭＡ存在条件下，肺癌患者ＡＭ细胞毒作用明显减弱（４３％ｖｓ２１％，Ｐ＜０．００１）。（２）肺癌患者荷瘤侧肺ＢＡＬＦ及ＡＭ培养上清液中ＮＯ含量均明显低于非荷瘤侧肺（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），更低于对照组（Ｐ＜０．００１，Ｐ＜０．０１）。（３）ＡＭ表达ｉＮＯＳｍＲＮＡ，肺癌组（４１％）明显低于对照组（７８％，Ｐ＜０．０５）。（４）经粒一巨细胞集落刺激因子（ＧＭ┐ＣＳＦ）刺激后肺癌患者ＡＭ细胞毒作用增强，ｉＮＯＡｍＲＮＡ表达增加（４１％ｖｓ６８％，Ｐ＜０．０１）且ＮＯ生成增多（６３ｎｍｏｌ／Ｌｖｓ８５ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．００１），但后者仍低于对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。结论ＮＯ在肺癌患者ＡＭ介导的抗肿瘤效应中起着重要作用；肺?

B7共刺激分子肿瘤免疫基因治疗研究进展

转染B7基因使肿瘤细胞表达B7共刺激分子后,瘤细胞提供双信号活化T细胞,使具有免疫原性的瘤细胞诱导有效的抗肿瘤免疫。以此瘤细胞作为疫苗治疗已形成的肿瘤取得了部分疗效。共转染B7基因和细胞因子基因等使抗肿瘤免疫得到进一步加强,对肿瘤的疗效也有进一步的提高。转染B7基因诱导免疫反应的作用在人肿瘤细胞系中也得到了证实。对肿瘤免疫基因治疗的深入研究中,发现了一些制约免疫反应的因素,这些问题的解决将最终为肿瘤免疫基因治疗的临床应用扫除障碍。

干扰素影响肿瘤相关抗原表达的研究

简要地概述了干扰素对肿瘤相关抗原表达影响的体外研究、动物实验及临床初期观察结果，对其可能的作用机制进行了探讨，并提出作者自己的若干看法。

蛋白质组学及其在肿瘤研究中的应用

简要介绍了蛋白质组学的概念、研究方法及其在肿瘤研究中的应用 .蛋白质组学研究直接定位于蛋白质水平 ,从整体、动态、定量的角度去研究基因的功能 ,是后基因组计划的一个重要组成部分 .恶性肿瘤是一种多基因参与的复杂疾病 ,从蛋白质整体水平上研究恶性肿瘤将有助于进一步揭示恶性肿瘤的发病机制 ,发现恶性肿瘤特异性的标志物及其药物治疗的靶标 .

人类基因表达图谱在肿瘤研究中的作用

通过表达序列标志（ＥＳＴ）测序、ＳＡＧＥ分析和ｃＤＮＡ杂交等方法，人们已构建了十分详细的基因转录图谱，获得了有关人类基因组编码序列及表达时空的资料，在人类肿瘤致病基因的克隆、鉴定、功能分析以及全面了解肿瘤发展过程的分子基础发挥了重要作用。大量ＥＳＴ的获得为定位候选克隆法提供了候选基因的标志，为克隆到的基因片段提供了相关资料，并且成为把模式生物基因组的研究成果运用到人类肿瘤研究的桥梁；通过构建肿瘤基因表达差异图谱。

人鼻咽与鼻咽癌及肺癌基因表达谱差异的研究

研究鼻咽癌、肺癌与正常鼻咽组织基因表达谱差异及筛选鼻咽癌相关基因， 采用α３２Ｐ逆转录标记组织总ＲＮＡ， 将ｃＤＮＡ 探针与有５ １８４ 个基因或表达序列标签ＥＳＴ （ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ） 的高密度ｃＤＮＡ 微阵列ＧＦ２００ 杂交， 软件分析表达谱差异． 结果发现三者均呈低表达为主的表达谱， 密度值在２００ 以上的基因及ＥＳＴ在鼻咽癌有１１０ 个， 肺癌１３４ 个而鼻咽组织有１５８ 个； ５ 个ＥＳＴ在鼻咽高表达但鼻咽癌低表达，３ 个ＥＳＴ在鼻咽癌高表达但正常鼻咽低表达． 结果表明鼻咽癌与正常鼻咽及肺癌组织存在差异表达基因， 可能还有新基因在鼻咽癌发生中起作用；

EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞中调控核转录因子κB活性研究

为了探讨EB病毒潜伏膜蛋白 1(LMP1)的致瘤机制 ,对鼻咽癌细胞中LMP1通过核转录因子κB(NFκB)介导的信号传导途径在鼻咽癌变中的意义进行了研究。利用LMP1受四环素衍生物强力霉素诱导表达的鼻咽癌细胞Tet on LMP1HNE2 ,通过NFκB报道基因分析法、凝胶迁移率分析 (EMSA)及细胞集落形成率等方法 ,结合硫代磷酸反义寡核苷酸阻断技术 ,证实LMP1增强鼻咽癌细胞NFκB的DNA结合活性和反式激活活性 ,这种增强的活性可被LMP1及NFκBp6 5硫代磷酸反义寡核苷酸阻断 ,而NFκBp5 0仅阻断DNA结合活性 ,对反式激活活性无影响。同时 ,LMP1及NFκBp6 5硫代磷酸反义寡核苷酸可部分逆转鼻咽癌细胞的恶性表型 ,而反义 p5 0这种效应不显著。这些结果表明 ,LMP1在鼻咽癌中通过NFκB信号传导途径可能参与了鼻咽癌变 ,NFκBp6 5可能是主要的效应者。

一个定位于7q31-32的鼻咽癌负相关新基因的初步研究

目的：克隆染色体7q31-32区域D7S495附近鼻咽癌相关的候选抑瘤基因，并研究其在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：应用定位－候选克隆策略结合生物信息学手段筛选鼻咽癌负相关的EST(Expressed Sequence Tags)，cDNA克隆测序和5′RACE扩增获取候选EST的cDNA序列。Northern杂交和RT-PCR检测其组织表达谱及其在正常人胚鼻咽上皮与鼻咽癌细胞株和活检组织中的表达差异。Southern杂交和甲基化分析表达差异的机制。结果：克隆到一个位于7q31-32的与鼻咽癌负相关的新基因(GenBank登录号：AF196976，命名为NAG-14)，该基因编码649AA，含有LRR和IgC2结构域。Multiple Tissue Northern(MTNTM) Blot杂交结果显示该基因在脑组织中表达较强，而在心、肝、肾、肺、脾、骨骼肌和胎盘等多种组织中检测不到表达。RT-PCR检测发现其在鼻咽癌细胞株和75％活检组织表达缺失或下调，Southern 和甲基化分析表明其在鼻咽癌细胞株中某些位点发生甲基化修饰，鼻咽癌活检组织中存在遗传物质丢失。结论：NAG_14可能是定位于7q31-32的一个与鼻咽癌相关的抑瘤基因候选者。

二亚硝基哌嗪诱发转基因小鼠鼻咽上皮细胞恶性转化的研究

本文报道化学致癌物二亚硝基哌嗪（DNP）诱发转基因小鼠鼻咽上皮细胞体外恶性转化。转化细胞表现为形态学改变，生长寿命延长，停泊非依赖性生长，染色体异常，接种裸鼠后形成肿瘤。电镜观察这些细胞呈低分化鳞癌细胞特征，实验结果表明，体外培养的携带EB病毒潜伏膜蛋白瘤基因的转基因小鼠鼻咽上皮细胞在小鼠肝微粒体酶（S9mix）活化下，对DNP的转化具有一定的敏感性，

人胎心肌原癌基因c-myc和jun表达的原位杂交研究

应用地高辛配体(digoxigenin)标记探针的原位杂交技术,检测了原癌基因 c-myc 和 jun在12例不同发育阶段的人胎心肌中的表达。根据胎龄,将其中9例分成三组,胎龄分别是16—17、23—24和27—28周,每组各3例。另外有32和36周及足月的大胎龄标本各例。杂交信号用图象分析仪(MIAS 300)分析处理。结果显示:c-myc mRNA 或 jun mRNA 的表达水平在3组心肌样本中的任意2组间的变化有差异显著性(P<0.01)结果表明,在胎儿早期,c-myc 和 jun 的表达都较高,随着胎龄的增加,其表达水平逐渐下降,在足月胎儿表达水平很低。结果提示,在人胎心肌的发育过程中,这两种原癌基因的表达均是一种下行调节方式,反应了 c-myc 和 jun 在心肌细胞的发育过程中与心肌细胞的生长密切相关。可能在心肌细胞的增殖与分化中起着重要调控作用。本研究也表明,地高辛配体标记探针的原位杂交技术具有灵敏度高,分辨力好和实验周期短等优点。对在体正常心肌发育的原癌基因表达的研究,有助于对正常心肌生长以及对心肌肥大发生的分子机制的了解。

鼻咽癌抗独特型疫苗的制备及临床研究

目的 :制备具有内影像特征的抗独特型抗体 ,用于鼻咽癌病人的主动免疫治疗以探讨其抗肿瘤效应。方法 :用杂交瘤技术制备针对Ab1可变区的抗独特型单抗 (Ab2 ) ,免疫同系动物诱导产生免疫应答 ,并用氢氧化铝凝胶沉淀法制成抗独特型疫苗 ,对 19例晚期鼻咽癌放疗病人作主动免疫治疗 ,9例放疗加生理盐水注射为对照组 ,用ELISA检测治疗前后病人血清抗体和细胞因子水平。用原位Northern杂交检测外周血单个核细胞 (PBMC)IL 2mRNA的表达。结果 :用抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,获得了两株抗独特型单抗 2H4和 5D3(Ab2 )。用Ab2免疫小鼠诱导产生了能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。用Ab2治疗的病人无一例有过敏或其他毒副反应 ,血清中Ab3、抗肿瘤抗体 (Ab1’)水平均有不同程度的增高 ,但也产生了人抗鼠抗体 (HAMA)。血清细胞因子TNF α、IFN γ和IL 2水平在大多数治疗组病人中升高 ,而对照组Ab1’、IFN γ、TNF α和IL 2血清水平均未升高。病人血清的IL 2水平含量与PBMCIL 2mRNA的表达呈正相关关系 (r=0 882 9)。结论 :(1) 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,能模拟鼻咽癌相关抗原在同系鼠诱导体液和细胞免疫反应。 (2 )

B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌主动免疫

目的 :研究B7基因修饰的肿瘤细胞诱导抗大肠癌CTL的活化。方法 :采用电击法将B7基因导入小鼠大肠癌细胞CMT93 ,G418筛选阳性克隆 ,免疫组化显示B7分子有高效表达 ,B7 +CMT93(CMT93 -B7)接种于C57BL/6小鼠背部皮下 ,其致瘤性显著下降 (P<0 01) ;CMT93 -B7致敏的小鼠对野生型瘤细胞具有免疫保护作用(P<0 05) ;用CMT93和CMT93 -B7细胞分别经腹腔免疫小鼠 ,得到腹腔浸润淋巴细胞及致敏脾细胞 ,MTT法进行体外杀伤实验。结果 :CMT93 -B7诱导的CTL(cytotoxicTlymphocyte)对CMT93的杀伤活性显著高于野生型CMT93诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活性(P<0 05) ,并且CMT93 -B7诱导的CTL对CMT93 -B7的杀伤率显著高于对野生型CMT93的杀伤率 (P<0 05)。结论 :B7分子有效地促进抗大肠癌CTL的活化 。

p16基因在鼻咽癌中缺失和表达改变的研究——p16基因在鼻咽癌中的改变系列研究(Ⅰ)

目的： 探讨ｐ１６ 基因是否在鼻咽癌活检组织中存在高频的失活， 以确定该基因在鼻咽癌发病过程中所起的作用。方法：首先利用免疫组化的方法检测了１４ 例鼻咽癌活检组织中ｐ１６ 基因的表达状况。并用比较多重 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交的方法检测了这１４ 例鼻咽癌活检组织中ｐ１６ 基因外显子１α和外显子２ 可能的缺失， 以了解导致ｐ１６ 基因表达下调的机制。结果：在１４ 例鼻咽癌活检组织中有１２ 例（ ～８５ ％ ） 缺乏ｐ１６ 蛋白的表达，但其中只有２ 例鼻咽癌活检组织存在外显子２ 的缺失。结论：以上的数据显示ｐ１６ 基因在鼻咽癌中存在高频率的失活，提示该基因在鼻咽癌发病过程中具有一定的作用， 同时， 上述结果也提示ｐ１６ 基因的缺失并不是鼻咽癌中造成ｐ１６基因表达下调的主要原因。

乳腺癌ER、PgR和CEA的免疫组化研究

乳腺癌雌激素受体(ER)、孕酮受体(PgR)的检测结果与其内分泌治疗及预后有密切关系,癌胚抗原(CEA)亦具有估计乳腺癌患者预后的作用。但迄今国内外对乳腺癌 ER、PgR和CEA同时标记研究较少,本文应用免疫组化方法对乳腺癌ER、PgR和CEA同时进行标记,以便为临床联合应用ER、PgR和CEA的检测结果指导乳腺癌的治疗提供帮助。

应用混合探针文库筛选法克隆多个肿瘤差异表达基因

目的：进一步分离在鼻咽癌组织中表达下调／缺失的候选抑瘤基因。方法：采用PCR方法对有差异表达的cDNA序列（AF152605和AF091517）进行探针标记，Northern杂交确定其mRNA转录本大小，进而混合两种PCR探针对骨骼肌cDNA文库进行筛选，阳性克隆经PCR鉴定后直接测序。结果：克隆了转录本为2．2Kb、1．1Kb和1．4Kb三个基因，GenBank登录号分别为AF179285、AF170307和AF194971。结论：混合探针文库筛选法是同时、快速获得多个cDNA片段其全长序列的可借鉴实验手段。