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雌性和雄性虎纹捕鸟蛛粗毒蛋白质含量比较分析 被引量:1
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作者 段志贵 王美迟 +1 位作者 胡朝暾 刘珍 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期106-110,142,共6页
自然界虎纹捕鸟蛛雌蛛数量远多于雄蛛数量,为了探究雌、雄蛛粗毒的差异,用不同方法比较了单个虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒的特征.雌蛛单次螫毒量为(26.5±2.47)μL,冻干后粗毒质量为(5.01±0.78)mg,明显高于雄蛛单次螫毒量(10.83... 自然界虎纹捕鸟蛛雌蛛数量远多于雄蛛数量,为了探究雌、雄蛛粗毒的差异,用不同方法比较了单个虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒的特征.雌蛛单次螫毒量为(26.5±2.47)μL,冻干后粗毒质量为(5.01±0.78)mg,明显高于雄蛛单次螫毒量(10.83±1.35)μL,冻干后粗毒质量(2.05±0.17)mg;用Lowry法和Bradford法测定雌蛛和雄蛛粗毒的蛋白质含量,两种方法均表明雄蛛粗毒中蛋白含量高于雌蛛.用反相高效液相色谱分离雌蛛和雄蛛粗毒蛋白,并215 nm检测色谱图,发现大部分洗脱峰重叠,而雄蛛色谱图中多两个主峰.Tricine SDS-PAGE电泳分析表明雌蛛粗毒相对分子质量小于10 kD的蛋白质含量较高;而Tris SDS-PAGE电泳分析表明雌蛛粗毒相对分子质量大于10 kD的蛋白质含量较低,基于雌蛛和雄蛛粗毒蛋白含量的差异,有必要对虎纹捕鸟蛛雌、雄蛛粗毒进行独立研究. 展开更多
关键词 虎纹捕鸟蛛 雌蛛 雄蛛 蛋白质
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人类RING型锌指蛋白DTX2的全长cDNA克隆与序列分析
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作者 易正芳 李永青 +5 位作者 袁婺洲 王跃群 朱传炳 刘芳 吴自荣 吴秀山 《华东师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期123-126,133,共5页
鉴定了一个人类WWE与RING型锌指基因DTX2,位于人染色体7q11.23.通过RACE获得的全长cDNA显示,DTX2编码包含两个WWE区域与一个RING锌指区域的蛋白.
关键词 DTX2 WWE区域 Ring-锌指蛋白cDNA 序列分析
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Notch信号途径与心血管发育
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作者 艾建平 李永青 吴秀山 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第S1期33-37,共5页
Notch信号传导途径在无脊椎动物和脊椎动物中广泛存在且高度保守,此途径介导局部细胞之间的相互作用.它出现在多种细胞命运决定之中,调控它们的时空表达,在整个胚胎发育中起重要作用.主要综述了Notch信号途径在心血管发育过程之中的重... Notch信号传导途径在无脊椎动物和脊椎动物中广泛存在且高度保守,此途径介导局部细胞之间的相互作用.它出现在多种细胞命运决定之中,调控它们的时空表达,在整个胚胎发育中起重要作用.主要综述了Notch信号途径在心血管发育过程之中的重要作用及其作用机制. 展开更多
关键词 NOTCH 心血管 发育
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心肌-内皮信号途径在心脏发育中的作用 被引量:4
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作者 蔡振宇 袁婺洲 吴秀山 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第S1期6-11,共6页
内皮细胞对于调节和维持心脏发育起着十分重要的作用.随着基因功能研究技术的发展,已有越来越多的资料表明内皮 心肌细胞相互作用对于心脏生长和发育是必须的.目前已经发现包括神经调节蛋白、血管紧张素、NO、TGF β、内皮素等在内的很... 内皮细胞对于调节和维持心脏发育起着十分重要的作用.随着基因功能研究技术的发展,已有越来越多的资料表明内皮 心肌细胞相互作用对于心脏生长和发育是必须的.目前已经发现包括神经调节蛋白、血管紧张素、NO、TGF β、内皮素等在内的很多细胞信号途径均参与了此过程.就在心脏发育过程中心肌 内皮细胞相互作用的重要信号途径作一综述. 展开更多
关键词 心脏 心肌内皮信号途径 内皮细胞 发育
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人类T型钙通道α_(1H)亚单位基因在细胞增殖中的功能研究 被引量:4
5
作者 王跃群 Brooks Gavin +3 位作者 朱传柄 袁婺洲 李永青 吴秀山 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第8期659-665,共7页
将人类T型钙通道α1H 亚单位基因 (CACNA1H)cDNA转染到HEK 2 93(humanembroyonickidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株 ,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用。RT -PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T... 将人类T型钙通道α1H 亚单位基因 (CACNA1H)cDNA转染到HEK 2 93(humanembroyonickidney)细胞系得到稳定过量表达的细胞株 ,以此为体外模型来研究T型钙通道在细胞增殖中的直接作用。RT -PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α1H 亚单位的过量表达。生长曲线结果表明 ,T型钙通道α1H 亚单位基因的过量表达能显著促进HEK - 2 93细胞增殖 ,将细胞群体倍增时间从对照细胞的 2 2 1± 1.1h缩短到稳定转染细胞的 14 0± 0 .4h ,细胞群体倍增时间缩短了约 8h ;流式细胞分析结果表明 ,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照细胞高 ,相反地处于G1 期的百分率比对照细胞低 ,以上结果证明了过量表达T型钙通道亚单位α1H 基因能促进细胞增殖。Western印迹结果提示 ,T型钙通道α1H 亚单位基因表达产物是通过某种信号途径 ,提高了与细胞周期有关基因 (CDK2、cyclinA和cyclinE)的蛋白质表达水平 ,从而刺激了细胞周期的进程。 展开更多
关键词 人类 T型钙通道α1H亚单位基因 细胞增殖 功能 HEK-293细胞 机制 血管疾病
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厚壳贻贝Mytilus coruscus足丝盘及足丝的多巴分析(英文) 被引量:3
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作者 李楠楠 石戈 +2 位作者 杨宵旭 王智平 廖智 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期148-153,共6页
多巴(3,4-l-dihydroxyphenylalanine,DOPA)是贻贝足丝粘附蛋白中的一种特殊的氨基酸,由酪氨酸经羟化后生成,与贻贝足丝粘附蛋白的强粘附性能具有直接联系.目前,已鉴定的多种贻贝足丝蛋白序列中均发现有不同含量的DOPA存在.蛋白中DOPA的... 多巴(3,4-l-dihydroxyphenylalanine,DOPA)是贻贝足丝粘附蛋白中的一种特殊的氨基酸,由酪氨酸经羟化后生成,与贻贝足丝粘附蛋白的强粘附性能具有直接联系.目前,已鉴定的多种贻贝足丝蛋白序列中均发现有不同含量的DOPA存在.蛋白中DOPA的定量检测对于了解DOPA在蛋白粘附中的作用以及粘附蛋白的粘附机理具有重要意义.为了解厚壳贻贝足丝盘和足丝纤维中DOPA的含量以及DOPA与厚壳贻贝足丝蛋白的粘附性能之间的关系,利用氮蓝四唑(nitrobluetetrazolium,NBT)对DOPA的特异染色原理,结合蛋白质电泳、组织化学染色以及玻璃包被实验,分析和比较了厚壳贻贝足丝不同部位的DOPA含量、蛋白组成特点以及粘附能力.NBT可以在不水解蛋白质的情况下进行DOPA的定量分析,且与DOPA的氧化状态无关.研究结果表明,厚壳贻贝足丝盘中蛋白的DOPA含量明显高于足丝,两者DOPA含量相差2.33倍;蛋白质电泳结果表明,厚壳贻贝足丝盘和足丝纤维的蛋白质组成差异较大,足丝盘中的蛋白质分子量范围明显低于足丝纤维;玻璃包被实验结合POQuest软件半定量分析表明,厚壳贻贝足丝盘蛋白的粘附能力明显高于足丝纤维,且蛋白在玻璃表面的吸附能力与DOPA含量具有相关性.通过以上研究,建立了一种蛋白中DOPA的定量分析方法并初步了解了厚壳贻贝足丝盘和足丝纤维的蛋白组成、DOPA含量以及粘附性能之间的关系,为深入了解贻贝足丝的粘附性能、粘附机制以及开发新型生物粘合剂奠定了基础. 展开更多
关键词 MYTILUS coruscus 多巴(DOPA) 足丝 足丝纤维 足丝盘
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人类T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因在细胞增殖中的功能 被引量:2
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作者 王跃群 李永青 +2 位作者 袁婺洲 朱传炳 吴秀山 《自然科学进展》 北大核心 2005年第11期1305-1311,共7页
已经发现T型钙通道的表达与细胞增殖关系密切,然而T型钙通道的表达是细胞增殖的原因还是结果有待进一步研究。利用过量表达人类T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因(CACNA1G和CACNA1H)的HEK-293细胞研究了这两种基因在细胞增殖中的直... 已经发现T型钙通道的表达与细胞增殖关系密切,然而T型钙通道的表达是细胞增殖的原因还是结果有待进一步研究。利用过量表达人类T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因(CACNA1G和CACNA1H)的HEK-293细胞研究了这两种基因在细胞增殖中的直接作用,通过RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α_(1G)和α_(1H)亚单位基因的过量表达;从生长曲线分析得到了细胞群体倍增时间,HEKα_(1G)^+细胞为(13.7±0.3)h,HEKα_(1H)^+细胞为(14.0±O.4)h,都短于对照HEK-293细胞的(22.1±1.1)h,流式细胞分析结果表明,在稳定转染细胞处于S期的细胞百分率比对照HEK-293细胞高,相反地处于G_1期的百分率比对照HEK-293细胞低。结果表明,T型钙通道α_(1G)和α_(1H)亚单位基因的过量表达都能显著促进细胞增殖,这一作用可以被T型钙通道特异性阻断剂mibefradiL抑制,Western杂交结果提示了T型钙通道的过量表达是通过提高与细胞周期有关的蛋白质(CDK2,cyclinA和cyclinE)的表达水平刺激了细胞周期的进程从而促进细胞增殖。 展开更多
关键词 过量表达 T型钙通道 细胞增殖 细胞周期 亚单位基因 人类 Western杂交 全细胞膜片钳 生长曲线分析 通道蛋白
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卡波氏肉瘤相关疱疹病毒vGPCR具有巯基化酪氨酸的氨基端的表达和纯化(英文) 被引量:2
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作者 吴慧 傅永明 +2 位作者 肖俊 周曼 冯浩 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2011年第6期62-67,共6页
卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码的G-蛋白偶联受体(vGPCR)基因是一种癌基因,在KSHV致瘤过程中起着重要作用.前期工作揭示vGPCR的氨基端Y26和Y28两位酪氨酸的巯基化作用对其致瘤性至关重要.本研究将vGPCR的氨基端(1~49位氨基酸)以及其... 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码的G-蛋白偶联受体(vGPCR)基因是一种癌基因,在KSHV致瘤过程中起着重要作用.前期工作揭示vGPCR的氨基端Y26和Y28两位酪氨酸的巯基化作用对其致瘤性至关重要.本研究将vGPCR的氨基端(1~49位氨基酸)以及其yydd突变体分别同鼠Fc片段有机连接并命名为wt-vG-N-mFc和yydd-vG-N-mFc.采用该两种重组质粒分别转染HEK293T细胞,重组融合蛋白分别从全细胞裂解液和细胞培养液中被纯化出来,并被考马斯亮蓝和印迹杂交鉴定.放射自显影表明wt-vG-N-mFc而非yydd-vG-N-mFc具有巯基化修饰作用.含有巯基化酪氨酸的vGPCR氨基端融合蛋白的成功表达和纯化为其将来在研究vGPCR的致瘤性和以vG-PCR为靶定目标的临床治疗中的应用打下了基础. 展开更多
关键词 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 病毒G-蛋白偶联受体 巯基化酪氨酸
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T型钙通道α_(1G)亚单位在细胞增殖中的功能研究 被引量:2
9
作者 王跃群 Brooks Gavin +3 位作者 袁婺洲 朱传炳 李永青 吴秀山 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期229-235,共7页
利用稳定过表达人类T型钙通道α_(1G)亚单位的HEK-293细胞研究了T型钙通道在细胞增殖中的作用。RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α_(1G)单位的过表达的实现。生长曲线表明,T型钙通道α_(... 利用稳定过表达人类T型钙通道α_(1G)亚单位的HEK-293细胞研究了T型钙通道在细胞增殖中的作用。RT-PCR和标准全细胞膜片钳记录分别从mRNA转录水平和T型钙通道蛋白功能水平验证了α_(1G)单位的过表达的实现。生长曲线表明,T型钙通道α_(1G)亚单位的过表达能显著促进细胞增殖,HEKα_(1G)^+细胞的细胞群体倍增时间(13.7±0.3h)比对照HEK-293细胞的细胞群体倍增时间(22.1±1.1h)缩短了约8h;流式细胞分析结果也与此吻合,在稳定过表达了人类T型钙通道α_(1G)亚单位的细胞处于S期的细胞百分率比对照HEK-293细胞高,相反地处于G_0/G_1期的百分率比对照HEK-293细胞低,以上结果证明过表达T型钙通道α_(1G)亚单位能促进细胞增殖;T型钙通道特异性阻断剂mibefradil抑制HEKα_(1G)^+细胞增殖,IC_(50)为3.5/μmol/L,表明在HEK-293细胞过表达T型钙通道对细胞增殖的促进作用可以被T型钙通道特异性阻断剂mibefradil抑制,这就进一步证明了T型钙通道在促进细胞增殖方面的直接作用。Western杂交结果提示了T型钙通道α_(1G)亚单位的表达是通过某种信号途径提高了与细胞周期有关的蛋白质,cyclin A、cyclin E和CDK2的表达水平,从而刺激了细胞周期的进程。本研究有助于理解细胞增殖的机制并为开发治疗与细胞增殖异常有关疾病的新药提供了理论依据。 展开更多
关键词 T型钙通道α1G亚单位 细胞增殖 功能
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非甾体抗炎药抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖 被引量:1
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作者 王跃群 Brooks Gavin +4 位作者 Harper Jane 李永青 朱传炳 袁婺洲 吴秀山 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期85-90,共6页
本文研究了aspirin、ibuprofen和sulindac三种不同结构的非甾体抗炎药(NSAID)对大鼠A10血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响并探讨其作用机制。方法:细胞计数法观察不同浓度的三种NSAID对细胞增殖的影响,乳酸脱氢酶(LDH)释放分析法测定NSAI... 本文研究了aspirin、ibuprofen和sulindac三种不同结构的非甾体抗炎药(NSAID)对大鼠A10血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响并探讨其作用机制。方法:细胞计数法观察不同浓度的三种NSAID对细胞增殖的影响,乳酸脱氢酶(LDH)释放分析法测定NSAID的细胞毒作用,流式细胞术分析测定细胞周期。结果:aspirin、ibuprofen和sulindac三种NSAID都对A10 VSMC的增殖有明显抑制作用,且其作用是浓度依赖性的,IC_(50)分别是:aspirin为1666μmol/L,ibuprofen为937μmol/L,sulindac为520μmol/L;其抑制作用不是因细胞毒作用引起;三种NSAID对细胞周期的作用不同,ibuprofen(1000μmol/L)和sulindac(750μmol/L)将细胞阻抑在细胞周期的G_1期(从68.7±2.0%上升到76.6±2.2%和75.8±2.2%,P<0.05),而aspirin(2500μmol/L)对处于细胞周期各期的细胞百分率无明显改变;利用有丝分裂抑制剂nocodazole辅助分析,更清楚地检测到了ibuprofen和sulindac在G_1阻抑,而aspirin仍然不引起处于细胞周期各期的细胞百分率的明显改变。结论:aspirin抗A10 VSMC的增殖作用机制与ibuprofen和sulindac两者的作用机制不同,本研究为三种NSAID成为VSMC增殖性疾病的治疗药物提供了理论依据。 展开更多
关键词 血管平滑肌 非甾体抗炎药 细胞增殖 作用机制 抑制作用 浓度依赖性 细胞周期 流式细胞分析 冠状动脉疾病
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红细胞生成的转录调节多因子的协调作用
11
作者 易正芳 李永青 吴秀山 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第S1期17-21,29,共6页
红细胞由造血干细胞分化而成,此过程包含复杂转录因子的相互作用,这些转录因子调节下游基因的表达并介导分化与增生信号,红细胞谱系的多能干细胞的定型诱导血细胞生成.主要综述了适应红细胞发育的广谱因子及特殊因子,这些因子单独操纵... 红细胞由造血干细胞分化而成,此过程包含复杂转录因子的相互作用,这些转录因子调节下游基因的表达并介导分化与增生信号,红细胞谱系的多能干细胞的定型诱导血细胞生成.主要综述了适应红细胞发育的广谱因子及特殊因子,这些因子单独操纵或部分参与转录、激活或表达. 展开更多
关键词 红细胞生成 转录调节 因子
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与脊椎动物脑室空间模式形成相关的两个基因座位 被引量:5
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作者 罗敏娜 李冰霞 +2 位作者 童英 赵淑芳 罗琛 《自然科学进展》 北大核心 2006年第10期1331-1335,共5页
通过对金鱼雌核发育单倍体胚胎的活体观察及切片观察,发现单倍体胚胎脑的空间模式发育存在正常与不正常两种不同的表型.正常脑胚胎与自交二倍体胚胎脑的表型一致,具有正常的前脑、中脑、后脑结构,且各脑室的边界清楚.不正常脑胚胎没... 通过对金鱼雌核发育单倍体胚胎的活体观察及切片观察,发现单倍体胚胎脑的空间模式发育存在正常与不正常两种不同的表型.正常脑胚胎与自交二倍体胚胎脑的表型一致,具有正常的前脑、中脑、后脑结构,且各脑室的边界清楚.不正常脑胚胎没有明显可见的脑室结构.正常脑和不正常脑胚胎数目的比例为1∶3,说明金鱼脑的空间模式形成与两个不同的基因座位有关.由于实验中排除了在这两个基因座位上同时存在突变基因的可能性,1∶3的比例反映的不是基因型,而是这两个基因的表达状态;说明这两个基因在单套染色体组中只有50%的表达概率,其表达调控机制建立在两套染色体的基础之上,受二倍体依赖型基因表达调控机制的控制. 展开更多
关键词 金鱼 单倍体 脑室 胚胎 基因
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人类高度进化保守基因hnulp1中转录抑制区段的定位 被引量:3
13
作者 刘连 蔡振宇 +1 位作者 王跃群 吴秀山 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第3期194-199,共6页
hnulp1是具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的新的一类转录因子.其C端含一个DUF654结构域,其序列在同源基因中相当保守,但该结构域功能未知.利用GAL4转录因子中的DNA结合结构域(DBD)和含有与DBD结合序列的荧光素酶报告基因(GAL4-Luc)质粒,构... hnulp1是具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)的新的一类转录因子.其C端含一个DUF654结构域,其序列在同源基因中相当保守,但该结构域功能未知.利用GAL4转录因子中的DNA结合结构域(DBD)和含有与DBD结合序列的荧光素酶报告基因(GAL4-Luc)质粒,构建了哺乳动物细胞转录因子活性分析系统,随后利用GAL4-Luc荧光素酶报告基因对5种含DUF654结构域的不同缺失片段转录抑制活性进行检测.检测结果表明,该基因DUF654结构域中从Δ228-407氨基酸区段具有强烈的转录抑制活性.该结果为进一步研究DUF654结构域的功能和hnulp1基因转录调控的机制奠定了基础. 展开更多
关键词 DUF654 荧光素酶报告基因 转录活性 hnulp1
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锌指亚家族GATA-4、-5和-6的调控作用 被引量:1
14
作者 肖婧 王跃群 吴秀山 《生命科学研究》 CAS CSCD 2003年第S1期44-48,78,共6页
GATA蛋白是一类重要的转录调节因子,它们具有保守的DNA结合结构域,其中的GATA 4、 5和 6亚家族对组织特异性基因的表达起关键性的调控作用.综述了这3种因子的结构功能,在小鼠中的表达模式和基因定位,在组织特异性基因表达中的作用,对可... GATA蛋白是一类重要的转录调节因子,它们具有保守的DNA结合结构域,其中的GATA 4、 5和 6亚家族对组织特异性基因的表达起关键性的调控作用.综述了这3种因子的结构功能,在小鼠中的表达模式和基因定位,在组织特异性基因表达中的作用,对可诱导基因表达的调节以及与它们相互作用的有关因子等. 展开更多
关键词 GATA 转录因子 锌指 调控
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