IL-17在肝癌患者血清中表达增高对肝癌诊断的研究

为了早期发现并监测肝癌,通过ELISA法检测肝癌组与正常组血清IL-17细胞因子水平,运用ROC统计学分析比较其与AFP诊断肝癌的诊断效能,logistic回归获得IL-17和AFP两者联合诊断的模型预测肝癌.结果发现肝癌组的IL-17质量浓度(5.76±2.35 ng/L)较对照组(2.98±2.53 ng/L)明显增高(P*<0.001),ROC分析IL-17和AFP预测肝癌的曲线下面积(AUC)分别为0.820和0.884,两者对诊断均有统计学意义.通过Logistic逐步回归得出的AFP和IL-17回归模型PRE,预测肝癌的ROC曲线下面积为0.963,诊断的敏感度(87.5%)、特异度(82.1%)较两指标单独诊断时明显提高.因此本研究获得的诊断模型可以用于临床对肝癌的联合诊断.

睑裂狭小综合征一家系的FOXL2基因突变研究

目的确定一个常染色体显性遗传的睑裂狭小综合征(BPES)家系的致病基因及其突变位点和类型。方法应用聚合酶链反应和直接测序技术,对来自同一家系的4例BPES患者及家系中6例正常人和50例正常对照者的外周血DNA进行分子遗传学分析,筛查FOXL2基因的外显子序列。结果来自同一家系的4例BPES患者均发现有FOXL2基因892C>T的改变,为无义突变,而家系中6例正常人及50例正常对照者的FOXL2基因中均未发现突变。结论FOXL2基因的一种已知突变可能是该BPES家系的重要致病因素。

中药生川乌对小鼠卵巢和子宫发育的影响试验研究

目的探讨中药对小鼠卵巢和子宫发育的影响,为临床用药提供实验依据。方法随机将60只雌性昆明小鼠平分为生川乌组(实验组)和对照组,实验组与对照组分喂食生川乌与维生素A1,观察子宫和卵巢的变化。结果对照组子宫内膜厚度厚于实验组,但无明显差异。实验组子宫胎盘重量、子宫胎儿胎盘总重降低,活胎数减少,吸收胎数增多,分别与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论生草乌在最大可给药剂量给药时,能够影响小鼠的卵巢和子宫发育功能,显示出一定的胚体毒性。

中药利肾宝对慢性肾功能衰竭的影响研究

目的观察中药利肾宝对慢性肾功能衰竭(CRF)大白鼠肾功能的影响。方法用腺嘌呤(Adenin)法造大鼠CRF模型,同时给利肾宝灌胃治疗,1次/d,每隔四天将大鼠放入代谢笼中测24h尿量一次,第25d将大鼠处死。取血测血肌酐(Cr)、尿肌酐(Urs),计算24h肌酐清除率(Cc);并测血清K+、Na+、Mg2+、Ca2+、P的含量;取大鼠肾脏进行大体组织血观察和镜下病理组织学检查。结果7.5g/kg(生药含量1:2)利肾宝与模型对照组比较,血Cr含量下降(P<0.01),24h肌酐清除率升高(P<0.01),血K+降低(P<0.01),血Ca2+升高(P<0.01),血P有降低趋势;肾脏代偿性增大及组织坏死较模型组明显减轻。结论中药利肾宝能增强机体的排毒能力,减轻肾损伤,改善肾功能,能有效的延缓CRF的进展。

鼻咽癌组织中GNAT1基因的表达、杂合性丢失及甲基化分析

背景与目的:在鼻咽癌中,染色体3p21.3为高频缺失区,杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)分析和功能学研究都表明3p21.3区存在与鼻咽癌相关的抑瘤基因。GNAT1基因也定位于3p21.3,但在鼻咽癌中未见关于GNAT1基因的研究报道。本研究旨在探讨GNAT1基因在鼻咽癌组织中的表达、LOH及甲基化情况。方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)方法检测了33例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织中GNAT1基因的表达,并通过微卫星分析技术和甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specificpolymerasechainreaction,MSP)分析GNAT1基因LOH和启动子区甲基化情况。结果:GNAT1基因在慢性鼻咽炎组织中均稳定表达,而在72.7%(24/33)的鼻咽癌组织中表达下调或缺失,显著低于慢性鼻咽炎组织(100%,15/15)(P=0.022);LOH分析显示鼻咽癌组织中GNAT1基因的杂合性丢失率为15%(3/20),且LOH与基因表达存在相关性(P=0.016);甲基化分析发现在100%的鼻咽癌组织和80%慢性鼻咽炎组织中存在GNAT1基因启动子区高甲基化。结论:GNAT1基因在鼻咽癌组织中表达下调或缺失,这一现象与GNAT1基因的LOH存在相关性,而与3p21.3区基因启动子区CpG岛的甲基化可能无关。GNAT1基因的甲基化可能不是鼻咽癌的发病机制。

利用STR和Y染色体二等位基因标记鉴定同胞兄弟关系

目的通过检测常染色体以及Y染色体二等位基因标记,探讨Y-STR基因座突变情形下的同胞兄弟鉴定策略。方法对被鉴定的两名男性个体,采用Goldeneye 20A试剂盒和18NC试剂盒检验35个常染色体STR基因座,采用PowerPlex誖Y试剂盒和Yfiler试剂盒检验Y染色体上16个STR基因座,根据ITO法计算全同胞指数,采用片段长度差异等位基因特异性PCR或普通PCR法对20个Y染色体二等位基因标记进行分型检测。结果 35个常染色体STR基因座的累积全同胞指数为4.3149×106,两名被鉴定人16个Y-STR基因座有2个发生突变,20个Y染色体二等位基因标记分型结果均相同,支持两个体为全同胞兄弟关系。结论对于发生Y-STR突变的父系鉴定案例,可补充检验Y染色体SNP和InDel等二等位基因遗传标记。

肝纤维化大鼠血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

背景:近年来临床运用骨髓间充质干细胞移植治疗晚期肝纤维化取得了较好疗效,但由于肝源稀少,骨髓干细胞体外分化为成熟肝细胞的技术仍然不成熟。目的:探讨骨髓间充质干细胞体外诱导其分化为肝细胞的可行性。方法:构建大鼠肝纤维化模型,分离、纯化并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,制备正常及肝纤维化大鼠血清,取第3代骨髓间充质干细胞分组培养,分别加入以下培养基:DMEM+体积分数10%胎牛血清;肝细胞生长培养基(HGM)+体积分数5%胎牛血清;HGM+5%正常大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清;HGM+5%肝纤维化大鼠血清+25μg肝细胞生长因子。观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,采用Realtime-PCR检测甲胎蛋白和细胞角蛋白18的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白水平,ELISA法检测培养上清液中转化生长因子β1表达。结果与结论:正常大鼠血清能促进骨髓间充质干细胞的增殖;肝纤维化大鼠血清对骨髓间充质干细胞促增殖作用最好,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用肝细胞生长培养基能提高分化率。

Huntington舞蹈病━家系的IT15基因诊断

目的从分子水平探讨Huntington舞蹈病(HD)的发病机制,明确亨廷顿病家系基因突变情况,从而为该家系的基因诊断和遗传咨询提供科学依据。方法应用巢式PCR、琼脂糖凝胶电泳等方法,在分子水平上检测IT15基因中(CAG)n的扩增片断长度,对一家族性HD家系中的患者、HD症前高风险成员及正常家庭成员进行基因诊断。结果正常成员显示1条扩增区带,约100bp;HD患者除有1条正常扩增片断(约100bp)外,还有一异常的长约200bp的扩增片断;HD症前高风险成员中检出2个HD基因携带者,扩增片断与患者完全相同。结论应用该方法可以对HD进行准确的基因诊断,为临床HD高风险者的检出及随后的产前诊断提供了一种简便、易行的检测方法,同时也证明IT15基因的动态突变是导致该家系中亨廷顿病发生的遗传基础。

Ph1染色体及bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病中的诊断意义

目的探讨Ph1染色体和bcr/abl融合基因检测在慢性粒细胞白血病诊断中的意义。方法选择28例慢性粒细胞白血病患者和20例缺铁性贫血患者作为研究对象,采用骨髓细胞短期培养法制备染色体、采用RT-PCR法分析bcr/abl融合基因。结果28例慢性粒细胞白血病患者中,Ph1染色体阳性者25例(89.3%),bcr/abl阳性者26例(92.9%),Ph1和bcr/abl均阳性25例(89.3%),Ph1阴性、bcr/abl阳性1例(3.6%),Ph1和bcr/abl均阴性2例(7.1%)。20例缺铁性贫血患者Ph1和bcr/abl均阴性。结论Ph1染色体、bcr/abl融合基因的检测有助于慢性粒细胞白血病的诊断和鉴别诊断。

上皮钙通道基因在维生素D受体和Calbindin-D28k双基因敲除鼠中的变化

目的研究上皮钙通道TRPV5和TRPV6基因与维生素D受体(VDR)和钙结合基因Calbindin-D28k的关系,以及肾钙的重吸收减少是否与TRPV5和TRPV6基因表达减少有关。方法制备VDR和CaBP-D28k双基因敲除小鼠,普通和高钙食物喂养下,检测野生型鼠(WT),CaBP-D28(-/-),VDR(-/-),和VDR(-/-)/CaBP-D28k(-/-)鼠的体重、摄食量及血尿参数值,用实时RT-PCR的方法检测各种鼠肾脏TRPV5和TRPV6的mRNA水平。结果普通饮食下,双基因敲除小鼠尿钙的分泌和血清甲状旁腺激素水平更高。TRPV5和TRPV6两者的表达在CaBP-D28k敲除鼠中均无变化,而在VDR敲除鼠和双基因敲除鼠中下调的幅度相当。高钙饮食下,VDR及双基因敲除小鼠的血离子钙水平正常。所有小鼠这两个基因的表达普遍降低,而在VDR和双基因敲除鼠中的表达更低。结论这些结果证实了上皮钙通道基因受钙和维生素D的调节,CaBP-D28k的缺失对两者无影响。肾钙的重吸收减少与TRPV5和TRPV6基因表达无明显关系。

人工肝支持系统治疗后细菌感染的病原菌分布及耐药性分析

目的探讨人工肝支持系统治疗后感染病原菌分布及耐药性,为防治感染提供依据。方法对42例患者行人工肝支持系统治疗后细菌学资料及细菌感染的处理和结局进行回顾性分析。结果42例人工肝支持系统治疗患者中,有28例患者发生细菌性感染,感染率为66.7%,病原菌分离部位以腹腔和呼吸道为主;28例感染病人共分离出52珠细菌、真菌;细菌对第三代抗生素较敏感。结论人工肝支持系统治疗后易并发生感染,抗生素的选择以及支持治疗是预防和治疗细菌感染的关键。

大鼠胰腺癌和非癌胰腺组织的KiSS-1 mRNA表达

目的:建立Sprague-Dawely大鼠胰腺癌模型,研究模型中胰腺导管癌和非癌胰腺组织中KiSS-1mRNA的表达情况。方法:将二甲基苯并蒽(dimethylbenzanthracene,DMBA)直接置入胰腺被膜下实质内建立胰腺癌模型组(A组),另一组同样注入DMBA并每周腹腔注射曲古霉素(trichostatin,TSA)设立干预组(B组),A组和B组于3～5个月内处死,对照组(C组)于第5个月处死,肉眼检查大组织及HE染色观察胰腺癌发生情况;采用原位杂交方法检测KiSS-1mRNA。结果:(1)实验组(A组)3～5个月癌发生率为48.7%(18/37),17例为胰腺导管癌,1例为纤维肉瘤;B组3～5个月癌发生率为33.3%(12/36),11例为胰腺导管癌,1例为纤维肉瘤,A组胰腺癌最大径均值大于B组(P<0.05);C组胰腺及A组、B组胰腺非主要脏器均无明显病理改变。(2)A组和B组胰腺癌组织中KiSS-1mRNA阳性率明显低于非癌胰腺组织(P<0.01),A组和B组胰腺癌KiSS-1mRNA阳性率分别低于相应A组和B组非癌组织(P<0.01),非癌胰腺组织中KiSS-1mRNA阴性表达者导管上皮均呈中至重度不典型增生,C组胰腺组织KiSS-1mRNA均阳性表达。结论:较大剂量DMBA置入胰实质内,可在短期内获得较高胰腺癌发生率;TSA能干预胰腺癌的生长;KiSS-1失表达在胰腺癌发生发展中可能具有重要的作用。

成熟树突状细胞和转化生长因子β联合体外扩增小鼠调节性T细胞

背景:目前天然CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞稀少,远远不能满足临床需求。目的:建立有效的体外培养扩增小鼠CD4+CD25+T细胞体系。方法:从C57/BL6小鼠骨髓获得的成熟树突状细胞联合不同剂量转化生长因子β,体外扩增同基因或异基因CD4+CD25+T细胞。结果与结论:经过2周培养,磁珠分选后的CD4+CD25+T细胞的扩增倍数为自然调节性T细胞的(17.3±10.6)倍,0.2,2μg/L质量浓度对T细胞的扩增能力最强;经扩增后的T双阳性率为(85.38±1.82)%,CD127阳性率(78.86±0.91)%;体外扩增的调节性T细胞高表达FOXP3为天然调节性T细胞的1.5倍;调节性T细胞体外抑制实验结果表明:调节性T细胞对自体或异体CD4+T细胞抑制能力随着效靶比浓度的降低而降低,体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体CD4+T细胞抑制率(60.1±0.71)%,对异体CD4+T抑制率为(35.5±0.57)%(P<0.05)。提示在体外成功扩增了CD4+CD25+T细胞,并且具有免疫抑制功能,此方法扩增细胞数量多,细胞纯度有很大提高,方法简便。

RNAi抑制XIAP基因诱导MG63细胞凋亡、化疗增敏及其分子机制

目的观察RNAi技术抑制X染色体连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibit apoptosis protein,XIAP)基因对MG63细胞凋亡及化疗药物敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法构建XIAP基因的shRNA稳定表达载体,将MG63细胞分为空白组(A组,不作转染),阴性对照空白质粒转染组(B组,psiRNA-Con转染组),实验组(C组,psiRNA-XIAP转染组),在此基础上又设A+阿霉素(doxorubicin,Dox,0.3μmol)、C+Dox两化疗药物干预组;Western blot检测XIAP蛋白的表达,MTT检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期、凋亡及Caspase-9蛋白的表达情况。结果与A、B组比较,C组细胞XIAP蛋白水平、细胞增殖活性明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-9蛋白表达及G2/M期细胞明显增多(P<0.05)。A+Dox组较C+Dox组细胞增殖活性更低,且Dox对A、C组细胞的抑制呈时间依赖性;Caspase-9蛋白表达明显增高(P<0.05);细胞周期出现G2/M为0,细胞阻断于S期。结论 RNAi能有效抑制XIAP基因表达,抑制骨肉瘤细胞增殖活性,诱导其凋亡,并增加其对化疗药物的敏感性,其机制可能涉及抑制DNA合成及Caspase家族凋亡信号转导通路的活化。

口腔念珠菌病动物模型的建立分析

目的建立口腔念珠菌病动物模型,为防治口腔念珠菌病提供参考。方法将昆明小鼠120只随机平分成3组,各40只,对照组I组小鼠以浓度5.5×1012念珠菌菌悬液0.5 ml灌口腔并在标准饲养条件下喂养;对照组II口腔内注射浓度40 mg/ml的环磷酰胺溶液0.02 ml/g并用0.3%冰醋酸溶液0.5 ml灌口腔后在标准饲养条件下喂养;模型组口腔内注射浓度40 mg/ml的环磷酰胺溶液0.02 ml/g,并用0.3 ml/g醋酸溶液0.5 ml灌口腔,观察3组相关反应。结果模型组与对照组I真菌镜检阳性率比较差异显著(P<0.01),模型组与对照组I组织病理HE染色阳性率比较差异显著(P<0.01);模型组与对照组II真菌镜检阳性率比较差异显著(P<0.01),模型组与对照组II组织病理HE染色阳性率比较差异显著(P<0.01)。结论口腔溃疡和免疫力低下为口腔念珠菌感染的易感因素,上述研究结果临床上口腔念珠菌感染的患者的诊治提供了实验室依据,为该类疾病进一步深入研究及药物筛选提供了参考。

山茛菪碱对大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨山莨菪碱预处理对无心跳大鼠供肝热缺血再灌注损伤的保护作用。方法根据山莨菪碱预处理与否及供肝获取前经历的供体心脏停搏时间30min或45min,将实验动物分为4组,即非预处理的30min(N30)组和45min(N45)组,山莨菪碱预处理的30min(tN30)组和45min(tN45)组行原位肝移植。观察存活状况,并于移植术后1d、3d、7d采集血样检测肝功能。结果N30组和N45组的1周存活率分别为50.8%和14.9%,而tN30组和tN45组的1周存活率分别为86.6%和65.8%,预处理组移植肝脏功能状态明显好于非预处理组。结论山莨菪碱预处理能够减轻供肝的热缺血再灌注损伤,改善肝功能,提高大鼠肝移植的存活率。

Mcl-1反义寡核苷酸调控Hela细胞生物学功能及对化疗敏感性的影响

目的:探讨髓样细胞白血病-1(myeloid leukemia-1,Mcl-1)基因对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的调控作用及其对宫颈癌化疗敏感性的影响。方法:通过脂质体瞬时转染Mcl-1反义寡核苷酸(antisense oligo-nucleotide,AS-ODN)至Hela细胞;用Western印迹检测Mcl-1表达水平;采用MTT法和流式细胞分析技术分别检测Hela细胞的增殖和凋亡情况。结果:Mcl-1 AS-ODN可明显抑制Hela细胞增殖,阻滞细胞G1/S期进程,并且促进细胞凋亡。Hela细胞对化疗敏感性普遍偏低,然而在Mcl-1 AS-ODN抑制Mcl-1表达后,化疗药物诱导细胞凋亡率和生长抑制率显著增加。结论:Mcl-1 AS-ODN能够抑制Hela细胞增殖并促进其凋亡,而且能够增加Hela细胞对化疗药物敏感性。提示Mcl-1有可能成为辅助宫颈癌化疗新的分子靶点。

湖南省农村卫生适宜技术推广培训情况调查分析

目的 通过对湖南省农村卫生适宜技术培训人员数据库中收录的2370名参加培训人员的调查数据进行统计分析,了解和掌握农村卫生适宜技术的推广培训情况,以探索适合湖南省农村医疗卫生机构的适宜技术推广培训模式.方法 采用SPSS 12.0软件对湖南省农村卫生适宜技术培训人员数据库中收录的2370名参加培训人员的调查数据进行统计分析.结果 湖南省参加培训人员学历及技术职称总体构成较低,以中专学历（57.55%）和初级职称（47%）为主,仅8.82%具有本科及以上学历,仅21.2%具有中级以上职称;73.9%的人认为适宜技术较适用或很适用;通过本项目培训后,40.8%的人能熟练应用本技术,较培训前有显著提高（χ2=788.27,P〈0.01）;99.3%的人认为需要培训,且48.9%的人认为需要进行再培训.结论 本项目培训推广的农村卫生适宜技术难易度适中,适用于大多数农村卫生技术人员,具有很高的培训需求度,培训后相关卫生技术人员对适宜技术的熟练应用程度得到了显著提高.

CGRP预培养对肝细胞冻存损伤的保护作用及机制

【目的】探讨降钙素基因相关肽（CGRP）预培养对冻存肝细胞的保护作用与机制。【方法】外科切除肝组织分成5组：①对照组（DMEM预培养0h）；②标准预培养组（DMEM预培养8h）；③CGRP三个浓度预培养组（10^-6mol／L，10^-7mol／L，10^-8mol／L；8h）。采用胶原酶灌注法分离肝细胞，经预培养后冻存5周，复苏，台盼蓝检测新鲜分离肝细胞成活率，并体外培养肝细胞48h，用MTT法观察肝细胞活力，收集细胞培养上清检测谷白蛋白（Alb），乳酸脱氢酶（LDH）水平，检测肝细胞内活性氧（ROS）及丙二醛（MDA）含量。【结果】预培养组及各CGRP（10^-6，10^-7，10^-8）处理组细胞成活率（53±5，63±6，61±6，58±7）、Alb合成（4．8±0．6，6．5±0．7，5．8±0．7，4．9±0．6）及MTT活性（0．25±0．07，0．38±0．06，0．31±0．05，0．22±0．03）较对照组（46±7，3．9±0．6；0．11±0．01）显著增加（P〈O．05），且CGRP（10^-6，10^-7）处理组细胞成活率、Alb合成及MTT活性显著高于预培养组（P〈0．05）；预培养组及各cGRP（10^-6，10^-7，10^-8）处理组肝细胞复苏后48h内LDH释放（25±7，15±4，17±5，18±6），ROS释放（107士9．5，62±4．8，70±7．1，80±5．8）及MDA水平（0．87±0．1，0．70±0．06，0．76±0．07，0．80±0．07）较对照组（31±6，120±8．5，1．31±0．04）显著减少（P〈O．05），且与预培养对照组比较，CGRP（10^-6，10^-7，10^-8）各处理组LDH及ROS释放显著减少（P〈0．05），CGRP（10^-6，10^-7 。）处理组MDA释放显著减少（P〈0．05）。【结论】cGRP预培养对冻存引起的肝细胞损伤具有保护作用，其机制与抗氧化应激损伤有关。

IL-27在肝癌患者血清中表达增高对肝癌诊断的研究

目的探讨IL-27在肝癌早期诊断中的临床意义。方法通过ELISA法检测52例肝癌患者（肝癌组）与62例非肝癌患者（对照组）血清IL-27细胞因子水平，运用ROC统计学分析比较其与甲胎蛋白（AFP）诊断肝癌的诊断效能，Logistic回归分析获得IL-27和AFP两者联合诊断的模型预测肝癌。结果肝癌患者的IL-27浓度[（364．19±177．55）pg／m1]高于对照组[（255．494±94．33）pg／ml，P＜0．01]；ROC分析IL-27和AFP判断肝癌的曲线下面积（AUC）分别为0．804和0．818，两者对诊断均有统计学意义（P＜0．01）；Logistic逐步回归得出的AFP和IL-27回归模型预测值（PRE），判断肝癌的ROC曲线下面积0．901、敏感度84．8％、特异度96．7％较两指标单独诊断时明显提高。结论本研究获得AFP和IL-27的诊断模型，可用于对肝癌的联合诊断。