湖南省某专科医院非结核分枝杆菌临床分离株菌种鉴定及药敏结果

目的探讨非结核分枝杆菌肺病(NTMPD)菌种分布及耐药性,为其临床诊治提供依据。方法收集2017—2019年湖南省某胸科医院BACTEC MGIT 960系统培养阳性的临床分离菌株,经MPB64检测以及PNB、TCH培养基生长试验分离出非结核分枝杆菌(NTM),应用16Sr RNA、Hsp65、ITS基因测序法将NTM鉴定至种,采用最低抑菌浓度(MIC)法检测其中脓肿分枝杆菌对10种抗菌药物的耐药性。结果10443份MGIT 960报告阳性的菌株中,共检出NTM 1227株,检出率为11.7%。经菌种鉴定,居前4位者依次为胞内分枝杆菌(27.8%)、脓肿分枝杆菌(25.3%)、戈登分枝杆菌(16.5%)、鸟分枝杆菌(16.1%)。脓肿分枝杆菌对阿米卡星、克拉霉素和利奈唑胺的敏感性较高,敏感率分别是94.6%、87.5%、82.1%;对其他药物的敏感率均低于50%。结论湖南省NTM流行的菌种以脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主,阿米卡星和克拉霉素可作为该省临床治疗脓肿分枝杆菌感染患者的优选抗菌药物。

湖南省肺结核四种一线抗结核药物耐药特征及影响因素研究

目的分析湖南省肺结核四种一线抗结核药物耐药特征及其影响因素,为防治耐药结核病提供科学依据。方法收集2012-2016年湖南省胸科医院住院诊疗的所有肺结核患者病历信息,以菌型鉴定证实为结核分枝杆菌且进行了一线4种抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇)敏感度测试者为研究对象,运用单因素和多因素分析方法研究肺结核的耐药特征及其影响因素。结果 2012-2016年共有11 486例患者纳入研究,其中,男性8 081例(70.4%),女性3 405(29.6%);平均年龄(44.6±14.5)岁;户籍以农村患者为主,共7 816例(68.0%),城市3 670例(32.0%);职业以农民为主,7 183例(62.5%)。肺结核总耐药率为30.6%,其中单耐药率为7.0%、耐多药率(MDR-TB)16.4%和多耐药率为7.2%;对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的总耐药率分别为22.3%、20.8%、8.5%和15.8%;对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇单耐药率分别为1.9%、1.9%、1.4%和1.8%。湘西、湘北、湘中等地区的耐药率及耐多药率高于其他地区(χ~2=36.295,P=0.000 1;χ~2=50.970,P=0.000 1)。2012-2016年各年份耐药率分别为35.2%、32.0%、34.4%、27.7%、24.7%,总体呈下降趋势(χ~2=91.792,P=0.000 1),耐多药率分别为18.9%、17.1%、18,5%、13.8%、14.3,总体呈下降趋势(χ~2=60.933,P=0.000 1)。多因素Logistic回归分析结果显示,影响结核病耐药及耐多药产生的因素包括男性、21～60岁、农村、复治、职业为农民、湘西、湘北、湘中等。最主要的因素是治疗分类,复治患者发生耐药和耐多药的危险性是初治的4.231倍(95%CI:3.855-4.643)和5.608倍(95%CI:5.040-6.240)。结论加强对农村地区、男性、职业为农民、年龄在21～60岁之间、复治的患者的治疗与管理,是预防和控制耐药及耐多药结核病产生的关键。

2012-2017年湖南省非结核分枝杆菌感染的特征分析

目的分析湖南省2012—2017年非结核分枝杆菌(NTM)的感染趋势、分布特征、流行状况,为湖南省NTM感染的防治提供参考依据。方法收集2012—2017年来自湖南省14个地级市、在湖南省胸科医院经BACTECMGIT960法确诊为分枝杆菌感染的患者15576例,其中男性11126例,女性4450例。分离出分枝杆菌菌株15576株(每例患者1株)。采用MPB64蛋白免疫胶体金法、对硝基苯甲酸(PNB)生长试验进行结核分枝杆菌复合群(MTBC)与NTM的初步鉴别,应用16SrRNA、Hsp65测序法对初步鉴定为NTM的菌株进行菌种鉴定,并对NTM感染者的相关临床资料进行分析。结果2012—2017年NTM检出率为10.17%(1584/15576);男性NTM感染者占62.06%(983/1584),女性占37.94%(601/1584);年龄分布中,40~岁的中老年患者最多,占39.02%(618/1584);职业分布以农民为主,占66.67%(1056/1584)。2016年NTM菌种分布达24种,位列前4者分别为:胞内分枝杆菌[25.23%(84/333)]、脓肿分枝杆菌[24.62%(82/333)]、戈登分枝杆菌[18.62%(62/333)]、鸟分枝杆菌[16.82%(56/333)];2017年NTM菌种分布达21种,位列前4者分别为:胞内分枝杆菌[27.15%(104/383)]、脓肿分枝杆菌[22.46%(86/383)]、戈登分枝杆菌[21.15%(81/383)],鸟分枝杆菌[17.49%(67/383)]。结论2012—2017年湖南省NTM检出率处于较高水平,感染人群以男性、中老年、农民为主,以致病NTM菌居多。

利福平耐药与敏感肺结核患者痰液样本微生物菌群多样性对比分析

目的:利用16S高通量测序技术,探索利福平耐药与利福平敏感肺结核患者呼吸道菌群的差异。方法:收集北京市疾病预防控制中心(70份)和湖南省胸科医院(10份)确诊的肺结核患者的痰液(共80份)进行前瞻性研究,通过痰液样本GeneXpert MTB/RIF检测、靶向rpoB高通量测序(tNGS测序)和利福平药物敏感性试验,将80例患者分为利福平耐药组(RFP-R组,41例;利福平耐药决定区突变)和利福平敏感组(RFP-S组,39例;利福平耐药决定区无突变)。对痰液微生物16S V4区域进行高通量测序,测序结果进行生物信息学分析及统计分析。结果:RFP-R组和RFP-S组共获得41950224个原始16S rRNA序列。RFP-R组的平均操作分类单元(operational taxonomic units,OTU)为344个,RFP-S组的平均OTU为342个。厚壁菌门(47.72%)、拟杆菌门(22.36%)、变形菌门(14.67%)、放线菌门(7.57%)、梭杆菌门(6.46%)是肺结核患者痰液中检出的主要细菌门,占微生物群落的98.78%。与RFP-S组相比,RFP-R组梭杆菌门(7.531%vs.5.167%;t=2.218,P=0.030)和螺旋体门(0.596%vs.0.246%;t=2.128,P=0.038)相对丰度显著增加。与RFP-S组相比,RFP-R组颤杆菌克属(0.690%vs.0.326%;t=3.112,P=0.003)、产线菌属(0.135%vs.0.030%;t=2.171,P=0.035)、Allisonella菌属(0.046%vs.0.006%;t=3.237,P=0.002)、假单胞菌属(0.205%vs.0.054%;t=2.040,P=0.046)和密螺旋体属(0.601%vs.0.242%;t=2.155,P=0.036)相对丰度显著增加;二氧化碳噬纤维菌属(0.351%vs.0.772%;t=―2.044,P=0.046)和Pauljensenia菌属(2.314%vs.3.706%;t=―2.660,P=0.010)相对丰度显著减少。结论:利福平耐药与敏感结核分枝杆菌感染不影响肺结核患者呼吸道菌群的整体结构,但利福平耐药与敏感患者在2个门(梭杆菌门、螺旋体门)和7个属(颤杆菌克属、产线菌属、Allisonella菌属、假单胞菌属、密螺旋体属、二氧化碳噬纤维菌属、Pauljensenia菌属)的丰度中存在差异,其中二氧化碳噬纤维菌属和Pauljensenia菌属在利福平敏感患者中丰度较高,其余在利福平耐药患者中丰度较高。

基于BACTEC MGIT 960培养的结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌混合感染检测方法的研究

目的:探讨结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)混合感染的检测方法,为临床诊治混合感染提供参考依据。方法:使用脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌3种NTM和MTBC标准菌株(H37Rv)各制备3种不同初始浓度(10^(-2)mg/ml、10^(-4)mg/ml和10^(-6)mg/ml)的菌液,将每个浓度的NTM与MTBC采用9种不同比例(NTM标准菌株与H37Rv按照1∶99、5∶95、10∶90、20∶80、50∶50、80∶20、90∶10、95∶5和99∶1)混合制成81种混合感染标本。3种感染模型分别为脓肿分枝杆菌和H37Rv、鸟分枝杆菌和H37Rv、胞内分枝杆菌和H37Rv。经BACTEC MGIT 960培养,采用MPB64抗原检测、对硝基苯甲酸(PNB)生长试验、荧光PCR熔解曲线法和恒温扩增实时荧光法4种方法对培养液进行检测。结果:3种混合感染模型的81份标本均在34 d内报告阳性。其中,MPB64抗原检测阳性3份(3.7%,3/81);PNB生长试验阳性78份(96.3%,78/81);荧光PCR熔解曲线法仅检出相应的NTM 64份(79.0%,64/81),仅检出MTBC 3份(3.7%,3/81),同时检出相应的NTM和MTBC 14份(17.3%,14/81);恒温扩增实时荧光法检出MTBC 67份(82.7%,67/81)。结论:临床标本经BACTEC MGIT 960培养,仪器报告阳性后,用MPB64抗原检测和PNB生长试验初判,若有NTM生长,建议采用分子生物学方法鉴定NTM,同时用单一检测MTBC核酸的方法对培养液进行检测,以免MTBC漏检。

肺炎支原体IgM抗体阳性肺结核患者的流行病学特征

目的:探讨肺结核患者肺炎支原体(MP),IgM抗体流行病学特征,为防治支原体感染提供科学依据。方法:选取本院2018年1-12月收治的肺结核确诊患者为研究对象,入院后空腹采血,采用间接免疫荧光法检测血清MP-IgM抗体,使用SPSS20.0统计学软件对所有患者的临床资料及MP-IgM抗体阳性率进行比较分析。结果:1551例肺结核患者中,血清MP-IgM抗体阳性178例,阳性率为11.48%。全年血清MP-IgM抗体阳性率随着气候变化而不同,4个季度阳性率比较,总体差异有统计学意义(X^(2)=13.86,P<0.05)。季度间比较,春季,(13.52%)和冬季(14.97%)MP-IgM检测阳性率均高于夏季(7.93%)。其余各季度间比较,差异无统计意义。多因素二分类logistic回归分析结果显示,性别为男性、利福平耐药在肺结核并发MP感染患者中的比率更低[OR值(95%CI值)分别为0.54(0.39~0.76)、0.60(0.38~0.97)]。结论:本地区肺结核患者,并发MP感染占有一定比例,春季和冬季的感染率高于夏季,女性、利福平敏感的患者更容易感染MP。临床应重视肺结核患者合并MP感染。

结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药相关基因突变与耐药水平的相关性研究

目的探究结核分枝杆菌中利福平和异烟肼耐药基因突变谱的分布,为研发更为精准的耐药分子诊断技术和临床决策提供依据。方法收集国家耐药监测点新疆维吾尔自治区柯坪县、岳普湖县和疏勒县193株和湖南省怀化市、永顺县、祁东县、桃江县和耒阳市592株结核分枝杆菌。采用微孔板法测定菌株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。根据药物敏感性试验(简称"药敏试验")结果选取利福平和异烟肼耐药菌株,经CTAB/NaCl法提取核酸后进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),将所得基因组原始序列过滤后上传至TBprofiler分析工具以确定耐药基因型。结果785株结核分枝杆菌中,124株(15.80%)为利福平和(或)异烟肼耐药,包括利福平耐药74株,异烟肼耐药111株,耐多药61株(7.77%)。97.22%(70/72)利福平耐药菌株检测出rpoB基因位点突变,其中98.57%(69/70)的突变位于利福平耐药决定区(RRDR),1株检测出RRDR区以外的与利福平耐药相关的罕见突变I491F。利福平耐药突变主要位于rpoB450、rpoB445及rpoB435密码子,占81.43%(57/70),其中rpoB S450L突变出现的频率最高(45.71%,32/70),rpoB450位点突变对应高浓度利福平耐药(MIC≥16μg/ml),rpoB 452位点突变主要对应低浓度利福平耐药(MIC=2μg/ml)。93.58%(102/109)的异烟肼耐药菌株存在耐药相关基因突变,85.29%(87/102)的异烟肼突变位于katG315及fabG1启动子区,katG S315T为最常见的耐药突变(57.84%,59/102),主要对应高浓度异烟肼耐药(MIC≥2μg/ml),其次为fabG1(C15T)(16.67%,17/102),主要对应低浓度异烟肼耐药(MIC=0.25~1.00μg/ml)。结论不同耐药基因突变导致的结核分枝杆菌耐药水平不同。对于利福平,rpoB452位点突变对应低浓度耐药,rpoB445和450位点突变对应高浓度耐药;对于异烟肼,发病fabG1-15突变对应低浓度耐药,katG 315突变对应高浓度耐药。

结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白的表达和纯化及其诱导的免疫应答特征

目的:随着卡介苗的保护效应日趋减弱,以及结核分枝杆菌耐药株的广泛存在,全球尚缺乏控制结核病的有效疫苗,全球结核病发病率和病死率仍然较高。本研究旨在分析结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白在诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答中的作用,评价其作为抗结核病候选疫苗的潜力。方法:在细菌的对数生长期加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPTG)诱导细菌表达Rv2654重组蛋白,用亲和层析纯化,蛋白质印迹法鉴定Rv2654重组蛋白。采用ELISA方法检测不同人群血清与Rv2654重组蛋白的免疫反应性。以Rv2654重组蛋白免疫昆明小鼠,采用细胞因子磁珠阵列法检测小鼠外周血Th1/Th2类细胞因子水平,并以流式细胞术分析小鼠脾T、B淋巴细胞亚群分布。结果:成功表达Rv2654重组蛋白,以Rv2654重组蛋白作为抗原的ELISA结果显示其与卡介苗接种者或活动期结核患者血清均有反应性。Rv2654重组蛋白免疫小鼠可促进小鼠外周血IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10等多种细胞因子表达(均P<0.05),流式细胞术结果显示Rv2654重组蛋白可显著刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞分化为效应T细胞,这种作用在联合卡介苗应用时更为明显,Rv2654重组蛋白也能刺激小鼠B细胞活化增殖并向记忆细胞分化。结论:Rv2654重组蛋白可诱导小鼠的细胞免疫应答,而且与卡介苗接种者和活动性肺结核患者血清有较好的结合能力,有望作为结核病免疫学预防和诊断类疫苗的候选抗原。

二项分类logistic回归的基本原理和关键问题

二项分类logistic回归是医学研究中常用的方法，优势比及其95％可信区间是logistic回归分析最重要的参数值，直接反映了自变量作用的大小和方向。而样本含量、自变量筛选、变量赋值和结果解释则是进行logistic回归分析的关键问题，决定了回归分析是否能得到相对最佳的回归模型而准确反映自变量的影响作用，作者将就上述问题进行阐述。

INF-γ和IL-2联合检测在结核病辅助诊断中的价值

目的探讨外周血单个核细胞中γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-2(IL-2)联合检测在结核病辅助诊断中的应用价值。方法以结核病患者256例(结核组)、非结核肺部疾病患者69例(非结核肺部疾病组)、健康体检者56例(健康对照组)为研究对象,检测经结核重组特异性蛋白刺激外周血细胞后产生的IL-2、IFN-γ水平,并分析IL-2、IFN-γ单项及联合检测(包括串联与并联试验)的诊断效能。结果IFN-γ在结核组与非结核肺部疾病组、结核组与健康对照组之间差异均有统计学意义(P<0.017);IL-2在结核组与非结核肺部疾病组、结核组与健康对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.017)。经受试者工作特征曲线分析,IL-2的曲线下面积为0.851;IFN-γ的曲线下面积为0.843;IL-2、IFN-γ串联试验的敏感度为75.12%,特异度为94.00%,IL-2、IFN-γ并联试验的敏感度为85.71%,特异度为86.00%。结论IFN-γ与IL-2联合检测可提高结核病的检出率。

PCT、CRP、ESR和WBC对肺结核合并肺部感染诊断的比较

目的探讨血清降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)和白细胞(WBC)计数对肺结核(PTB)合并肺部感染诊断的差异性。方法检测临床确诊为活动性PTB合并肺部感染和未合并感染患者血PCT、CRP、ESR和WBC,采用SPSS 16.0软件对两组资料进行统计分析,MedCalc V12.7.7.0软件进行接受者操作特性(ROC)曲线分析,计算并比较各指标曲线下面积(AUC),确定最佳临界值。结果合并感染组血PCT、CRP、ESR和WBC均高于未合并感染组,差异有统计学意义(均P<0.01);4个指标诊断PTB合并肺部感染的AUC分别是0.89、0.75、0.74和0.72,PCT的AUC明显高于其他三个指标,差异有统计学意义(P<0.01);最佳临界值分别是0.29 ng/ml、15.00 mg/L、37.00 mm/h和7.86×109/L。结论血PCT、CRP、ESR和WBC对诊断PTB合并肺部感染均有一定价值,PCT优于其他3个指标。

结核分枝杆菌固体培养结合不同分子生物学检测的应用分析

目的探讨分枝杆菌固体培养(L-J)结合实时荧光定量PCR(FQ-PCR)、环介导等温扩增(LAMP)、线性探针杂交(LPA)和多色半巢式荧光定量PCR(GeneXpert)检测痰液中结核分枝杆菌(MTB)及耐药的临床应用价值。方法连续收集湖南省胸科医院2018年5月至2019年11月初诊肺结核疑似患者(A组)和活动性肺结核住院患者(B组)痰标本。A组进行L-J、FQ-PCR和LAMP 3种方法检测,比较联合与单独检测的病原学阳性率,计算3种方法病原学结果的一致率;B组进行L-J及绝对浓度法固体药敏试验、LPA和GeneXpert 3种方法检测,比较联合与单独检测的病原学阳性率,计算3种方法病原学和药敏结果的一致率。结果A组共检测347例患者痰标本,L-J+FQ-PCR和L-J+LAMP的阳性率分别为33.1%和28.5%,均显著高于L-J(21.6%),差异有统计学意义(χ2=11.59,P<0.01;χ2=4.42,P<0.01);3种方法病原学结果总的一致率为79.3%(275/352)。B组共检测172例患者痰标本,L-J+LPA的阳性率(57.6%)显著高于LPA(42.4%),L-J+GeneXpert的阳性率(62.2%)显著高于L-J(45.4%),差异有统计学意义(χ2=7.86,P<0.01;χ2=9.84,P<0.01);3种方法病原学检测和利福平药敏结果总的一致率分别为65.7%(113/172)和94.0%(47/50)。结论固体培养联合一种分子生物学检测技术可以提高肺结核患者病原学阳性率,适合在县、市级结核病定点医疗机构推广应用。

病原学阴性初治肺结核患者诊断模型的建立及初步评价

目的建立病原学阴性初治肺结核患者的诊断模型,以提高临床诊断的规范性及准确性。方法收集2017年8月至2019年7月湖南省胸科医院收治的年龄≥15岁、结核分枝杆菌病原学检查阴性,且从未因结核病应用过抗结核药物治疗或不规范化疗未满1个月已确诊的200例病原学阴性初治肺结核患者和212例非结核性肺部疾病患者的临床资料。采用简单随机数字表法将两组患者分为两类,一类为训练样本,一类为考核样本,两类样本比例为3:1。通过对训练样本临床观察指标进行单因素和多因素非条件logistic回归分析,筛选出独立预测因子并建立诊断模型,并以训练样本的临床诊断结果为金标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估模型的诊断能力,再使用考核样本对建立的诊断模型进行前瞻性考核。结果对训练样本临床观察指标的多因素非条件logistic回归分析显示,血清白蛋白/球蛋白比值(A/G)>1.2、血清糖类抗原-125(CA-125)>35 kU/L、全血结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验(IGRA)阳性、咳嗽≥2周、有咯血或者痰中带血、全身结核中毒症状、并发其他疾病、病灶发生于单侧或两侧的肺上叶尖后段和(或)下叶背段和空洞形成是病原学阴性初治肺结核与非结核性肺部疾病鉴别的相关独立因素[Wald χ~2=7.264,P=0.007,OR(95%CI)=3.433(1.400~8.417);Wald χ~2=17.114,P=0.000,OR(95%CI)=6.980(2.780~17.524);Wald χ~2=63.643,P=0.000,OR(95%CI)=19.283(9.320~39.894);Wald χ~2=5.557,P=0.018,OR(95%CI)=0.434 (0.217~0.869);Wald χ~2=6.237,P=0.013,OR(95%CI)=0.255 (0.087~0.745);Wald χ~2=24.930,P=0.000,OR(95%CI)=0.126 (0.056~0.284);Wald χ~2=12.062,P=0.001,OR(95%CI)=10.139(2.743~37.746);Wald χ~2=16.224,P=0.000,OR(95%CI)=4.428(2.147~9.135);Wald χ~2=16.228,P=0.000,OR(95%CI)=14.437(3.939~52.919)]。ROC曲线分析模型的诊断效能为曲线下面积(AUC)=0.881(95%CI:0.839~0.915),最佳临界值为0.42,诊断病原学阴性初治肺结核的敏感度和特异度分别为86.67%和76.10%。经考核样本检验,建立的诊断模型对两组患者总的准确判别率为79.61%(82/103)。结论本研究建立的模型敏感度和准确率均较高,可以作为临床医师诊断病原学阴性初治肺结核的辅助参考工具。

全血γ-干扰素释放试验QFT-GIT的不确定结果分析

目的了解体检人群中QFT-GIT检测不确定结果（ITRs）的发生率,探讨该结果产生原因。方法回顾性分析我院5 452例筛查结核病的体检者的QFT-GIT结果,比较分析ITRs发生率及空白对照（Nil）管、结核抗原（TB Ag）管和促有丝分裂因子（Mitogen）管的IFN-γ浓度。对ITRs标本进行复查,分析产生该结果的主要原因。结果 5 452例体检者经QFT-GIT首次检测,共有215份（3.94%）为ITRs,其中女性ITRs发生率（5.06%）高于男性（2.71%）（χ2=19.86,P〈0.05）,46岁以上人群ITRs发生率（5.18%）高于5至45岁人群（1.87%）（χ2=37.07,P〈0.05）。215例ITRs结果标本中1例（0.47%）为过高Nil值、214例（99.53%）为低Mitogen值所造成。经过复查,201例（93.49%）仍为不确定,14例（6.51%）变为确定结果。复查为确定结果组首次检测的Mitogen-Nil的IFN-γ浓度（中位浓度0.40 IU/m L）大于ITRs组（中位浓度0.18 IU/m L）（Z=-4.56,P〈0.05）。结论体检人群中QFT-GIT检测ITRs发生率低,女性高于男性,46岁以上人群高于5-45岁人群,主要原因是低Mitogen值。

结核分枝杆菌γ-干扰素体外释放试验在结核感染诊断中的临界值研究

目的探讨结核分枝杆菌γ-干扰素释放试验(IGRAs)在结核分枝杆菌(MTB)感染诊断中的应用价值以及诊断不同年龄MTB感染的最佳临界值。方法采用回顾性研究。收集574例结核患者和351例结核潜伏感染(LTBI)者作为实验组,337例非结核肺部疾病患者和294例体检健康者作为对照组。采用QFT-GIT试剂盒检测空白对照管(Nil管)、结核抗原管(TB Ag管)和促有丝分裂因子管(Mitogen管)IFN-γ浓度并得出Nil、TB Ag-Nil和Mitogen-Nil,比较分析2组间各检测值差异。按照年龄将纳入分析人群分为中青年组(15~60岁)和老年组(≥61岁),并分别统计分析TB Ag-Nil差异。ROC曲线分析TB Ag-Nil诊断MTB感染的敏感性、特异性和最佳临界值。结果 Nil在实验组[0.09(0.06,0.14)IU/m L]与对照组[0.08(0.05,0.14)IU/m L]间差异有统计学意义(Z=-3.646,P<0.01)。TB Ag-Nil在实验组[1.16(0.38,3.12)IU/m L]与对照组[0.22(0.13,0.35)IU/m L]间差异有统计学意义(Z=-20.382,P<0.01);中青年组,TB Ag-Nil在实验组[1.55(0.43,3.64)IU/m L]与对照组[0.22(0.13,0.36)IU/m L]间差异有统计学意义(Z=-17.718,P<0.01);老年组,TB Ag-Nil在实验组[0.53(0.33,1.47)IU/m L]与对照组[0.20(0.08,0.31)IU/m L]间差异有统计学意义(Z=-10.170,P<0.01)。MitogenNil在2组间比较差异无统计学意义(Z=-0.363,P=0.716)。ROC曲线分析,TB Ag-Nil鉴别中青年MTB感染、老年MTB感染曲线下面积(AUC)分别是0.810和0.792,最佳临界值分别是0.36 IU/m L和0.30 IU/m L,敏感性分别为83.9%和87.7%,特异性分别为75.6%和71.8%。结论 TB Ag-Nil可用于MTB感染辅助诊断,中青年组和老年组最佳临界值略有差异。

MTB特异性细胞免疫反应试剂盒检测活动性肺结核患者出现假阴性的危险因素分析

目的探讨结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应(QuantiFERON-TB Gold In-Tube,QFT-GIT)试剂盒检测活动性肺结核患者出现假阴性的相关影响因素。方法收集2018年7—10月间于湖南省胸科医院住院并通过病史、临床症状、体征、影像学、细菌学、病理、诊断性治疗等手段单独或联合确诊的1287例活动性肺结核患者作为研究对象,根据纳入和排除标准最终纳入1072例。采用多因素logistic回归分析QFT-GIT检测活动性肺结核患者造成假阴性的独立危险因素。结果1072例活动性肺结核患者QFT-GIT结果显示假阴性188例(17.5%),真阳性884例(82.5%)。QFT-GIT真阳性结果中40~岁与60~92岁年龄组的患者分别占32.1%(284/884)和23.0%(203/884),复治患者占18.3%(162/884),肺结核并发肺外结核的患者占11.0%(97/884),培养阴性患者占72.5%(641/884)、白蛋白<35g/L的患者占9.6%(85/884)、淋巴细胞计数<0.6×10^9/L的患者占1.8%(16/884);QFT-GIT假阴性结果中40~岁与60~92岁年龄组的患者分别占36.7%(69/188)和38.8%(73/188)、复治患者占31.4%(59/188)、肺结核并发肺外结核的患者占20.7%(39/188)、培养阴性的患者占86.2%(162/188)、白蛋白<35g/L的患者占19.1%(36/188)、淋巴细胞计数<0.6×10^9/L的患者占7.4%(14/188);差异均有统计学意义(χ2值分别为31.819、16.085、13.574、16.651、14.072、18.109,P值均<0.05)。多因素logistic回归分析显示,40~岁年龄组(OR=1.972,95%CI=1.306~2.976,P=0.001)、60~92岁年龄组(OR=2.782,95%CI=1.832~4.224,P<0.001)、复治(OR=1.741,95%CI=1.174~2.581,P=0.006)、肺结核并发肺外结核(OR=2.043,95%CI=1.314~3.176,P=0.002)、痰培养阴性(OR=3.354,95%CI=2.066~5.446,P<0.001)、白蛋白<35g/L(OR=2.777,95%CI=1.721~4.481,P<0.001)、淋巴细胞计数<0.6×10^9/L(OR=3.662,95%CI=1.679~7.987,P=0.001)为QFT-GIT假阴性的独立危险因素。结论40~岁年龄组、复治、肺结核并发肺外结核、培养阴性、白蛋白<35g/L和淋巴细胞计数<0.6×10^9/L是造成QFT-GIT检测活动性肺结核患者出现假阴性结果的独立危险因素。

重组结核分枝杆菌Hsp16.3的纳米金免疫传感器检测Hsp16.3抗体

克隆和表达结核分枝杆菌热休克蛋白16.3(Hsp16.3),建立纳米金免疫传感器检测结核病患者血清Hsp16.3抗体。PCR扩增hsp16.3基因,构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,表达和纯化Hsp16.3,Western blot分析其反应原性;晶种生长法制备金纳米棒并连接Hsp16.3,建立纳米金免疫传感器检测血清Hsp16.3抗体,接受者操作特性(ROC)曲线评价其灵敏度和特异性。成功构建重组表达质粒pQE30-hsp16.3,纯化Hsp16.3具有良好的反应原性;Hsp16.3的纳米金免疫传感器分别检测50例结核病患者、42例非结核肺病患者和50例体检健康者血清,红移值大于3.5的例数分别为42、7、1例;ROC曲线显示,曲线下面积0.888(P<0.01),界值3.5,灵敏度82%,特异性98%。结果表明,Hsp16.3的纳米金免疫传感器可用于检测结核病血清Hsp16.3抗体。

结核病专科医院鼻疽奴卡菌9例临床分析

目的探讨结核病专科医院9例鼻疽奴卡菌感染者的临床特点,提高临床医生对肺奴卡菌感染的认识。方法回顾性分析2016年7月至2017年2月期间湖南省胸科医院经BACTEC MGIT960系统检出的9例奴卡菌感染者的临床资料。结果 9例患者均合并有一种或多种基础疾病,其中合并肺结核4例、慢性支气管炎伴肺气肿4例、慢性阻塞性肺疾病2例、泌尿系结核伴腰椎结核1例。仅1例有激素治疗史。9例患者以肺部受累为主,临床症状、影像学改变均无特异性。9例奴卡菌感染者均为鼻疽奴卡菌。9例均对妥布霉素、头孢西丁、头孢他啶耐药,对利奈唑胺、阿米卡星敏感;2例对复方新诺明(复方磺胺甲噁唑)耐药。7例感染者拟诊为肺结核,5例明确合并结核感染。9例均接受过经验性或诊断性联合抗痨及抗感染治疗,除常规联合使用一线抗痨药外,还使用了其它抗生素(包括左氧氟沙星4例、三代头孢菌素2例、哌拉西林/舒巴坦1例、左氧氟沙星+阿米卡星1例、克拉霉素1例)。5例症状好转(包括使用左氧氟沙星者4例、左氧氟沙星+阿米卡星1例)。结论慢性肺部疾病患者易并发肺奴卡菌感染。对拟诊为肺结核的患者,经验性抗痨治疗十余天后,临床症状未能改善或者病情反复甚至加重,应考虑是否为/合并肺奴卡菌感染。用于治疗结核病常用的二线药物左氧氟沙星或阿米卡星,在治疗奴卡菌感染时也有较好疗效。

湖南省长沙市18岁以上居民慢性阻塞性肺疾病流行现状及其影响因素

目的了解湖南省长沙市居民慢性阻塞性肺疾病流行现状及其影响因素。方法 2017年5—7月,采用横断面研究方法,通过多阶段整群随机抽样,对长沙市>18岁常住居民进行入户问卷调查、体格检查和肺功能检测。结果共获得5 800例调查对象的有效数据,其中慢性阻塞性肺疾病患者225例,长沙市慢性阻塞性肺疾病总体患病率为3.88%(95%CI:3.38%～4.38%),其中男患病率为4.28%(95%CI:3.52%～5.05%),女性患病率为3.53%(95%CI:2.88%～4.18%)。多因素分析结果显示,年龄(OR=2.27,95%CI:1.72～2.99)、居住在农村(OR=1.40,95%CI:1.05～1.88)、吸烟(OR=3.66,95%CI:2.67～5.03)、使用生物燃料(OR=2.63,95%CI:2.00～3.46)会增加慢性阻塞性肺疾病的患病风险。结论年龄、农村、吸烟、使用生物燃料与慢性阻塞性肺疾病患病有关,应加强对老年人群、吸烟人群的健康教育和早期检查,戒烟控烟和减少生物燃料使用是降低慢性阻塞性肺疾病的有效措施。

酶联免疫吸附试验在诊断HIV感染并发结核病患者中的价值

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)在HIV感染并发结核病患者中的临床诊断价值。方法收集2015年1月至2018年9月在湖南省胸科医院临床确诊的HIV感染并发结核病患者95例,HIV感染并发非结核性肺疾病患者19例。分析采用GeneXpertMTB/RIF检测技术(简称“GeneXpert”)、BACTECMGIT960检测技术(简称“MGIT960”)及ELISA法检测全血标本诊断结核病的阳性检出率;以临床诊断为标准,分析3种检测技术诊断HIV感染并发结核病患者的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果GeneXpert、MGIT960法及ELISA3种检测技术对95例HIV感染并发结核病患者的检测阳性率分别为42.11%(40/95),47.37%(45/95),67.37%(64/95)。ELISA检测的阳性率明显高于GeneXpert和MGIT960,差异有统计学意义(χ2=50.031,P=0.000)。19例HIV并发非结核性肺疾病患者中GeneXpert检测阳性者0例;MGIT960检测阳性者0例;ELISA检测阳性者3例。以临床诊断为标准,GeneXpert检测的敏感度为42.11%(40/95),特异度为100.00%(19/19),阳性预测值为100.00%(40/40),阴性预测值为25.68%(19/74);MGIT960法检测的敏感度为47.37%(45/95),特异度为100.00%(19/19),阳性预测值为100.00%(45/45),阴性预测值为27.54%(19/69);ELISA法检测的敏感度为73.56%(64/87),特异度为84.21%(16/19),阳性预测值为95.52%(64/67),阴性预测值为41.03%(16/39)。结论ELISA方法有着较高的敏感度且检测快速便捷,适用于临床上对HIV感染并发结核病患者进行辅助诊断。