漯河地区食管癌患者癌组织中人乳头状瘤病毒感染的检测

目的检测漯河地区食管癌患者中人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染情况,探讨HPV感染与我国河南省漯河地区食管癌发生的相关性。方法应用HPV L1通用引物GP5+/6+、HPV16E6和HPV18E6型特异性引物多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测漯河地区食管癌组织中HPV存在状况。结果 115例食管癌组织中,86例检测到HPV阳性,阳性率为74.8%;其中56例检测到HPV16E6基因,阳性率为48.7%;20例检测到HPV18E6基因,阳性率为17.4%;12例HPV16E6和HPV18E6基因均阳性为混合感染。结论我国河南省漯河地区食管癌与HPV DNA感染存在相关性,并且HPV感染可能是食管癌发生的重要因素之一。

细胞色素C和Survivin在结肠腺癌中的表达及临床意义

目的:研究细胞色素C(Cyt-C)和Survivin在结肠腺癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨Cyt-C和Survivin在结肠腺癌中的表达的相关性。方法:采用手工组织芯片技术及免疫组织化学技术(S-P法)检测59例结肠腺癌和10例正常结肠组织中Cyt-C和Survivin的表达水平。结果:Survivin和Cyt-C在正常结肠中的表达率分别为20.0%和30.0%,在结肠腺癌中的表达率分别为69.5%和78.0%,Survivin蛋白和Cyt-C在结肠腺癌中的表达增加(P<0.05);Cyt-C在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成正相关(P<0.05);Survivin蛋白在结肠癌中的表达和肿瘤细胞的分化程度成负相关(P<0.05);两者与浸润深度,肿瘤的大小,患者的年龄,淋巴结有无转移均无相关性(P>0.05)。结论:Survivin和Cyt-C在结肠癌中表达增加提示Survivin和Cyt-C对结肠癌的发生发展起着重要作用。

淀粉样蛋白前体/早老素1转基因小鼠大脑皮质内kinesin1介导的神经元轴浆运输障碍

目的探讨轴突运输蛋白,kinesin1和神经丝蛋白(SIM-312)在阿尔茨海默病(AD)发生、发展中的作用。方法出生后30~360 d淀粉样蛋白前体(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠(n=40)和野生型小鼠(n=40)用于此研究,利用免疫荧光染色和Western blotting技术检测上述两种小鼠大脑皮层内老年斑的沉积及星形胶质细胞的分布以及在大脑皮质发育过程中kinesin1和SIM-312阳性细胞个数及蛋白的表达变化。结果 APP/PS1转基因小鼠与正常对照组相比,β-淀粉样蛋白(Aβ)斑块增多,星形胶质细胞数目增多,神经元减少;而kinesin1阳性细胞的数量在APP/PS1转基因小鼠生长发育过程中减少,且在出生9月(P9M)之后与野生型小鼠之间差异存在着显著性(P<0.05);SIM-312标记的神经丝蛋白随着年龄的增长自P6M之后开始出现缠结现象。结论 Kinesin1和SIM-312的异常改变导致神经元中轴浆运输障碍以及AD的病理变化。

复方脑肽节苷脂可改善宫内缺氧新生模型小鼠脑损伤并促进突触再生

背景:目前有关复方脑肽节苷脂的研究大多集中在临床一些颅脑损伤和新生儿缺血缺氧性脑病的疗效观察和分析,但其参与神经功能恢复的分子机制少有报道。目的:探讨复方脑肽节苷脂在宫内缺氧新生鼠脑损伤中的保护作用及机制。方法:15只昆明小鼠随机分为对照组、缺氧组和治疗组。于孕14 d开始,缺氧组和治疗组孕鼠置于体积分数10%氧培养箱中,制作胎鼠宫内缺氧模型。孕鼠分娩后,新生鼠经腹腔分别注入复方脑肽节苷脂和PBS,治疗后观察各组小鼠发育情况;对照组不缺氧,不治疗。用免疫荧光和Western blot检测脑胶质纤维酸性蛋白、神经蛋白聚糖、突触分化诱导基因1蛋白和胶原蛋白Ⅳ的表达;小鼠跳台实验测试动物记忆功能。实验方案经漯河医学高等专科学校动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①与对照组相比,缺氧组胶质纤维酸性蛋白和神经蛋白聚糖阳性细胞表达显著增加,而突触分化诱导基因1蛋白和胶原蛋白Ⅳ的表达显著减少;②治疗组突触分化诱导基因1蛋白和胶原蛋白Ⅳ表达均较缺氧组显著增加,而胶质纤维酸性蛋白和神经蛋白聚糖的表达较缺氧组显著减少;③与对照组相比,缺氧组大鼠学习记忆能力明显下降,经复方脑肽节苷脂注射液治疗后学习记忆能力明显改善;④结果说明,复方脑肽节苷脂可减轻缺氧后脑损伤,改善学习记忆能力,具体机制可能与抑制星形胶质细胞活化、下调神经蛋白聚糖和上调胶原蛋白Ⅳ表达,减轻脑血管损伤,促进突触的重建有关。

维甲酸诱导小鼠iPS细胞向神经细胞分化

目的:研究小鼠诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iP S细胞)在体外维甲酸(retinoic acid,RA)的诱导下能否分化成功能性的神经细胞。方法:首先将iPS细胞悬浮培养形成拟胚体,利用RA将其诱导分化成神经前体细胞,然后利用免疫荧光染色技术观察小鼠iPS细胞在体外分化成神经细胞以及突触发生的形态特征。结果:小鼠iPS细胞在RA的诱导下不但能够分化为成熟神经元与胶质细胞还可以观察到树突棘及突触连接的形成。结论:RA作为一种作用很强的分化诱导剂,可以有效的诱导小鼠iPS细胞分化为功能性的神经元和神经胶质细胞,这对其进行后续的神经发育的机制、药物筛选以及自体iPS细胞移植的研究具有重要意义。

乳腺癌组织IGFBP7表达及其临床意义的研究

目的探究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达与乳腺癌临床病理因素及预后的相关性。方法采用免疫组织化学法检测105例乳腺癌患者IGFBP7的表达,并分析IGFBP7的表达情况与乳腺癌患者临床病理特征之间的关系,采用Kaplan-Meier法分析乳腺癌患者的5年无瘤生存率。结果 105例乳腺癌患者癌组织中IGFBP7阳性率为57.1%;IGFBP7表达水平与组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移、雌激素受体表达和孕激素受体表达有明显相关性(P<0.05),但与年龄、绝经状态、TNM分期、病理类型和人类表皮生长因子受体2(HER-2)表达无相关性(P>0.05)。IGFBP7阳性患者的5年无病生存率显著高于IGFBP7阴性患者(P<0.05)。多因素Cox回归模型分析结果表明,IGFBP7表达和淋巴结转移是影响乳腺癌患者生存期的独立因素(P<0.05)。结论 IGFBP7表达阳性的乳腺癌患者更易复发转移。

Notch3诱导人小细胞肺癌H446细胞G_0/G_1期阻滞及其机制

目的探究Notch3对人小细胞肺癌H446细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制。方法将人Notch3真核表达质粒、人HES1真核表达质粒、人鼠双微基因2(MDM2)基因沉默表达质粒及其空质粒分别转染H446细胞,采用流式细胞术检测细胞周期,采用RT-PCR法检测Notch3和MDM2的mRNA水平,采用Western blotting方法检测Notch3、HES1、MDM2、Rb和P21蛋白表达水平。结果 Notch3可抑制H446细胞增殖并导致G_0/G_1期阻滞(P<0.05),上调HES1蛋白表达水平和下调MDM2蛋白表达水平(P<0.05);HES1高表达也能使MDM2蛋白表达水平下降(P<0.05),但对其mRNA水平无影响;沉默MDM2基因可抑制H446细胞增殖(P<0.05),并使H446细胞中Rb和P21蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论 Notch3可通过HES1抑制MDM2蛋白表达,进而上调Rb和P21蛋白表达水平,抑制H446细胞增殖并阻滞H446细胞于G_0/G_1期。

小鼠诱导性多能干细胞的神经细胞分化与突触连接的建立及其功能分析

目的探讨小鼠诱导性多能干细胞(i PSCs)在体外某些因素的诱导下能否分化成功能性的神经细胞,以及神经细胞之间突触的发生与建立。方法首先将i PSCs悬浮培养形成拟胚体,利用维甲酸(RA)将其诱导分化成神经前体细胞,最后撤去RA贴壁培养,利用免疫荧光染色技术观察小鼠i PSCs在体外分化成神经细胞以及神经细胞之间突触发生的形态特征,利用FM1-43染色技术分析突触末端的功能活性。结果小鼠i PSCs能够在RA的诱导下向神经细胞分化,这些神经细胞可以被成熟神经元与胶质细胞标记物标记,新分化的神经元还可以观察到树突棘及突触连接的形成,在去极化刺激下突触活动增强,表现为轴突末端大量FM1-43阳性内吞颗粒。结论由小鼠i PSCs分化而来的神经细胞在体外形成突触连接的过程,提示其可以进一步分化为功能性的神经元和神经胶质细胞。

转铁蛋白受体1对小鼠海马神经元生长与分化的影响

目的探讨转铁蛋白受体1(TfR1)对小鼠海马神经元生长与分化的影响。方法取胚胎18.5 d小鼠原代海马神经元培养,培养7 d后使用TfR1 shRNA p GFP-V-RS干扰质粒转染小鼠海马原代神经元使TfR1基因沉默,采用绿色荧光蛋白(GFP)分析及Western blotting技术检测TfR1 shRNA的转染效率;4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及TUNEL法检测干扰后海马神经细胞凋亡情况,免疫荧光技术检测凋亡后神经细胞骨架的变化及神经元突起生长的形态特征。结果 TfR1 shRNA质粒能有效使神经细胞内TfR1基因沉默;TfR1基因沉默后,原代海马神经细胞凋亡率增加,细胞骨架部分崩解,且神经元树突突起长度明显增长(P<0.05)。结论转铁蛋白受体1可通过调控小鼠海马神经元树突的生长来影响海马神经元的分化。

转铁蛋白受体1对淀粉样蛋白前体/早老素1转基因小鼠神经元的保护作用

目的探讨转铁蛋白受体1(TfR1)在淀粉样蛋白前体(APP)/早老素1(PS1)转基因小鼠脑内异常表达情况及其对阿尔茨海默病(AD)神经元的保护作用。方法首先,利用免疫荧光及Western blotting技术检测出生后1月(P1M)至P12 M各发育时间点,APP/PS1转基因小鼠与野生型小鼠大脑TfR1的表达情况;其次,取APP/PS1转基因与野生型新生小鼠原代海马神经元培养,培养12 d后利用TfR1 shRNA质粒干扰TfR1基因的表达,利用Western blotting技术检测干扰后细胞TfR1的表达变化;ELISA技术检测TfR1干扰前后细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42的分泌量;利用微管相关蛋白2(MAP2)标记神经元突起,观察TfR1干扰前、后神经元突起的生长变化;最后,利用FM1-43染色观察由TfR1介导的轴质运输中囊泡的运输情况。结果在APP/PS1转基因小鼠生长发育过程中,随着年龄的增长TfR1的表达呈现先增加后减少的趋势,在P6M之后明显降低,且与对照组相比差异有显著性;TfR1 shRNA干扰后可以使原代神经元细胞内TfR1基因沉默,使其突起明显变细、变长并影响囊泡的运输。与对照组相比,TfR1基因在APP/PS1转基因小鼠原代神经元中表达量减少,荧光减弱。结论 APP、PS1基因突变可导致TfR1的表达下降;APP/PS1转基因小鼠原代神经元经TfR1 shRNA干扰Aβ1-42分泌量增多,影响神经元突起的生长,使轴质运输速率减慢,囊泡的活动减缓,加重AD病情。故TfR1的表达可以对神经元起到保护作用。

Tbr1影响大脑皮质发育及细胞分化与迁移

目的探究Tbr1基因在大脑新皮质与海马发育过程中的功能。方法分别取胚胎16.5d、18.5d,出生后0d、3d、7d、14d昆明小鼠的脑组织,每个年龄点取材8~10(共52)只,常规固定脱水后石蜡切片,用免疫荧光检测小鼠大脑皮质、海马及齿状回神经细胞迁移与片层化发育过程中Tbr1的表达与分布情况。结果 1.在大脑皮质,Tbr1最早在皮质板广泛表达,随日龄的增加其表达逐渐向皮质板下层移动且最终定位于皮质的第Ⅵ层;2.相似地,齿状回处Tbr1在颗粒细胞层表达,P7之后其表达定位于颗粒细胞下层;3.根据其表达位置及组织发生规律,推测Tbr1阳性细胞即是皮质板内迁移中的新生神经元。结论 Tbr1是影响小鼠大脑皮质发育及神经细胞迁移与分化的关键分子。作为新生神经元的标记物,Tbr1参与细胞分化与迁移以及大脑皮质片层化的形成过程。

高血清胰岛素样生长因子结合蛋白7血症与胰岛素抵抗的相关性研究

目的研究T2DM患者血清胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)与IR的相关性。方法选取新诊断T2DM患者(T2DM组)137例和健康体检者(NC组)96名,测定两组FPG、FIns、血脂、C-RP、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IGFBP7。结果 T2DM组除TC和LDL-C外,其余指标与NC组比较差异有统计学意义(P<0.05)。按T2DM组IGFBP7四分位数将其分成4组(Q1～4),各组间年龄、BMI、C-RP、TNF-α、FIns、HOMA-IR和HOMA-IS差异有统计学意义(P<0.05);新诊断T2DM患者IG-FBP7与年龄、BMI、C-RP、TNF-α、FIns和HOMA-IR呈正相关(r=0.264、0.173、0.255、0.227、0.192、0.325,P<0.05),与HOMA-IS呈负相关(r=-0.324,P<0.01)。年龄、C-RP、TNF-α和HOMA-IR是影响新诊断T2DM患者IGFBP7水平的独立因素(β′=0.318、0.186、0.239、0.255,P<0.05)。结论新诊断T2DM患者IGFBP7与年龄、C-RP、TNF-α和HOMA-IR密切相关。

辣椒碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制

本研究旨在观察辣椒碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其分子机制。乳腺癌MDA-MB-231细胞经不同浓度辣椒碱作用24 h后进行实验,采用CCK-8法检测细胞活性,采用细胞划痕实验测量细胞迁移率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭率,采用Western blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中c-Src、p-c-Src(Tyr416)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、p-FAK(Tyr576/577)、桩蛋白(Paxillin)、p-Paxillin(Tyr118)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中MMP2和MMP9的mRNA水平。结果显示,10~50μmol/L辣椒碱对MDA-MB-231细胞存活率无显著影响,100~500μmol/L辣椒碱显著降低MDA-MB-231细胞存活率(P<0.05);与正常对照组比较,25和50μmol/L辣椒碱组MDA-MB-231细胞体外迁移率和侵袭率均显著降低(P<0.05),c-Src、FAK和Paxillin蛋白的磷酸化水平均显著下降(P<0.05),MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达水平均下降(P<0.05);并且辣椒碱对MDA-MB-231细胞的上述作用具有剂量依赖性。以上结果提示,低浓度辣椒碱可剂量依赖性地抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭,其机制可能涉及辣椒碱对c-Src/FAK/Paxillin信号通路以及MMP2和MMP9表达的抑制。

高尿酸诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗及其机制的研究

目的探究高尿酸血症(HUA)对3T3-L1脂肪细胞IR的影响,并且探讨其分子机制。方法 3T3-L1脂肪细胞先经不同浓度UA单独预处理或与N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)共同预处理后再接受胰岛素刺激,采用CCK-8法检测3T3-L1脂肪细胞活力,采用葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,采用Western blot检测IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平及GluT4蛋白水平。结果 HUA可抑制胰岛素诱导的葡萄糖消耗、Akt磷酸化(Thr308)和IRS-1去磷酸化(Ser307),以及GluT4蛋白表达(P<0.05),这些作用可被NAC可阻断(P<0.05)。结论 HUA可抑制胰岛素激活的IRS-1/Akt信号通路和GluT4蛋白表达,导致3T3-L1脂肪细胞发生IR。

地高辛逆转乳腺癌MCF-7/阿霉素细胞的耐药性及其机制

本研究旨在探究地高辛对乳腺癌MCF-7/阿霉素(ADR)细胞耐药性的影响,并探讨其分子机制。将正常培养的MCF-7和MCF-7/ADR细胞分别设为对照组和ADR组;经地高辛(100 nmol/L)处理48 h后的MCF-7/ADR细胞为ADR+digoxin组;用sh RNA技术沉默HIF-1α基因的MCF-7/ADR细胞为sh HIF-1α组,并设置对照组为shcontrol组。采用CCK-8法检测ADR的细胞毒作用,以测定IC50与耐药指数;用RT-PCR法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和多药耐药基因1(multidrug resistance-1,MDR1)的mRNA水平;用Western blot方法检测HIF-1α和MDR1蛋白的表达水平;用流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示,ADR组细胞对ADR的耐药指数高达115.6,地高辛使其耐药指数下降至47.2(P<0.05);ADR组细胞中HIF-1α与MDR1的mRNA和蛋白水平均高于对照组细胞(均P<0.05),而地高辛可显著降低ADR组细胞HIF-1α与MDR1的蛋白水平,以及MDR1的mRNA水平(P<0.05),但对HIF-1α的mRNA水平无明显影响;经sh RNA干扰HIF-1α基因表达后,HIF-1α和MDR1的蛋白水平均显著降低(P<0.05);沉默HIF-1α基因能显著增强ADR对ADR组细胞的促凋亡作用(P<0.05)。地高辛可有效地诱导shcontrol组和sh HIF-1α组细胞凋亡(P<0.05),但二组之间无显著差异。以上结果提示,地高辛可通过下调HIF-1α蛋白表达从而在转录水平抑制MDR1的表达,也可通过不依赖HIF-1α的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,进而在一定程度上逆转MCF-7/ADR细胞的耐药性。

胰岛素抵抗通过增强氧化应激加重PC12细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的探究IR对PC12细胞缺氧/复氧损伤的影响,及抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)对IR PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法采用100nmol/L胰岛素诱导PC12细胞产生IR,Na_2S_2O_4建立PC12细胞缺氧/复氧模型,CCK-8法检测细胞活力,葡萄糖氧化酶法检测培养液上清中葡萄糖含量并计算葡萄糖消耗量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,流式细胞术分别检测细胞凋亡和线粒体膜电位。结果高胰岛素可在不影响PC12细胞活力的情况下抑制胰岛素诱导的葡萄糖摄取(P<0.05);在IR PC12细胞中,SOD活性较低,MDA水平较高(P<0.05);IR可加重缺氧/复氧诱导的PC12细胞凋亡和线粒体膜电位去极化(P<0.05);NAC可抵消IR诱导的上述作用(P<0.05)。结论 IR可通过增强氧化应激加重PC12细胞缺氧/复氧损伤,而NAC可通过抑制氧化应激和稳定线粒体膜电位,减轻IR PC12细胞缺氧/复氧损伤。

HIF-2α/Notch3通路介导CoCl_2诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭

本研究旨在探究HIF-2α和Notch3在CoCl_2诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭中的作用。使用CoCl_2于体外建立化学性低氧模型;采用sh RNA技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α和Notch3基因;采用RT-PCR法检测MCF-7细胞中HIF-2α、Notch3和Hey1的m RNA水平;采用Western blot方法检测MCF-7细胞中HIF-2α、Notch3、Hey1、Snail和E-cadherin蛋白的表达水平;采用划痕实验和Transwell实验分别检测CoCl_2诱导的MCF-7细胞迁移和侵袭。结果显示,CoCl_2处理可使MCF细胞中HIF-2α、Notch3、Hey1和Snail蛋白表达水平升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05),促进MCF-7细胞迁移和侵袭(P<0.05);沉默HIF-2α基因表达可抑制CoCl_2诱导的Notch3和Hey1的m RNA和蛋白表达(P<0.05);抑制Notch3基因表达后,CoCl_2诱导的MCF-7细胞迁移和侵袭以及CoCl_2对Snail和E-cadherin蛋白表达的调节随之受到抑制(P<0.05)。以上结果表明,在CoCl_2化学性低氧环境下,HIF-2α可通过强化Notch3信号通路,进而导致Snail蛋白水平升高和E-cadherin蛋白水平下降,最终提高乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力。

Reelin基因缺失对小鼠小脑浦肯野细胞迁移与极化的影响

利用免疫荧光双标、尼氏染色技术对不同发育阶段Reelin基因缺失的reeler小鼠与野生型小鼠小脑浦肯野细胞的发生及迁移进行形态学观察,同时比较和测量其极性改变的角度.结果显示,reeler小鼠小脑皮质在发育过程中片层化发生紊乱,浦肯野细胞未按正确位置迁移,其胞体直径和极性化角度改变显著,与野生型小鼠比较,差异具有统计学意义(P<0.01).以上结果说明,Reelin基因缺失使小脑浦肯野细胞极性改变,迁移受阻,提示Reelin蛋白在小脑皮质片层化形成的过程中发挥了至关重要的作用.

黄芪诱导人羊膜上皮细胞WISH细胞株向神经细胞分化并抑制Notch1表达及促进细胞存活

本研究旨在探讨黄芪(astragalus)对人羊膜上皮细胞WISH细胞株向神经细胞分化、Notch1基因表达和细胞活力的影响。将人羊膜上皮细胞WISH细胞株分为3组,即黄芪诱导组(设立4个浓度亚组)、全反式维甲酸(alltransretinoic acid,RA)组和对照组。分别采用化学诱导剂RA和黄芪注射液诱导WISH细胞株分化为神经细胞,在诱导前后,应用免疫细胞化学方法染色鉴定神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、微管相关蛋白2(microtubule associated protein2,MAP-2)、神经干细胞巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进一步鉴定细胞多能性基因Oct4、Notch1、Hes1、神经干细胞标记物Nestin基因和神经元标记物NSE,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察细胞活力。倒置显微镜观察显示,WISH细胞株分别经RA诱导12h后、黄芪诱导24h后,由胞体伸出较长的轴突样和树突样突起,且有分支。诱导48h时,100μL/mL黄芪诱导组NSE和MAP-2阳性率低于RA诱导组(P<0.05),细胞活力较RA组高(P<0.05),两诱导组NSE、MAP-2和GFAP阳性率均高于对照组;而黄芪诱导组Nestin和GFAP阳性率高于RA组(P<0.05),两诱导组Nestin阳性率均低于对照组。同时RT-PCR检测到黄芪(100mL/mL)和RA诱导后多能基因Oct4、Notch1、Hes1表达低于对照组,而NSE表达增多。以上结果提示,黄芪和RA都可诱导WISH细胞株在体外分化为神经元样细胞,且黄芪于100μL/mL浓度时效果较好,黄芪诱导对细胞毒性较小,诱导过程中能抑制Notch1信号分子的表达。

制作诱导多能干细胞饲养层细胞最佳条件的研究

诱导多能干细胞（IPS）是近年来研究的热门,而IPS细胞体外培养需要饲养层细胞。小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）可分泌白血病抑制因子,作为IPS细胞的饲养层细胞。目的建立分离培养小鼠胚胎成纤维细胞的体系,制作高质量的IPS饲养层细胞。方法选妊娠11.5~15.5d的昆明小鼠制作MEF细胞,选择第三代MEF细胞用不同浓度丝裂霉素C处理,制作饲养层细胞,在饲养层细胞上接种IPS细胞,观察各组IPS细胞生长状态并计算克隆数目。结果妊娠第13.5天的胚胎制作的MEF,经10μg/ml的丝裂霉素C处理3h的饲养层细胞状态较好,其IPS生长状况最好,克隆数目和质量最佳。结论不同胎龄胚胎分离的MEF可用做IPS饲养层,第13.5d的胚胎分离的MEF细胞经10μg/ml的丝裂霉素C处理3h制成的饲养层细胞最适于IPS细胞生长。