导入式结合框架式教学法在本科医学院校生物化学教学中的应用

目的了解导入式结合框架式教学法在临床医学——基础生物化学教学中的应用效果,为探讨生物化学课程采用新的教学授课模式提供一定参考依据。方法选择2016级临床医学专业本科学生400人,随机分为实验组(1～8班)与对照组(9～16班)。两组学生在性别、年龄、基础成绩等方面,经统计学分析后,无显著性差异(P>0.05)。教学结束后,两组学生采用统一的标准和考核方法进行测试,并对期末考试成绩进行比较,发放自评调查问卷表来评价教学效果。结果采用导入式结合框架式教学法的实验组期末考试成绩为(79.6±7.5)分;采用传统教学法的对照组期末考试成绩为(71.8±8.9)分,两组比较有统计学意义(P<0.001)。问卷结果显示,针对提高学生的学习兴趣、学习主动性、课堂学习效率、语言表达能力等十个方面,两组数据差异有统计学意义(P<0.001)。结论导入式结合框架式教学模式在医学本科基础生物化学教学中的应用效果较好,可以有效提高学生的自主学习能力和分析解决问题能力,值得广泛推广应用。

基于生物信息学筛选三阴性乳腺癌潜在预后相关基因

目的筛选三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)预后相关基因,并探讨影响TNBC预后的可能机制。方法GEO和TCGA数据库下载表达谱数据,分别使用GEO2R和R语言程序包筛选TNBC和非三阴性乳腺癌差异基因;GO和KEGG富集分析差异基因的分子功能及信号通路;生存曲线和单变量Cox回归分析筛选预后相关基因,ROC曲线进一步验证;Cibersort算法探讨预后相关基因与免疫细胞浸润的关系;HPA数据库在线分析预后相关基因在正常乳腺组织中的分布。结果获得TNBC差异基因217个,富集在雌激素相关信号通路,生物过程主要富集在乳腺上皮发育、腺体发育、腺体形态发生等,细胞成分主要富集在微绒毛膜、细胞基底外侧膜等,分子功能主要富集于跨膜受体蛋白酪氨酸激酶活性等;筛选出7个预后相关基因,ROC曲线显示AUC值>0.8的有COL9A3;免疫浸润分析显示COL9A3表达与记忆B细胞和单核细胞的浸润程度呈负相关,与初始B细胞和中性粒细胞的浸润程度呈正相关。单细胞测序结果显示COL9A3主要分布在成纤维细胞中。结论筛选出COL9A3可能作为TNBC预后相关基因;TNBC的发生发展可能与雌激素受体相关信号通路、细胞基底外侧膜和基膜的改变以及单核细胞、中性粒细胞的浸润及EMT的进程有关,为TNBC临床治疗提供参考。

筛选与探讨乳腺癌的关键生物标志物及预后价值

目的基于生物信息学方法筛选乳腺癌的关键生物标志物,并分析其预后价值。方法利用TCGA和GEO数据库筛选乳腺癌的共有差异表达基因;DAVID数据库对差异基因进行GO和KEGG富集分析;单因素和多因素Cox分析获得具有显著预后价值的基因;利用UALCAN在线工具对关键基因进行病理特征分析。结果从TCGA和GEO数据库中分别获得1566和231个差异基因;通过共表达分析得到140个共有的差异表达基因;单因素和多因素Cox回归分析中发现S100B和TFF1在乳腺癌中具有独立预后价值;临床病理特征分析结果显示,S100B和TFF1在乳腺癌组织中的表达与其患者的性别、分期、淋巴结转移、TP53突变等均有显著差异。结论S100B和TFF1可作为关键生物标志物影响乳腺癌的发生和发展。

生物化学课程思政教育的实践与思考

生物化学是基础医学教育的主干课程。生物化学和思政教育紧密地结合在一起,有助于为中国医疗体系培养更高职业素养的医学人才,应该贯穿高等教育教学全过程。本文对课程思政的定位、融合方法及效果评价进行探讨,为改革中的生物化学课堂提供思路和方法。

利用生物信息学分析剪切因子QKI在胃腺癌中的表达及意义

目的利用生物信息学技术探讨胃腺癌(Stomach adenocarcinoma,STAD)预后相关的可变剪切(Alternative spli-cing,AS)事件,筛选预后相关的特异性剪切因子(Splicing factor,SF)QKI,为深入研究QKI在胃腺癌中的作用提供理论依据。方法TCGA数据库下载STAD相关数据,R语言构建可变剪切事件与剪切因子调控网络(AS-SF调控网络),生存分析筛选STAD预后相关剪切因子,TCGA与GEO数据比较胃腺癌中癌组织与癌旁组织的表达差异;GEPIA网站获取相关基因,R语言进行功能注释;TIMER在线工具分析在胃腺癌中特异性剪切因子与免疫微环境的相关性。结果通过构建AS-SF调控网络,筛选出胃腺癌中特异性剪切因子QKI,CELF2,SNRPN,BAG2O生存分析提示剪切因子QKI对胃腺癌患者的预后具有显著影响(P<0.05),QKI高表达组的胃腺癌患者总生存率更低。差异分析结果显示QKI在胃腺癌肿瘤组织的表达水平明显高于正常组织,QKI的表达与临床T分期有关。基因富集分析表明QKI主要富集在细胞周期等相关代谢通路。TIMER在线工具分析提示QKI的表达和拷贝数变异(Copy number variation,CNV)可以影响多种免疫细胞特别是巨噬细胞、树突细胞的免疫浸润。结论胃腺癌中存在可变剪切网络,特异性剪切因子QKI在胃腺癌中高表达并与胃腺癌患者的不良预后相关。在胃腺癌免疫微环境(Tumor immune microenvironment,TIME)中QKI的表达和拷贝数变异能够影响免疫细胞的浸润。

结直肠癌组织联合单细胞转录组测序筛选结直肠癌特异性细胞通讯

目的结直肠癌组织联合单细胞转录组测序筛选特异性细胞通讯。方法首先从GEO数据库下载结直肠癌组织测序数据(GSE110225、GSE87211)和单细胞测序数据(GSE132465);接着利用R语言limma包对组织测序数据进行差异分析,并对差异基因进行功能富集分析,STRING数据库和Cytoscape软件筛选核心基因;最后TSNE降维法对单细胞测序数据进行细胞注释,R语言CellChat包做结直肠癌细胞通讯分析,确定核心基因中参与的核心细胞通讯,并加以分析。结果获得结直肠癌差异基因303个,功能富集在趋化因子介导的信号通路、细胞对趋化因子的反应等方面;信号通路主要富集在细胞因子和受体的相互作用、趋化因子信号通路等方面;筛选后获得15个核心基因,主要参与趋化因子(Chemokine C-X-C motif ligand,CXCL)细胞通讯,巨噬细胞、单核细胞和成纤维细胞是信号发出者,内皮细胞是媒介,T细胞、B细胞和组织干细胞是影响者。结论CXCL信号通路在结直肠癌的发生发展中起着重要的细胞通讯作用。

铁代谢相关基因FLVCR1对肝细胞癌的预后影响及与免疫细胞浸润的相关性研究

目的 基于多个数据库探索猫白血病病毒C亚群受体1(feline leukemia virus subgroup C receptor 1,FLVCR1)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达、预后及与免疫细胞浸润的相关性。方法 利用UALCAN、GEPIA2、仙桃学术平台分析FLVCR1在HCC患者中的表达情况;利用GEPIA、GSCA分析FLVCR1与临床分期的关系;Linkedomics寻找与FLVCR1相关的基因,进一步进行GO、KEGG富集分析;利用TIMER数据库分析FLVCR1与免疫细胞浸润的相关性;Kaplan Meier plotter探索免疫细胞浸润高低对预后的影响;在GSCA分析FLVCR1与药物敏感性的相关性。结果 FLVCR1在HCC患者中高表达;FLVCR1表达与临床分期呈正相关;与FLVCR1正相关的基因主要富集在有机酸分解代谢等过程,与FLVCR1负相关的基因主要富集在染色体分离等过程;FLVCR1表达水平与四种免疫细胞包括CD4^(+)记忆T细胞、CD8^(+)T细胞、髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)、调节性T细胞(regulatory cells, Tregs)的浸润水平呈正相关且P<0.05;Kaplan Meier plotter数据库结果说明四种免疫细胞浸润与HCC患者不良预后相关;FLVCR1的表达与Dasatinib药物敏感性正相关,与Navitoclax负相关。结论 FLVCR1对HCC患者的不良预后与免疫细胞浸润密切相关。

地黄水提液对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及resistin基因mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨中药地黄水提液对2型糖尿病大鼠糖脂代谢和resistin基因表达的影响。方法:Wistar大鼠喂以高热量饲料加链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组、2型糖尿病模型组、地黄高、中、低剂量治疗组。8周后,以RT-PCR法检测大网膜脂肪组织resistin基因mRNA的表达,以SDS-PAGE检测其蛋白的表达。同时观察空腹血糖、空腹血胰岛素、血脂的含量和胰岛素抵抗指数的变化,研究不同剂量地黄水提液对上述各指标的影响。结果:地黄治疗组大鼠较模型组大鼠resistin基因mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05)。各治疗组FPG,FINS,TG,LDL,CH的含量及IR显著降低(P<0.05),而HDL则显著升高(P<0.05)。结论:地黄水提液通过抑制脂肪组织抵抗素基因的表达,降低血胰岛素抵抗水平、改善脂代谢紊乱,从而降低2型糖尿病大鼠血糖。

白花蛇舌草对人肝癌Bel7402细胞凋亡的影响

目的从基因水平研究白花蛇舌草对体外培养的人肝癌Bel7402细胞诱导凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用人肝癌Bel7402细胞常规体外培养,随机设定空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对照组、白花蛇舌草组。倒置显微镜直接观察细胞形态变化。HE染色法光镜下观察细胞形态改变,计算凋亡指数。采用MTT法检测白花蛇舌草对癌细胞的生长抑制作用。RT-PCR半定量法检测Bcl-xl、p53基因mRNA表达的变化。结果光镜下观察到白花蛇舌草组肿瘤细胞脱壁,有细胞出芽现象等凋亡形态改变;凋亡指数略低于5-Fu阳性对照组,但与空白对照组比较有显著差异(P<0.01);细胞抑制率略低于5-Fu阳性对照组,与空白对照组相比有显著差异(P<0.01);上调p53基因mRNA表达,降低Bcl-xl基因mRNA表达,与空白对照组比较均有显著差异。结论白花蛇舌草抑制人肝癌Bel7402细胞增长,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因Bcl-xl基因表达有关。

地黄水提液对2型糖尿病大鼠proinsulin基因表达的影响

目的:探讨地黄水提液治疗2型糖尿病(2-DM)的分子生物学机制。方法:以半定量RT-PCR法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别检测胰岛素原(proinsulin)基因转录及翻译水平的表达。同时观察空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)的含量,计算胰岛素分泌指数(IS)、β细胞功能指数(HβCI)的变化,来研究不同剂量地黄水提液对上述各指标的影响。结果:与2-DM模型相比,地黄治疗组大鼠proinsulin基因mRNA和蛋白表达显著增高(P<0.01),FPG显著降低,FINS、IS、HβCI升高,差异均有显著性。结论:地黄水提液通过上调2-DM大鼠proinsulin基因mRNA和蛋白表达,可改善胰岛β细胞功能,降低2-DM大鼠血糖。

枸杞多糖对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及脂联素基因表达的影响

目的观察枸杞多糖（LBP）对2型糖尿病（2-DM）大鼠胰岛素抵抗及肾周脂肪组织脂联素基因mRNA表达的影响。方法选用高脂饲料加小剂量链尿佐菌素建立2-DM大鼠模型，将2-DM大鼠随机分为模型对照组（水）和LBP高、中、低剂量组，每组10只，另选10只大鼠为正常对照组。各组灌胃8周后，RT-PCR法检测肾周白色脂肪组织脂联素基因mRNA水平，同时测定空腹血糖（FBG）、血清胰岛素（FINS）和血脂的含量，并计算胰岛素抵抗指数（IRI）。结果与模型组比较，LBP高、中剂量组2-DM大鼠肾周脂肪组织脂联素基因mRNA表达明显升高（P〈0．01），LBP各剂量组FBG、FINS、IRI、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平明显降低（P〈0．05～0.01）。结论LBP可通过增加脂联素基因mRNA表达，改善2-DM大鼠脂代谢紊乱，降低胰岛素抵抗，从而实现其降血糖作用。

TRIM11靶向调控miR-24-3p促进乳腺癌细胞系MCF7增殖和侵袭

目的探讨TRIM11靶向调控miR-24-3p对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响,明确TRIM11高表达与乳腺癌预后的相关性。方法免疫组化法检测TRIM11在31例乳腺癌和31例癌旁正常组织中的表达。用siRNA TRIM11和miR-24-3p慢病毒转染人乳腺癌MCF7细胞,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western bolt检测TRIM11、miR-24-3p mRNA和蛋白表达变化及相关性分析;荧光素酶报告实验验证miR-24-3p为TRIM11的潜在靶点;MTT法和Transwell检测细胞增殖数量、增殖活力和侵袭。结果 TRIM11在乳腺癌组织及MCF7细胞中表达显著增高(P<0.05)。TRIM11高表达患者生存率显著降低(P<0.05)。siRNA TRIM11转染显著抑制MCF7细胞中TRIM11表达,而且抑制MCF7细胞增殖数量、增殖活力和侵袭能力(P<0.05)。miR-24-3p显著降低野生型3'-UTR TRIM11荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型没有作用。miR-24-3p mRNA在MCF7细胞下调,miR-24-3p抑制MCF7细胞TRIM11蛋白和mRNA表达,miR-24-3p mRNA与TRIM11 mRNA在MCF7细胞中表达显著负相关(P<0.05),miR-24-3p抑制MCF7细胞增殖数量、增殖活力和侵袭能力(P<0.05)。结论 TRIM11在乳腺癌组织及MCF7细胞中表达上调,并可能通过靶向调控miR-24-3p促进乳腺癌细胞增殖和侵袭,进而影响乳腺癌预后,TRIM11/miR-24-3p轴有望成为治疗乳腺癌的新靶点。

翻白草对2型糖尿病大鼠血糖的影响

目的:研究中药翻白草水煎剂对2型糖尿病大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素敏感指数(insulinsensitivityindex,ISI)的影响。方法:80只Wistar大鼠随机抽取10只作为正常对照组,其余大鼠用高热量饲料加小剂量链脲佐菌素的方法建立实验性2型糖尿病大鼠模型,造模动物筛选后,随机分为二甲双胍对照组、模型对照组、翻白草大剂量组、翻白草中剂量组、翻白草小剂量组,10只/组,用翻白草水煎剂治疗8周,测定空腹血糖、空腹胰岛素,计算ISI。结果:模型对照组空腹血糖升高至(15.97±1.24)mmol/L,空腹胰岛素水平升高为42.43±4.25)mIU/L,ISI降低到-6.34±0.59),与正常((对照组比较差异均有显著性意义P<0.01);翻白草大、中、小剂量组(空腹血糖、空腹胰岛素水平下降明显,ISI升高,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。结论:翻白草通过增强胰岛素的敏感性从而改善胰岛素抵抗,降低2型糖尿病大鼠的血糖。

半枝莲多糖的抗肿瘤作用及其调节免疫的实验研究

目的:研究半枝莲多糖抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法:采用移植性H22肝癌小鼠,随机分为阴性对照组、半枝莲多糖组、猪苓多糖组。连续给药10d后,测定其抑瘤率、胸腺指数和脾指数,ELISA法测定小鼠血清IL-2的含量;小鼠碳粒廓清法测定单核吞噬细胞功能,进行组间比较。结果:半枝莲多糖可明显抑制小鼠HepA瘤,抑瘤率可达34.35%,并且能够提高荷瘤小鼠免疫器官重量、血清IL-2的活性及增强单核吞噬细胞功能。结论:半枝莲多糖有明显抗肿瘤作用,其机制可能是通过提高机体免疫功能实现的。

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras、C-myc基因表达的影响

目的为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras、C-myc基因表达的影响。方法运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量。结果树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P<0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论树舌多糖GF可通过降低N-ras、C-myc mRNA及蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。

翻白草合剂对2型糖尿病大鼠海马神经生长因子及神经纤维蛋白含量的影响

目的:探讨翻白草合剂对2型糖尿病(type2diabetesmellitus,T2DM)大鼠脑海马神经生长因子(nervegrowthfactors,NGF)、神经元纤维蛋白(neurofibrousproteins,NF含量的影响。)方法:80只Wistar大鼠随机选取10只作为正常对照组,余下的70只用高热量饲料加小剂量链脲佐菌素建立实验性T2DM大鼠模型,40只大鼠造模成功,随机分为T2DM模型组、翻白草合剂大剂量组、翻白草合剂中剂量组、翻白草合剂小剂量组,10只/组,用翻白草合剂治疗8周后,采用免疫组化法观察各组大鼠脑海马NGF、NF含量。结果:T2DM模型组大鼠脑海马NGF、NF免疫阳性细胞数目明显降低,与正常对照组比较,差异具有显著性意义(P<0.01);翻白草合剂组大鼠脑海马神经元NGF、NF免疫阳性细胞数目与T2DM模型组比较明显升高,差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:T2DM大鼠脑海马NGF、NF含量下降,翻白草合剂可增加T2DM大鼠脑海马NGF、NF的表达。

Caspase-3在牛膝多糖诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

为研究牛膝多糖对肝癌BEL-7402细胞凋亡及相关蛋白Caspase-3表达的作用,采用不同浓度ABPS作用于肝癌BEL-7402细胞48h,MTT法检测细胞生长抑制率,荧光显微镜观察细胞形态变化,Western Blot检测Caspase-3蛋白表达.实验结果表明,ABPS对BEL-7402细胞具有生长抑制作用,促进细胞凋亡,作用机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.

p75基因与2型糖尿病大鼠脑细胞凋亡相关性研究

目的探讨2型糖尿病大鼠p75基因表达与脑细胞凋亡的关系。方法选取2型糖尿病大鼠及正常对照组大鼠各10只,采用RT-PCR法检测脑组织p75基因mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果2型糖尿病大鼠P75基因mRNA表达上调,且脑组织细胞凋亡明显增加。结论2型糖尿病大鼠脑组织细胞凋亡增加,与p75基因表达呈正相关。

DNA甲基化与非肿瘤性疾病的研究进展

DNA甲基化是非DNA序列变化所致的基因修饰作用，这种基因修饰作用可在细胞分裂中进行遗传并影响DNA和其他分子的相互作用。DNA甲基化发生在CpG双核苷酸序列内，其5’端的胞嘧啶环在复制完成后添加一个甲基，导致DNA结合蛋白结合的部位即DNA双螺旋凹槽的外形发生改变。DNA甲基化不但与肿瘤的发生有关，还与许多其他疾病如动脉粥样硬化、糖尿病、阿尔茨海默病等相关联。本文对DNA甲基化与非肿瘤性疾病的关系予以综述。