人胚肺细胞系(MU-L1)生物学特性研究

目的:对新建人胚肺细胞系(MU-L1)的生物学特性进行评价,以期建立可用于疫苗生产的人二倍体细胞株.方法:使用不同培养基及血清、不同血清浓度和传代比例培养MU-L1细胞,通过细胞形态、增殖速率和生长动力学等进行比较分析,筛选出较适宜的培养条件,用适宜的培养条件连续培养细胞至生命周期结束.传代过程中检查无菌、支原体和外源病毒因子,并进行染色体核型分析.结果:在常用培养基(MEM、DMEM、M199、DME/F12和PRMI1640)、胎牛血清和新生牛血清中MU-L1细胞均良好生长;按1∶4传代比例,使用含10%新生牛血清的MEM培养基培养,可培养至67代(世代),在生命周期的不同阶段经液氮冻存,复苏活率在91.56%~98.92%,生长良好.染色体核型为正常人二倍体核型,2n=46,无菌、支原体和外源病毒因子检查均为阴性.结论:MU-L1为正常人二倍体细胞系,具备作为病毒性疫苗基质进一步研究和生产应用的价值.

基于流感疫苗生产用MDCK细胞的安全性评价

随着流感疫苗产业升级,传统的鸡胚基质疫苗已经满足不了大众需求,世界卫生组织建议使用细胞来代替鸡胚生产流感疫苗,MDCK细胞被认为是最适合于流感疫苗生产的细胞系之一,但由于MDCK细胞会使免疫缺陷型小鼠形成肿瘤,因此其安全性存在争议。本文阐述了MDCK细胞的安全性问题及生产中的应对策略,旨在为细胞基质流感疫苗的生产提供理论基础。

动物细胞培养基质片状载体的研究及应用进展

以聚酯纤维为基质的片状载体具有良好的耐酸碱性、耐热性、生物相容性以及不可生物降解、促进细胞黏附和生长等优点。片状载体无动物源性成分,生物安全性高,是细胞培养基质的首选载体之一。近年来,随着生物技术的发展,广泛应用于细胞基质生物制品等研发及生产中。本文对片状载体的结构和细胞培养特点以及在疫苗生产、细胞治疗和组织工程等中的应用作一综述,为片状载体技术后续的进一步研发和应用提供理论依据。

不同细胞工厂培养Vero细胞增殖效果

为建立细胞工厂筛选方法,比较市售三个厂家(Corning、Thermo、兰州百灵)细胞工厂培养Vero细胞的生长增殖情况.通过Vero细胞光学显微镜观察、生长曲线、贴壁率、流感病毒增殖对比指标,比较三个厂家细胞工厂培养Vero细胞增殖效果.结果显示,光学显微镜观察三个不同来源的细胞工厂培养的Vero细胞形态变化无明显生长差别,连续传代培养Vero细胞,细胞生长良好.三种不同细胞工厂均能较好促进细胞的生长增殖且细胞生长曲线均呈“S”型;贴壁率分别为(86.20±0.62)%、(94.50±0.70)%、(89.53±0.60)%.甲型H5N1流感病毒感染细胞48 h后,出现明显细胞病变,且血凝效价HA为1∶16,感染性滴度为2.5.三个不同来源的细胞工厂均能支持Vero细胞培养及甲型H5N1流感病毒的增殖,可为细胞工厂筛选提供参考.

动物细胞培养用片状载体特性分析

目的探讨不同片状载体的表面特性及对不同细胞的培养效果。方法选择3种片状载体(A、B、C),对其材料进行化学元素组成分析,对经0.1 mol/L NaOH溶液预处理前后的载体进行接触角检测。通过测定Vero、MDCK和MRC-5细胞在3种载体上的贴附效果和葡萄糖消耗量,并利用荧光染色法观察细胞生长状态,比较3种载体的细胞贴附率和培养效果。结果3种载体均主要由C、H、O 3种元素组成,且含有少量的N和S元素。预处理前,载体B的接触角为0°,显著低于载体A[(109±3.13)°]和C[(121±6.82)°](F均为709.1,P均<0.0001),亲水性较强,载体A和C亲水性较差;预处理后,3种载体表面的接触角均为0°,差异无统计学意义(F=0.0694,P>0.05),均亲水。培养3 h内,3种载体的细胞贴附率均在80%以上,细胞在载体纤维上均致密,长势均匀,葡萄糖消耗量曲线均趋于“S”型,细胞连续培养效果良好。葡萄糖消耗总量载体A与C基本一致,载体B低于A和C。结论对3种片状载体的化学元素组成和亲疏水特性关系进行了分析,并对Vero、MDCK和MRC-53种细胞的贴附率及培养效果进行了评价,为片状载体的后续研究及生产应用提供了参考。