RBM20和MURC双基因杂合变异对心肌细胞结构和生物学特性的影响

目的探讨RNA结合基元蛋白20(RBM20)和肌肉相关卷曲螺旋蛋白(MURC)双基因杂合变异对人心肌细胞AC16(成人左心室心肌细胞系)结构和生物学特性的影响。方法构建对照组、空载组、野生组、MURC或RBM20单基因突变组、RBM20和MURC双基因突变组的心肌细胞AC16;采用Western blotting、免疫荧光染色和实时荧光定量PCR观察心肌细胞中RBM20和MURC定位、细胞表面积、骨架排列、骨架相关蛋白、细胞极性、细胞内钙浓度;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用Ki-67染色检测心肌细胞增殖;采用划痕实验检测心肌细胞迁移。结果与RBM20或MURC单基因突变相比,RBM20和MURC双基因突变对心肌细胞结构和生物学特性影响更显著,表现为细胞表面积增大,细胞肥大相关基因肌球蛋白重链7和α肌动蛋白基因m RNA表达升高,骨架排列紊乱度升高,骨架蛋白β-tubulin和Vinculin荧光强度降低(均P<0.01);极性蛋白Part6荧光强度升高(P<0.05);心肌细胞凋亡率升高,增殖活性下降,迁移率增高,细胞内钙离子浓度升高(均P<0.01)。结论RBM20和MURC双基因杂合变异使心肌细胞结构及生物学特性发生改变,表现为细胞表面积增大,骨架排列紊乱,极性改变,凋亡率和迁移率升高,增殖活性和钙处理能力降低。