不同产地三叶青中重金属元素含量测定研究

目的:建立三叶青中5种重金属元素砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)、镉(Cd)和铅(Pb)含量测定的方法。方法:三叶青样品经过前处理后,采用原子荧光光谱法测定As和Hg,采用原子吸收光谱法测定Cu、Pb和Cd。结果:5种重金属元素检测方法线性关系良好,r值均大于0.9992,加样回收率为95.31%~99.87%,RSD为2.54%~6.95%。结论:不同产地的三叶青样品重金属元素检测结果按《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》规定计算,Pb、As、Cu、Hg、Cd均未超标,该方法加强了三叶青重金属检查,为三叶青药材的规范化种植和安全评价提供实验依据。

三叶青叶黄酮类化学成分的UPLC-MS/MS定性分析及HPLC含量测定

目的定性、定量分析三叶青叶黄酮类化学成分。方法采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)对三叶青叶化学成分进行鉴定,色谱柱为C_(18) Luna Omega(2.1 mm×100 mm,1.6μm);流动相:乙腈-水(50∶50,V/V);流速0.4 mL/min;柱温35℃;进样量5μL;全扫描模式扫描。采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定三叶青叶中5种碳苷黄酮的含量。色谱柱为Ultimate XB C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.2% H_3PO_4(10∶90,V/V);流速为1 mL/min;检测波长为350 nm;室温;进样量20μL。结果三叶青叶中共鉴定出6个化学成分,其中5个黄酮成分的保留时间、光谱图和质谱碎片离子信息与对照品一致,分别为异荭草素、荭草素、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、异牡荆素。HPLC测定8个不同产地来源的样品中上述5种成分含量,各成分线性关系良好(r> 0.9997),加样回收率在95.0%～105.0%之间。结论三叶青叶子中主要含2类碳苷黄酮,即荭草素类和牡荆素类;本研究建立的方法可定性、定量分析分析三叶青叶中主要化学成分,可用于控制药材质量。

三叶青叶化学成分鉴定及其总黄酮含量测定研究

目的:建立超快速液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(RRLC-Q-TOF-MS法)快速鉴定三叶青叶化学成分,根据鉴定的黄酮成分建立相适应的紫外-可见分光光度法(UV-Vis法),测定三叶青叶中总黄酮的含量。方法:RRLC-Q-TOF-MS法采用CORTECS C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.25 m L·min^(-1),柱温45℃;飞行时间质谱采用负离子全扫描模式,数据采集范围m/z 50~1 000,通过一级质谱和二级质谱、相关文献及对照品推测鉴定化学成分。根据鉴定的黄酮进行3种总黄酮显色方法比较,确定三乙胺法显色,以UV-Vis法在400 nm波长处测定三叶青叶总黄酮含量。结果:采用RRLC-Q-TOF-MS共鉴定了三叶青叶中异荭草苷、荭草苷、异荭草素鼠李糖苷、荭草素鼠李糖苷、牡荆苷、异牡荆苷、牡荆素鼠李糖苷、异牡荆素鼠李糖苷共8个主要黄酮类成分;采用UV-Vis法测定三叶青叶总黄酮含量,以牡荆苷计,质量浓度在1.956~9.780μg·m L^(-1)范围内与吸光度值呈良好线性关系(r=0.999 5),平均加样回收率99.8%(RSD=3.4%),三叶青叶总黄酮含量范围为13.38~28.67 mg·g^(-1)。结论:本文建立RRLC-Q-TOF-MS联用技术,为鉴定三叶青叶的黄酮成分提供了一种快速、高效的定性分析方法;建立以三乙胺显色的UV-Vis法定量分析三叶青叶总黄酮方法准确,为综合评价三叶青叶的质量提供参考。

三叶青叶指纹图谱研究及8种酚类成分含量测定

采用超高效液相色谱建立三叶青叶指纹图谱,并同时测定8种酚类成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异荭草苷、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆苷、异牡荆苷)的含量,为三叶青叶质量评价提供依据。采用UHPLC法,Welch UHPLC Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸(含5%甲醇)水梯度洗脱,流速0.4 m L·min^(-1),柱温30℃,采用国家药典委员会"相似度评价软件2004AB"处理分析,建立41批不同产地三叶青叶的指纹图谱,共标定15个共有峰并对不同产地进行聚类分析,然后选择其中8个主要的酚类成分作为定量指标,建立UHPLC同时测定8种主要酚类成分含量的方法,经方法学验证该研究建立的三叶青叶指纹图谱和8种酚类成分含量测定方法简便有效、灵敏、准确,可为综合评价三叶青叶的质量提供参考。