生物化学双语教学探索

生物化学双语教学是医学生掌握生物化学领域最新知识和技能,具备国际交流能力的需要。针对本校生物化学双语教学的实施情况及实施效果,对双语教学中存在的问题及其解决办法进行探讨。

研究生高级生物化学教学改革的探索与实践

研究生的教学是以培养和提高其综合科研素质为目的，高级生物化学课程，是基础医学和临床医学各学科和各专业研究生的一门重要基础课程，总结了多年来本课程教学改革的探索与实践，以及在修订教学大纲、更新教学内容、培养学生综合素质和创新能力等方面的体会。

提高医学生物化学教学质量的实践与体会

生物化学是一门重要的医学基础课，也是一门较难掌握的课程。该文总结了在生物化学教学实践中，如何采用先进的教学手段以及多种教学方法来活跃课堂氛围，提高学生的学习兴趣，从而提高教学质量，培养学生的综合素质。

生物化学实验教学的几点体会

生物化学是一门重要的医学教育基础课，实验是生化教学中的一个重要环节。为了培养学生的动手能力及分析问题、解决问题的能力，并激发学生对本学科的兴趣，提高生物化学实验课的教学质量，针对实验中存在的一些问题总结了一些教学体会，并在教学方式上做了一些有益的尝试。

以建设精品课程为契机,提高生物化学教学水平

生物化学是生命科学中重要的基础学科，也是基础医学和，临床医学之间的桥梁，经过多年的教学改革与实践，取得成效，介绍该课程在申报国家级精品课程中的经验及体会。

可溶性细胞间粘附分子-1与乙型肝炎患者肝细胞损伤和肝纤维化关系的研究

【目的】探讨可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1)在慢性乙型病毒性肝炎 (CHB)、重型乙型病毒性肝炎 (CSH)及肝硬化 (LC)患者血清中的水平及其与肝纤维化的关系。【方法】sICAM 1的检测采用ELISA法 ,并同时采用放免法检测血清透明质酸 (HA)、Ⅲ型前胶原蛋白 (PⅢP)、层粘蛋白 (LN)及Ⅳ型胶原 (CⅣ ) ;以2 0例健康献血员作对照 (NC)。【结果】CHB、CSH、LC患者血清sICAM 1水平均高于对照组 ,血清sICAM 1水平随着患者肝损害的加重而升高 ,并且其升高与LN、CⅣ、PⅢP、HA水平的升高相关。【结论】CHB、CSH、LC患者血清sICAM 1水平升高 ,可反映肝细胞损伤程度及肝纤维化程度。

转化生长因子β_1与乙型肝炎患者肝细胞损伤和肝纤维化的关系

目的 观察慢性乙型肝炎、重型乙型肝炎和肝硬化患者血清转化生长因子β1 (TGF-β1 )与肝细胞损伤、肝纤维化的关系。 方法 采用酶联免疫吸附试验测定 2 0例健康献血员、70例不同临床分型乙肝患者血清 TGF-β1 ,放射免疫法检测血清透明质酸 (HA)、 型前胶原蛋白 (P P)、层粘连蛋白 (L N)及 型胶原 (C )。 结果 (1)慢性乙肝 (轻、中、重度 )、重型乙肝、肝硬化患者血清 TGF-β1 水平 (pg/ m L )分别为 10 9.2 9± 5 5 .5 9,2 10 .0 0±12 0 .74 ,4 97.73± 2 76 .73,1138.4 4± 5 80 .4 5 ,10 17.0 6± 5 0 2 .5 0 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 ) ;明显高于对照组 (4 3.0 0±10 .5 1,P<0 .0 1)。 (2 )血清 TGF- β1 升高与血清丙氨酸氨基转移酶 (AL T)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、凝血酶原活动度 (PTA)、胆碱酯酶 (CHE)相关 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。 (3)血清 TGF-β1 与 P P、C 、L N、HA呈正相关 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。 结论 TGF- β1 在肝纤维化的发病机制中发挥重要作用 ,血清 TGF- β1

帕金森病大鼠模型纹状体中谷氨酸、γ-氨基丁酸与多巴胺之间的关系

目的:了解帕金森病大鼠模型纹状体内谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(gama-aminobutyric acid,GABA)和多巴胺(dopamine,DA)之间的关系,从而进一步探讨帕金森病的发病机制。方法:动物分为溶剂对照组、假手术组和帕金森模型组。大脑右侧黑质致密部和前脑内侧束两点注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)建立帕金森病大鼠模型,溶剂对照组注入生理盐水,假手术组不注射任何药物,采用脑微透析术于建模后第3,4,5,6周连续动态透析大鼠毁损侧纹状体,结合高效液相色谱(HPLC)动态监测各组谷氨酸、GABA和多巴胺的变化。结果:(1)PD组纹状体内多巴胺含量到第5周仅为溶剂对照组和假手术组的1/5;(2)谷氨酸含量随建模时间逐渐升高,到第6周PD组是溶剂对照组和假手术组的1倍以上;(3)GABA含量呈下降趋势,到第6周约降至溶剂对照组、假手术组的1/2。结论:帕金森病大鼠模型纹状体内谷氨酸的变化与多巴胺分泌可能存在某种联系;GABA含量随建模时间的增加而下降。

肝癌细胞67kDa层粘连蛋白受体的表达

背景与目的:本实验室最近发现人肝癌细胞SMMC-7721表达的67kDa层粘连蛋白受体(67kDaLamininreceptor,67LR)与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞L-02表达的67LR,而67LR在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达水平尚不清楚。本研究旨在探讨67LR在肝癌细胞中的表达,及其与层粘连蛋白结合能力的关系。方法:以人肝癌细胞SMMC-7721、HepG2和正常肝细胞L-02为材料,采用131I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力;采用流式细胞术和RT-PCR分析67LR蛋白和mRNA的表达水平。结果:(1)相同条件下SMMC-7721、HepG2细胞与层粘连蛋白特异结合量分别为(17.54±0.49)ng/105cell、(11.18±0.53)ng/105cell,而L-02细胞的特异结合量为(8.36±0.48)ng/105cell,表明肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞(P<0.01);(2)流式细胞术分析,SMMC-7721细胞的67LR阳性表达率为34.7%,L-02细胞的67LR阳性表达率为55.3%,而HepG2细胞则几乎不表达67LR;(3)RT-PCR产物进行半定量分析发现,两株肝癌细胞的67LRmRNA表达水平明显高于L-02细胞。结论:肝癌细胞与层粘连蛋白的结合能力明显高于正常肝细胞L-02,而细胞膜表面的67LR水平却低于L-02细胞,提示SMMC-7721细胞67LR的亲和力可能高于L-02细胞,而且还涉及其它层粘连蛋白受体。

大鼠胚胎中脑腹侧细胞和大脑皮质神经干细胞移植治疗帕金森病大鼠的比较

体外培养的大鼠胚胎中脑腹侧(VM)细胞和大脑皮质神经干细胞(NSCs)分别移植入帕金森病(PD)模型大鼠毁损侧纹状体。移植后2,4,8周采用脑微透析术结合高效液相色谱(HPLC)动态监测毁损侧纹状体内多巴胺水平,同期观察大鼠的旋转行为。移植后8周采用免疫组化法检测植入细胞的存活及分化情况。结果显示:移植后4,8周VM移植组多巴胺水平明显高于NSCs移植组或对照组,同期VM移植组较其余两组旋转行为有显著改善,而NSCs移植组与对照组多巴胺水平及旋转行为无显著差异。VM移植组较NSCs移植组植入的细胞易存活和分化。以上结果提示,大鼠胚胎VM细胞移植治疗PD模型的疗效明显优于胚胎大脑皮质NSCs。

乙型病毒性肝炎患者血清可溶性白细胞介素2受体测定的意义

检测乙型病毒性肝炎患者血清可溶性白细胞介素 2受体 (sIL - 2R)的水平及其与血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、凝血酶原活动度 (PTA)、胆碱酯酶 (ChE)及乙肝病毒复制标志物之间的关系。采用酶联免疫法 (ELISA)检测 77例乙型病毒性肝炎患者和 2 0例正常人血清sIL - 2R含量。乙型病毒性肝炎患者血清sIL - 2R水平显著高于正常人 ,并且其升高与ALT、AST、PTA、ChE相关 ,与乙肝病毒的存在和复制与否无关。急性、慢性、重型乙型病毒性肝炎及乙肝后肝硬化患者血清sIL -

肝选择性未知基因loc91614的功能预测及表达研究

目的:预测肝脏组织选择性未知基因loc91614的功能,实验验证其基因表达。方法:构建含未知基因的肝组织选择性细胞通讯(LSCC)基因网络,再进行聚类、文献挖掘、基因本体、KEGG通路、Transfac转录因子结合位点等分析,用以预测loc91614的功能特征,最后,从mRNA和蛋白质水平验证其基因表达。结果:获得21个节点的LSCC基因网络,聚类显示loc91614与apob密切关联;文献挖掘显示基因与肝组织、胞质、脂等关键词显著相关;GO功能富集分析揭示loc91614具有细胞通讯、信号转导、细胞内信号级联的功能,有7个TFBS可对含loc91614的靶基因集进行调控,loc91614基因在肝细胞表达明显高于肝癌细胞。结论:loc91614可能分布于肝细胞的胞质中,很可能在肝组织中发挥细胞通讯等功能,也可能参与肝脏的糖、脂代谢过程,在肝细胞选择性高表达。

噻莱昔布(celecoxib)对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的:研究环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX2)抑制剂celecoxib对人骨肉瘤细胞MG63抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:MTT比色观察celecoxib的细胞毒性作用及其浓度依赖性;Hoechst33258荧光染色、透射电子显微镜和TUNEL观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及其时间依赖性。结果:celecoxib分别以10、20、40、80μmol/L作用后,细胞生长受到不同程度抑制;荧光显微镜、电镜和TUNEL观察到细胞胞浆浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。流式细胞仪显示celecoxib40μmol/L作用24、48、72h后,细胞凋亡率分别与对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:celecoxib能抑制人MG63细胞增殖,诱导细胞凋亡。

弓形虫主要表面抗原P30的克隆、表达与纯化

目的 通过分子克隆技术获取弓形虫主要表面抗原P30蛋白。方法 自行设计引物,通过PCR扩增获得P30基因片段,采用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切,定向克隆到载体pThioHis中,转化大肠杆菌Top10,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,融合蛋白通过镍结合树脂(ProBond^(TM)Resin)进行纯化,并用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)鉴定。结果 PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定,均与预期设计相符合。DNA序列分析结果表明,除一个同义突变,其余均与文献报道相符。IPTG诱导表达后经层析纯化获得46kDa含P30的融合蛋白。结论 通过定向克隆、表达与纯化,获得含P30的融合蛋白。

改良植块贴壁法建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型

目的:建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型。方法:参照传统的主动脉平滑肌细胞培养方法,在动物体重、中膜的取材、植块贴壁过程、培养基选择、细胞传代等多个关键环节进行改进,成功建立了大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型;用倒置相差显微镜对培养细胞进行形态学观察,用特异性α-SM-actin单克隆抗体免疫组织化学对培养细胞进行鉴定。结果:台盼蓝检查传代细胞的存活率大于96%;培养细胞排列呈梭形及“峰”“谷”状的结构特征;免疫组织化学染色鉴定培养细胞中的平滑肌细胞的纯度为97%。结论:此培养方法可作为研究血管平滑肌细胞生物学行为和移植血管再狭窄机制的有效模型。

SMMC-7721肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体的分离纯化

分离纯化肝癌细胞的 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR) ,以便进一步研究 6 7LR的结构、功能及其在肝癌浸润、转移过程中的作用 .以SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞为材料 ,采用13 1I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力 ;亲和层析法分离纯化层粘连蛋白受体 ,用SDS PAGE、放射自显影及体外竞争结合实验进行鉴定 .在相同条件下SMMC 772 1肝癌细胞与层粘连蛋白特异结合量为 17 5 4± 0 4 9ng 10 5细胞 ,而L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白的特异结合量为 8 36± 0 4 8ng 10 5细胞 .经过亲和层析 ,从SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞均可获得纯化受体 ,SDS PAGE显示为单一条带 ,分子量为 6 7kD ,放射自显影及体外竞争结合实验表明其具有较强的与层粘连蛋白结合的活性 .体外竞争结合实验表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞层粘连蛋白受体 (772 1LnR)的抑制率可达到 96 2 7± 2 2 9% ,而L 0 2正常肝细胞层粘连蛋白受体 (L 0 2LnR)的抑制率为 4 8 71± 3 79% ,这说明 772 1LnR与层粘连蛋白的亲和力明显高于L 0 2LnR(P <0 0 0 1) .结果表明 ,与L 0 2肝细胞比较 ,SMMC 772 1肝癌细胞具有与层粘连蛋白较强结合能力的特异受体 ,并从肝癌细胞膜上分离纯化到与层粘连蛋白有较强亲和力的 6

cAMP对胰岛素刺激的NIH3T3细胞丝裂原激活蛋白激酶活性的抑制作用

目的 探讨 c AMP- PKA信号途径对胰岛素激活的 Ras-丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号途径的影响。 方法 以 3-异丁基 - 1-甲基黄嘌呤 (IBMX)提高细胞内环腺苷酸 (c AMP)浓度 ,藉四唑蓝比色法 (MTT法 )和蛋白免疫印迹试验分别观察 c AMP对胰岛素刺激的小鼠成纤维细胞 (NIH3T3细胞 )的生长增殖和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。 结果 IBMX(0 .5 mmol/ L )抑制静息的和胰岛素 (10 m U / m L )刺激的 NIH3T3细胞的增殖 ,作用呈时间依赖性。在胰岛素 (10 m U/ m L)刺激的 NIH3T3细胞 ,MAPK出现酪氨酸磷酸化 ;而以 IBMX(0 .5 mmol/L)预处理细胞 30 min后 ,再以胰岛素作用 10 min,胰岛素刺激的 MAPK的酪氨酸磷酸化受抑制。 结论 c AMP可通过抑制 MAPK磷酸化活化对

肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体N-糖链结构与功能的变化

探讨肝癌细胞与正常肝细胞 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR)N 糖链结构与功能的差异 .采用流式细胞术检测SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞膜表面 6 7LR的表达 ,并分别从这 2株细胞分离纯化到高亲和力的 6 7LR ,利用凝集素结合分析其糖链结构 ,并用肽 N 糖苷酶水解N 糖链 ,观察糖链在与层粘连蛋白结合过程中的作用 .结果发现 ,L 0 2细胞膜表面 6 7LR表达的阳性率为5 5 3% ,而SMMC 772 1细胞为 34.7% ,这两株细胞 6 7LR与伴刀豆素 (ConA)的结合能力无显著差异 ,但SMMC 772 1细胞的 6 7LR与麦胚凝集素的结合能力明显高于L 0 2细胞的 6 7LR ,说明 2株细胞 6 7LR的糖链结构存在显著差异 .当N 糖链被切除后 ,SMMC 772 1细胞的 6 7LR与层粘连蛋白的结合能力明显下降 ,而L 0 2细胞则没有变化 .这些资料表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白结合能力的差别 ,以及两株细胞的 6 7LR与层粘连蛋白结合能力的不同 ,很可能是由于这两株细胞的层粘连蛋白受体的N

C_2-神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡

目的 观察无血清条件下神经酰胺对人肝癌细胞 SMMC- 772 1细胞凋亡的诱导作用。 方法 采用 AO-EB荧光染色、流式细胞术 DNA倍体分析和 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。 结果 终浓度 10 μmol/ L 的 C2 -神经酰胺作用 2 4 h,可诱导无血清培养的 SMMC- 772 1细胞发生凋亡 ,AO- EB染色可见典型的细胞凋亡表现 ,细胞核固缩、浓染、裂解 ,细胞质芽突脱落成为凋亡小体。经流式细胞仪检测可见典型的亚二倍体峰。DNA凝胶电泳呈现典型的 180 - 2 0 0 bp的 DNA梯状条带。 结论 C2 -神经酰胺可诱导 SMMC- 772 1细胞凋亡。